黑提葡萄组培快繁过程中初代培养基的筛选

顾文婷，潘 明，王树霞，崔 永

（兵团第九师林业工作管理站，新疆 额敏县 834601）

葡萄（学名：Vitis vinifera L.）为葡萄科葡萄属木质藤本植物，因其栽培品种多、适应性强、果实营养丰富而广泛用于鲜食、酿酒和加工制作葡萄干、葡萄汁等食品，是我国各地栽培的主要果树之一[1]。全世界葡萄栽培面积达1 000万hm2，占世界水果产量的30%以上，仅次于柑桔，居第二位[2]。葡萄传统繁殖方法为扦插、嫁接和压条，虽简捷方便，但存在着一定的弊端，长期运用扦插、嫁接与压条繁殖，葡萄品种退化严重，尤其在多雨地区易受病虫感染，对葡萄生产的发展极为不利[3]。葡萄是最早进行组织培养工作的果树之一，早在1961年Galzy就已成功地进行了葡萄茎尖组织培养工作[4]。采用组织培养技术能保持葡萄品种母本的原有特性，又能提高繁殖系数，在短期内获得大量苗木[5-6]。本实验以黑提葡萄新生枝条的带芽茎段为外植体，以MS为基本培养基，分析了不同浓度的6-BA、IBA对组培芽生根及增殖的影响，探索了黑提葡萄苗最适宜的培养条件，筛选出了最佳的培养基配方。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 外植体

于晴朗午后从田间剪取生长健壮、洁净且无病的黑提葡萄新生枝条的单芽茎段，且叶腋芽不能展开，以刚露出一点为准作为实验材料。

1.1.2 实验药剂

以MS为基本培养基，该MS培养基中添加蔗糖30 g/L、琼脂6 g/L，pH在6.2～6.4。激素试剂有3-吲哚丁酸（IBA）和 6-卞氨基嘌呤（6-BA）。

1.1.3 实验仪器

主要有纯水过滤器、立式高温高压灭菌锅、光照培养架及超净工作台等。

1.2 实验方法

1.2.1 外植体的处理

去除枝条上的叶片，将外植体剪切成2 cm左右的Y型带芽茎段，用1%的洗洁精水漂洗10 min后用自来水冲洗干净，滤干水分，放置在消过毒的工作台上。接种外植体前，需在无菌条件下将嫩芽用75%的酒精消毒8 s后用蒸馏水冲洗2遍，再将嫩芽置于0.1%的生汞中浸泡6～8 min，缓慢摇动，使生汞与材料充分接触后用蒸馏水冲洗3～4遍，所用蒸馏水需要用专业的高温高压灭菌锅进行消毒。将已消毒好的嫩芽茎段放在消毒滤纸上吸干表面的水分，取材时所用的工具需用酒精灯外焰进行消毒，对盛放工具的器械用75%的酒精棉球擦洗，减少细菌、真菌等污染。接种时，用镊子轻夹住外植体，用剪刀剪去原切口的褐变部分，剪切成1 cm左右长的小段，基部稍长，以Y字型为宜，使之露出新切口。将切出的小段芽朝上正插入培养基中，以芽挨近培养基表面为宜，使之与培养基保持充分接触，每瓶接种3～5个外植体。

1.2.2 筛选初代培养生根效果最佳的培养基

以MS为基本培养基，配比4种（IBA、6-BA）不同浓度的激素进行对比，通过记录5个周期生根率的结果来筛选初代培养生根效果最佳的培养基。

1.2.3 筛选初代培养增殖效果最佳的培养基

以MS为基本培养基，配比4种不同浓度的激素（IBA、6-BA）进行对比，接种30 d后通过统计接种苗的平均增殖倍数、平均株高、基本长势来筛选初代培养增殖效果最适佳的培养基。

表1 不同浓度激素配比黑提葡萄苗初代培养生根情况

表2 不同浓度激素配比黑提葡萄苗初代培养增殖情况

1.2.4 培养条件

培养条件为：光照强度1 500～2 000 Lx，光照时间12 h/d，温度25～28℃。

1.3 数据处理

实验数据采用Excel软件进行统计分析。

2 结果与分析

2.1 初代培养中不同激素浓度对外植体生根数的影响

以MS为基本培养基，分别加入6-BA（0.2mg/L、0.5 mg/L、1.0 mg/L）和 IBA（0.2 mg/L、0.5 mg/L），大部分外植体接种7 d后，基部开始膨大，随后逐渐形成黄白色颗粒状愈伤组织，主根开始萌发；20 d后根系逐渐长长、长多。根据不同阶段的生根数统计生根率。由表1可知，当IBA浓度为0.5 mg/L、6-BA浓度为0.2 mg/L时生根率最高，30 d后可达91.2%。

2.2 初代培养中不同激素浓度对外植体增殖倍数的影响

大部分外植体接种7 d后，芽苞开始萌发，逐渐长出叶片；15 d后即可发现有侧芽萌发，叶片逐渐增多，30 d后统计叶片平均增值倍数及平均株高。由表2可知，当IBA浓度为0.2 mg/L、6-BA浓度为0.5 mg/L时平均增殖倍数最大，达到3.12倍，平均株高最高，达到10.5 cm，长势相对较好。

3 讨论与结论

3.1 讨论

随着葡萄产业的迅速发展和品种的更换，其病毒病日益蔓延，从而使树体衰弱，产量和品质下降，这就迫切需要提供大量无病毒苗木[7]。因此，利用新生枝条的带芽茎段为外植体组培快繁无病毒苗木是有效途径。用组织培养方法建立的品种快繁体系，不仅比常规育苗繁殖系数高，生长旺盛，成活率高，而且可以保持母体优良性状，预防病毒病，缩短优良品种的推广时间[8]。本实验以黑提葡萄新生枝条的带芽茎段为外植体接种于不同浓度的IBA、6-BA的MS培养基中培养，对不同培养基下的黑提葡萄初代培养的各项指标进行分析可以看出，激素是影响植物组织培养、生根及器官分化的关键，植物器官的形成受制于培养基中不同激素的相对浓度配比。

3.2 结论

通过对实验数据进行分析对比，筛选出了黑提葡萄初代培养的最佳培养基。当IBA浓度为0.5mg/L、6-BA浓度为0.2 mg/L时，对初代培养的黑提葡萄外植体基部膨大、主根萌发及根系形成的影响最大，而当IBA浓度为0.2 mg/L、6-BA浓度为0.5 mg/L时，对初代培养的黑提葡萄外植体叶片数以及侧芽萌发率的影响最大。

[1]李国树，邱璐，徐成东，等.葡萄组织培养快速繁殖体系研究[J].北方园艺，2011（9）：134-136.

[2]冯发文，田群芳.巨峰葡萄组织培养快繁技术研究[J].落叶果树，2011（2）：6-8.

[3]吴月燕，陶伟芳.葡萄离体培养及快速繁殖[J].浙江林学院学报，2001（2）：80-84.

[4]王起才，马纪，张富春.喀什哈尔葡萄组织培养及再生体系的建立[J].新疆农业科学，2008（1）：42-46.

[5]刘伟，李希东，刘新.葡萄砧木“F-242”组织培养及快繁技术[J].北方园艺，2010（1）：68-70.

[6]张继东.户太8号葡萄组织培养快繁技术[J].中国林副特产，2013（5）：43-46.

[7]马远，张振文，杨玉洁，等.葡萄组织培养应用研究进展[J].中外葡萄与葡萄酒，2002（4）：23-26.

[8]沈传进，王利民，张平，等.鲜食葡萄组织培养快速繁育系统的建立[J].河北农业科学，2011（7）：16-21.