罗格列酮对PD小鼠模型脑黑质TNF-α表达的影响

张乘云，张丹丹

（1.承德医学院人体解剖学教研室，河北承德 067000；2.宁夏医科大学）

目前，帕金森病（Parkinson’s disease，PD）的发病机制尚未清楚，已知的机制可能与炎症反应和细胞凋亡等多方面因素有关[1-2]。罗格列酮是过氧化物酶增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptors γ，PPAR-γ)的激动剂，已有实验证明，罗格列酮在脂多糖诱导的PD体外模型中有抑制炎症反应的作用[3]。本研究采用腹腔注射1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶(1-methy-4-phenyl-1，2，3，6-tetrahy dropyridine，MPTP)的方法制备亚急性PD小鼠模型，观察罗格列酮能否通过影响黑质肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor，TNF-α）的表达，抑制中枢神经系统的炎症反应，为进一步探讨帕金森病的发病机制和治疗方法提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料 18只健康雄性C57/BL6J小鼠[北京维通利华公司，SCXX(京)2002-2003]，室温下自由进食和饮水；Ultra Sensitive SP超敏试剂盒（福州迈新公司，中国）；小鼠抗TNF-α多克隆抗体（武汉博士德生物公司，中国）；神经毒素MPTP(Sigma公司，美国)；罗格列酮（国药准字H20030569，成都恒瑞制药有限公司，中国）。

1.2 小鼠分组和给药 将18只C57小鼠随机分为3组，每组6只，分别为对照组、模型组、罗格列酮组。除对照组外，其它两组小鼠每天腹腔注射MPTP（25mg/kg）一次，连续注射7天；对照组小鼠每天腹腔注射等量的生理盐水，连续注射7天；罗格列酮组小鼠在每天注射MPTP前4h给予罗格列酮（4mg/kg）灌胃。

1.3 标本采集 各组小鼠最后一次腹腔注射后72小时取材。10%水合氯醛腹腔注射麻醉，4%多聚甲醛灌流固定后取中脑部分，常规石蜡包埋，切片（厚5μm）。

1.4 免疫组化染色 采用免疫组织化学染色法检测中脑黑质TNF-α的表达情况。TNF-α一抗工作浓度1：250，DAB显色，以神经元胞浆中出现棕褐色颗粒判定为阳性细胞，封片后光学显微镜下观察。采用CMIAS真彩色医学图像分析系统计数黑质TNF-α阳性细胞数，每只小鼠随机选取3张切片，每张切片在显微镜（10×10）下随机选取3个视野，取平均值。

1.5 统计分析 使用SPSS 19.0统计学软件分析所得数据，计量资料采用（±s）表示，行q检验，P＜0.05认为差异有统计学意义。

2 结果

模型组小鼠中脑黑质TNF-α阳性细胞数明显高于对照组（P＜0.05），罗格列酮组小鼠中脑黑质TNF-α阳性细胞数明显低于模型组（P＜0.05）。见附表：

附表 各组小鼠中脑黑质TNF-α阳性细胞数（±s）

附表 各组小鼠中脑黑质TNF-α阳性细胞数（±s）

与对照组比较：aP＜0.05；与模型组比较：bP＜0.05

组别 n TNF-α阳性细胞数 对照组 6 8.65±1.67模型组 6 19.24±2.52a罗格列酮组 6 13.64±2.57b

3 讨论

PD的发病机制复杂，其中炎性反应在PD发病中有着重要作用。有研究提示，罗格列酮可能具有抑制中枢神经系统炎症反应的作用。在脂多糖诱导的PD体外模型中，PPAR-激动剂罗格列酮能减少促炎性细胞因子的产生，而PPAR-拮抗剂可以阻止这一作用[3]，证明了罗格列酮具有抑制炎症反应的作用。还有前期研究发现[4]，用MPTP制备的PD模型组小鼠黑质区多巴胺能神经元特异性标志物-酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase，TH）阳性神经元丢失严重，应用罗格列酮后可使TH阳性神经元丢失有所减轻，提示罗格列酮可能对PD具有一定的治疗作用。为此，本研究观察了罗格列酮对PD模型小鼠中脑黑质神经元炎症因子TNF-α表达的影响，结果显示罗格列酮组小鼠中脑黑质TNF-α阳性细胞数明显低于模型组。因此，本研究提示，罗格列酮可能通过抑制PD小鼠模型中脑黑质炎症因子的释放，对PD具有一定的治疗作用。

【参考文献】

[1]刘翠芳，陈文强，王宁群，等.帕金森病的发病机制及药物治疗研究现状[J].北京中医药，2016，35(5)：436-440.

[2]赵鹏，郜静，李芳.帕金森病发病机制的研究现状[J].中国疗养医学，2015，24(8)：806-808.

[3]何秀全.罗格列酮通过抑制小胶质细胞活化而保护多巴胺能神经元的研究[D].济南：山东大学，2012.

[4]张乘云.罗格列酮联合替米沙坦对帕金森病MPTP模型小鼠黑质多巴胺能神经元的保护作用[D].唐山：华北理工大学，2015.