奶牛乳房炎早期诊断试剂盒应用效果试验

2018-04-13周庆民冯万宇

中国乳业 2018年3期

文/周庆民　冯万宇*　徐馨　张艳

（黑龙江省兽医科学研究所）

乳房炎是奶牛生产中最常见、最多发的疾病之一[1～3]，由于奶牛乳房炎发病原因复杂，治愈较难，其一旦发生，带来的损失巨大[4～6]，因此，对于奶牛乳房炎必须早期诊断，采取有效措施在患病的初期就抑制或控制其发展，快速恢复，同时采取预防措施，最大限度地减少因本病的发生造成的经济损失[7～9]。为了验证奶牛乳房炎早期诊断试剂盒临床使用效果，本文对此进行了应用效果试验，取得了理想结果。

1　材料与方法

1.1　试验奶牛

黑龙江省齐齐哈尔市梅里斯区奶牛养殖繁育基地，品种为中国荷斯坦奶牛。选择3～6岁、产犊3～7个月的健康、无乳房炎临床症状产奶牛318头。

1.2　试验药品

奶牛乳房炎早期诊断试剂盒，黑龙江省兽医科学研究所研制生产，生产批号为20150726；奶牛隐性乳房炎诊断液，黑龙江省兽医科学研究所研制生产，生产批号为20150717。

1.3　饲养管理

舍饲，用TMR饲料每日饲喂3次，精饲料以玉米、豆粕为主，粗饲料以青贮玉米、羊草为主，精饲料与粗饲料搭配均匀，科学合理，营养均衡。饲料配方：青贮玉米43.8%、羊草10.5%、胡萝卜1.2%、玉米22.6%、麸皮6.3%、豆粕13.7%、磷酸氢钙0.5%、石粉0.9%、食盐0.5%、产奶净能6.967MJ/kg DM、粗蛋白质17.6%、酸性洗涤纤维20.1%、钙0.66%、磷0.42%。提供充足饮水，自由运动，机械化挤奶，1日3次。

1.4　试验方法

常规饲养，专人管理。不改变奶牛原生产环境、饲养管理人员、饲喂方法、挤奶方法等。在挤奶前，按挤奶操作程序将乳头水洗、消毒、擦净，挤去前3把奶后，挤入采样器10mL，编号，同时记录奶牛耳号，低温保存。

同时用奶牛乳房炎显微镜体细胞计数法、奶牛隐性乳房炎诊断液、早期诊断试剂盒[10]对同一奶样进行检测。

1.5　判断标准

显微镜体细胞计数法判断标准：每毫升含体细胞个数，单位为万/mL。“-”为29万个/mL以下；“±”为30万～49万个/mL；“+”为50万～79万个/mL；“++”为80万～149万个/mL；“+++”为150万～499万个/mL；“++++”为500万个/mL以上。

表1　显微镜体细胞计数法检测结果

表2　隐性乳房炎诊断液检测结果

表3　早期诊断试剂盒检测结果

奶牛隐性乳房炎诊断液判断标准：凝乳试验无变化、混合物呈液状、盘底无沉淀物可见（体细胞数在29万个/mL以下），判断为“-”；凝乳试验略有变化、混合物呈液状、盘底可出现微量沉淀、继续摇晃即消失（体细胞数在30万～49万个/mL），判断为“±”；凝乳试验反应轻微、反应缓慢、盘底出现少量黏性沉淀、但不成胶状、流动性大、摇动时沉淀物散布于盘底、并有一定的黏附性（体细胞数在50万～79万个/mL），判断为“+”；凝乳试验反应明显、反应速度较快、盘底出现较多黏稠沉淀、呈胶状、倾斜检验盘时沉淀物有明显黏附于盘底面、并难以流动、旋转检验盘时胶状物有聚中心倾向（体细胞数在80万～149万个/mL），判断为“++”；凝乳试验反应较重、反应速度快、混合物几乎完全形成胶状物、并黏附于盘底、旋转检验盘时难以散开（体细胞数在150万～499万个/mL），判断为“+++”；凝乳试验反应严重、反应瞬间完成、混合物立即呈胶状物、牛奶尚未与诊断液完全混合就已经凝成胶状、牛奶出现夹心现象（体细胞数在500万个/mL以上），判断为“++++”。

奶牛乳房炎早期诊断试剂盒判断标准：“-”为阴性，浅蓝绿色（体细胞数为0～29万个/mL）；“±”为疑似，浅绿色（体细胞数为30万～49万个/mL）；“+”为弱阳性，淡绿色（体细胞数为50万～79万个/mL）；“++”为阳性，绿色（体细胞数为80万～149万个/mL）；“+++”为强阳性，深绿色（体细胞数为150万～499万个/mL）；“++++”为极强阳性，墨绿色（体细胞数多于500万个/mL）。

2　结果与分析

2.1　应用显微镜体细胞计数法检测奶牛乳房炎发病情况

由表1可以看出，检测318头奶牛中，体细胞数在49万个/mL以下的奶牛201头，占总数的63.21%；体细胞数在50万个/mL以上的奶牛117头，占总数的36.79%。

2.2　应用奶牛隐性乳房炎诊断液检测奶牛乳房炎发病情况

由表2可以看出，检测318头奶牛中，乳房炎阴性（-、±都判为阴性）牛218头，占总数的68.55%；乳房炎阳性（+、++、+++、++++）牛100头，占总数的31.45%。

2.3　应用奶牛乳房炎早期诊断试剂盒检测奶牛乳房炎发病情况

由表3可以看出，检测318头奶牛中，乳房炎阴性（-、±都判为阴性）牛206头，占总数的64.78%；乳房炎阳性（+、++、+++、++++）牛112头，占总数的35.22%。

2.4　三种诊断方法对比

图1　三种方法检测结果曲线图

由图1可以看出，三种方法检测结果曲线图走势相似，但早期诊断试剂盒检测结果曲线图与显微镜体细胞计数检测结果曲线图更接近，说明早期诊断试剂盒检测奶牛乳房炎准确率高。以显微镜体细胞计数法检测结果为基准，奶牛隐性乳房炎诊断液法检测准确率为94.65%，而早期诊断试剂盒检测准确率为98.43%。

3　讨论

3.1本试验采用的三种奶牛乳房炎检测方法都能较准确地检出奶牛早期乳房炎的发生。显微镜体细胞计数检测法是实验室最基本的方法，准确性高，其它各种方法都以此为标准，确定其准确率，但操作复杂，技术性要求高，需要时间较长，耗时费力，可以用于实验室确诊，不太适合生产应用，不易推广应用；隐性乳房炎诊断液使用简

单、方便、快速，在现场就可快速操作，但使用时存在不是每头牛都更换一个干净诊断盘的情况，这样导致在连续使用过程中因为冲洗诊断盘不干净，影响反应效果，容易出现误差；奶牛乳房炎早期诊断试剂盒同样具有隐性乳房炎诊断液使用简单、方便、快速、在现场就可快速操作等优点，而且单独包装，每头牛1份，互不干扰，检测结果准确，达到98.43%。

3.2本试验奶牛是选择无临床型乳房炎产奶牛，发生乳房炎的奶牛也是处于发病早期，乳汁中体细胞数量还不是特别多，超过150万个/mL的牛只较少，多数集中在50万～150万个/mL。另外，这时病情还没特别严重，对乳腺的损伤比较轻微，如果能够及时发现乳房炎的发生，对于其治疗，可以促使乳腺迅速恢复、快速治愈，是最佳时期。

3.3本试验采取的三种检测方法中，显微镜体细胞计数检测法是对乳汁中体细胞逐个计数，累计每毫升乳中体细胞的数量；奶牛隐性乳房炎诊断液是采用表面活性剂使乳汁产生沉淀或形成凝块，根据沉淀或形成凝块的强弱，判定乳汁中体细胞数的范围；早期诊断试剂盒是裂解乳汁中体细胞，释放DNA，对DNA进行染色，根据染色变化判断体细胞的数量。奶牛隐性乳房炎诊断液和早期诊断试剂盒都是间接地对体细胞进行计数。从使用情况和准确性等综合来看，早期诊断试剂盒占有一定优势，在生产中容易推广应用。

3.4在奶牛乳房炎发生初期，临床症状还不明显，还处于隐性时期，其明显的标志是牛乳中体细胞数量增多，但临床中很难发现，因此，对乳房炎早期诊断，就能早期发现，及时采取有效措施，积极防治，有效地控制乳房炎的发展，最大限度地减少因乳房炎发生造成的损失。奶牛乳房炎早期诊断试剂盒的研制，很好地解决了奶牛生产中这一难题，简便、快速、准确，对于及时预防、控制、治疗奶牛乳房炎具有重要的作用。