胃鳞状细胞癌中hTERT、GLI 1、GLI 2表达情况及其临床意义分析

赵洪涛，张占云，范立壮

保定市第二医院普通外科，河北 保定0710510

胃鳞状细胞癌的肿瘤细胞进行增殖和表达后，其产生的遗传物质和代谢产物可以使血液中肿瘤细胞因子指标如hTERT、GLⅠ1和GLⅠ2等的水平明显升高；通过指标升高的趋势，可以预测患者发生胃鳞状细胞癌的风险[1]。胃镜或手术切除标本的病理学检查是诊断胃鳞状细胞癌的金标准。癌细胞的分化程度和淋巴结的转移情况是预测生存期的最重要的影响因素[2]，但大多数患者被发现时已经被诊断为晚期胃鳞状细胞癌，失去了最佳的治疗时机，生存期较短。在晚期胃鳞状细胞癌中hTERT、GLⅠ1和GLⅠ2的表达较高；而在早期，则表达较低[3]。由于胃鳞状细胞癌患者的免疫力下降，加之放化疗、手术和侵入性操作的实施，导致胃部感染，成为致死原因之一[4]。hTERT、GLⅠ1和GLⅠ2等肿瘤细胞因子与传统炎性因子比较，特异度较高，当发生胃鳞状细胞癌时其含量明显增多[5]。本研究探讨了胃鳞状细胞癌患者hTERT、GLⅠ1和GLⅠ2的表达及其临床意义，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析2011年8月至2016年10月在保定市第二医院接受治疗的80例胃鳞状细胞癌患者（观察组）和80例胃炎患者（对照组）的临床资料。观察组患者的纳入标准：①年龄≥18岁；②病理诊断为胃鳞状细胞癌；③无其他严重疾病。排除标准：①无完整临床资料；②合并其他部位原发肿瘤。对照组患者的纳入标准：①年龄≥18岁；②临床诊断为胃炎；③无其他严重疾病。排除标准：有原发肿瘤。观察组80例患者中，男45例，女35例；年龄为50～72岁，平均为（65.32±3.15）岁；高分化者48例，中低分化者32例；有淋巴结转移者27例，无淋巴结转移者53例；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期有25例，Ⅲ～Ⅳ期有55例。对照组80例患者中，男40例，女40例；年龄为48～70岁，平均为（65.25±3.08）岁；浅表性胃炎55例，萎缩性胃炎25例。两组患者的年龄和性别等一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 实验方法

抽取两组患者的清晨空腹静脉血，以3500 r/min的速度离心30 min，取血清，置于‐20℃冰箱保存待测。采用肿瘤标志物细胞因子分析仪检测hTERT、GLⅠ1和GLⅠ2水平。取冻存的血清保存液体，每1 ml的TRⅠZOL试剂裂解的样品中加入0.2 ml的氯仿，进行裂解操作；4℃冰上采用无酶的RNA冲洗液进行洗涤，以10 000 r/min的速度离心5 min，得到3种标志物表达后的RNA。混合液在加入逆转录酶之前先70℃干浴3 min，取出后立即冰水浴至离心管内外温度一致，然后加逆转录酶0.5 μl，37℃水浴60 min，室温放置5 min，使其完全溶解，逆转录为cDNA。以β‐actin为模版，将3种标志物分别进行翻译后，采用免疫组化法进行检测。

1.3 评价指标

观察两组患者hTERT、GLⅠ1、GLⅠ2阳性表达情况，比较不同临床病理特征胃鳞状细胞癌患者hTERT、GLⅠ1、GLⅠ2阳性表达率的差异，分析影响胃鳞状细胞癌患者hTERT、GLⅠ1、GLⅠ2阳性表达的因素。hTERT的染色主要出现在细胞质中，细胞核中也有染色。GLⅠ1、GLⅠ2在细胞质和细胞核中均有阳性染色出现。

1.4 统计学方法

采用SPSS 11.5软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示；计数资料以率（%）表示，采用χ2检验。采用Logistic回归分析法分析胃鳞状细胞癌中hTERT、GLⅠ1和GLⅠ2阳性表达的影响因素。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 hTERT、GLI 1、GLI 2的阳性表达率

观察组患者的hTERT、GLⅠ1和GLⅠ2的阳性表达率均明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.01）。（表1）

表1 两组患者hTERT、GLⅠ 1、GLⅠ 2阳性表达率比较[ n（%）]

2.2 临床特征与hTERT、GLI 1、GLI 2阳性表达率

观察组患者中，中低分化、有淋巴结转移和Ⅲ～Ⅳ期患者的hTERT、GLⅠ1、GLⅠ2阳性表达率分别明显高于高分化、无淋巴结转移和Ⅰ～Ⅱ期患者（P＜0.01），而不同年龄、性别和肿瘤部位患者hTERT、GLⅠ1、GLⅠ2阳性表达率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。（表2）

表2 观察组患者临床特征与hTERT、GLⅠ 1、GLⅠ 2阳性表达率的关系

2.3 h TERT、GLI 1、GLI 2阳性表达的影响因素

将单因素分析有意义的分化程度、有无淋巴结转移和TNM分期作为自变量，将胃鳞状细胞癌患者hTERT、GLⅠ1、GLⅠ2阳性表达作为因变量，进行回归分析，结果显示分化程度和淋巴结转移进入回归方程，hTERT、GLⅠ1、GLⅠ2阳性表达与分化程度、淋巴结转移情况有密切的关系。（表3～5）

表3 观察组hTERT阳性表达率的影响因素分析

表4 观察组GLⅠ 1阳性表达率的影响因素分析

表5 观察组GLⅠ 2阳性表达率的影响因素分析

3 讨论

胃通过消化道与外界直接相通，胃鳞状细胞癌患者更易受到外界不良刺激的影响[6]。胃鳞状细胞癌患者血清肿瘤因子hTERT是由细胞核中遗传物质逆转录后合成，继而传递到细胞质中合成新生肿瘤细胞，是血浆中含量最高且可以参与外围肿瘤标志物细胞因子功能的一类肿瘤细胞因子，较易受感染或炎性反应的影响，可以参与肿瘤细胞的生长、黏附、转移及血液凝固。由hTERT活化、代谢而形成的纤维聚合体，在肿瘤细胞质相连的网状物中可见，是造成淋巴结转移的基础因子[7]。当血液中hTERT水平较高时，肿瘤处于高度恶性状态，易造成淋巴结转移，多脏器受累，减弱胃的消化功能，增加患者发生恶病质的风险。hTERT可以在肿瘤细胞表面形成一个保护层，抵抗化疗，对胃鳞状细胞癌核心肿瘤细胞的生长、浸润和转移提供支持，导致不良预后的发生[8]。

GLⅠ1和GLⅠ2的生理特征包括促进肿瘤细胞的分化、增殖和进行淋巴结转移，可与hTERT同期进行淋巴结转移[9]。在肿瘤发生、发展过程中，GLⅠ1和GLⅠ2的主要生理反应是可以同时作为“第一应激反应者”的角色。胃鳞状细胞癌患者的癌细胞和正常细胞之间存在结构和成分的差异，GLⅠ1和GLⅠ2可以被肿瘤细胞表达的受体激活。一旦激活GLⅠ1和GLⅠ2，其形状和生长因子发生改变，释放血液中生物活性脂质，使肿瘤增殖和遗传能力增强，造成恶病质。胃鳞状细胞癌患者的癌细胞可以触发GLⅠ1和GLⅠ2激活系统，其调控可被癌细胞表面受体、细胞产物、细胞外因子和免疫细胞放大，进而增加恶性转移率[10]。在胃鳞状细胞癌发生、发展中GLⅠ1和GLⅠ2均有其特异性[11]。GLⅠ1是一种外围肿瘤细胞依赖性蛋白酶，在某些类型的癌症中，特别是胃鳞状细胞癌的癌细胞中，存在高度特异性[12]。GLⅠ1是胃鳞状细胞癌肿瘤标志物细胞因子中的重要成分，可以作为淋巴结转移的标志。肿瘤细胞具有催化GLⅠ1凝集后高表达的作用，并可以促进淋巴结转移，临床可以作为一种有效的肿瘤标志物指示因子；当其含量显著增多时，应警惕胃鳞状细胞癌已经发生淋巴结转移，增加了胃鳞状细胞癌患者恶变的风险[13]。GLⅠ2可以直接或间接激活胃鳞状细胞癌其他相关因子的表达如Pl、zFHxlB、ZEB2等，并在细胞膜上表达，此时，白细胞也被激活，释放蛋白酶和氧自由基，促进GLⅠ2表达。表达后的GLⅠ2，可以激发诱导黏附分子、白细胞和血管内皮细胞作为肿瘤合成的基质，为胃鳞状细胞癌患者的癌细胞增殖和分化提供基础[14]。本研究中，观察组患者的3种肿瘤标志物细胞因子阳性表达率较高，说明胃鳞状细胞癌患者的肿瘤细胞增殖、分化后可以使血清中肿瘤标志物因子明显增多；处于晚期的患者，3种肿瘤标志物的阳性表达率较高，说明病理分期越高，恶性程度越高，血清肿瘤因子的表达越高；hTERT、GLⅠ1、GLⅠ2阳性表达率与分化程度、淋巴结转移的关系，说明恶性程度越高，淋巴结转移率越高，血清肿瘤标志物含量越多，阳性表达特征越明显。本研究检测胃鳞状细胞癌患者的hTERT、GLⅠ1和GLⅠ2的阳性表达率，发现患者的恶性程度和转移率越高，这3种肿瘤标志物的表达率越高。通过这种方法，可以有效地检测胃鳞状细胞癌的病理分期，及时治疗。综上所述，胃鳞状细胞癌患者的hTERT、GLⅠ1和GLⅠ2的阳性表达率较高，且与分化程度和淋巴结转移情况有密切的关系。

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