· 基础研究 ·
2018-04-03
S1-1 The Critical Role of IL-10 in the Anti-neuroinflammatory and Anti-oxidative Effects of Rheum Tanguticum on Activated Microglia
MENG Jie1，NI Jun-jun1，WU Zhou1，2，ZHU Ai-qin3，QING Hong4，Hiroshi Nakanishi1
1. Department of Aging Science and Pharmacology，Faculty of Dental Sciences，Kyushu University，Fukuoka，812-8582，Japan
2. OBT Research Center，Faculty of Dental Sciences，Kyushu University，Fukuoka，812-8582，Japan
3. Institution of Geriatric Qinghai Provincial Hospital，Xining，810007，China
4. School of Life Science，Beijing Institute of Technology，Haidian District，Beijing，100081，China
-assay，respectively. The mean levels of IL-1 β and NO2-/NO3
-signi fi cantly increased in the culture medium of MG6 cells at 24 h after treatment with CGA. Rt also signi fi cantly decreased the mean levels of IL-1 β and NO2-/NO3
-in the culture medium of MG6 cells. The mean protein level of IL-1 β signi fi cantly increased in the organotypic hippocampal slice cultures at 48 h after stimulation with CGA （10 nmol·L-1）. Rt signi fi cantly suppressed the mean protein level of IL-1β in CGA-stimulated organotypic hippocampal slice cultures ②The neutralization of IL-10 restored the mean mRNA expression of TNF-α and IL-1 β in CGA-stimulated MG6 cells in the presence of Rt. ③Among the major components of Rt，three components namely，aloe-emodin （10 μmol·L-1），（+）-cathechin （30 μmol·L-1） and piceatannol （100 μmol·L-1），were found to signi fi cantly increase the mRNA expression of IL-10 in MG6 cells at 24 h after treatment. In contrast，chrisophanol，physcion，β-sitosterol or emodin at concentrations up to 100 μmol·L-1had no effect on the mRNA expression of IL-10 in MG6 cells.Conclusion：Rt suppressed the production of pro-in fl ammatory and oxidative mediators，including IL-1 β，TNF-α and NO，by cultured activated microglia through the production of IL-10. Two components of Rt，aloe-emodin and （+）-catechin，induced the secretion of IL-10 from cultured microglia. Therefore，aloe-emodin and （+）-catechin are deemed responsible for the antineuroin fl ammatory and anti-oxidative effects of Rt through the secretion of IL-10 from microglia.
Address：812-8582 Department of aging science and pharmacology，Faculty of dental science，3-1-1，Mayidashi，Higashiku，Fukuoka，Japan.
E-mail：mjdejiejie@gmail.com
Tel：+81-80 91065608
S1-2 Increased Expression and Altered Subcellular Distribution of Cathepsin B in Microglia Induces Cognitive Impairment through Oxidative Stress and Inflammatory Response in Mice
NI Jun-jun1，WU Zhou1，Veronika Stoka2，Christoph Peters3，QING Hong4，Vito Turk，2Hiroshi Nakanishi1
1. Department of Aging Science and Pharmacology，Faculty of Dental Science，Kyushu University，Fukuoka，812-8582，Japan
2. Department of Biochemistry and Molecular and Structural Biology，J. Stefan Institute，Jamova 39，Sl-1000 Ljubljana，Slovenia
3. Institute für Molekulare Medizin und Zellforshung，Albert-Ludwigs-Universität Freiburg，Freiburg，D-79104，Germany
4. Beijing Key Laboratory of Separation and Analysis in Biomedical and Pharmaceuticals，Department of Biomedical Engineering，School of Life Science，Beijing Institute of Technology，Beijing，China
Address：812-8582 Department of aging science and pharmacology，Faculty of dental science，3-1-1，Mayidashi，Higashiku，Fukuoka，Japan.
E-mail：nijunjun@dent.kyushu-u.ac.jp
Tel：81-8033674658
S1-3 A Novel Mechanism Underlying the Protective Effect of PDE4 Inhibitor Against Cognitive Impairment：Inhibiting Neuroinflammation through Inducing Autophagy in Microglial Cells
YOU Ting-ting，CHENG Yu-fang，GUO Hai-biao，WANG Hai-tao，XU Jiang-ping
Department of Neuropharmacology and Drug Discovery，School of Pharmaceutical Sciences，Southern Medical University，Guangzhou 510515，China
This work was supported by National Natural Science Fund of China （No. 81773698，81503043）Corresponding author：XU Jiang-ping，Email：jpx@smu.edu.cn
S1-4 Preventive Effect of Genetic Knockdown and Pharmacological Blockade of CysLT1R on Lipopolysaccharide（LPS）-induced Memory Deficit and Neurotoxicity in vivo
CHEN Fang，Arijit Ghosh，TANG Su-su，HONG Hao
Department of Pharmacology，Key Laboratory of Neuropsychiatric Diseases，China Pharmaceutical University，Nanjing，210009，China
S1-5 KAE Alleviates LPS-induced Neuroinflammation in the Striatum of Mice via Down-regulating TLR4/MyD88 Signaling Pathway
YANG Ying-Lin，CHENG Xiao，LI Wei-Han，LIU Man，WANG Yue-Hua，DU Guan-Hua
Beijing Key Laboratory of Drug Target Identi fi cation and Drug Screening，Institute of Materia Medica，Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College，Beijing，100050，China
S1-6 二苯乙烯苷对APP/PS1双转基因小鼠学习记忆及突触可塑性的影响
黄 蕊 杨翠翠 张 兰
首都医科大学宣武医院药物研究室，北京，100053，中国
目的：本 文 主 要 探 讨 2，3，5，4’-四 羟 基 二 苯 乙 烯 -2-O-β-D-葡 萄 糖 苷（2，3，5，4’-tetrahydroxystibane-2-O-β-D-glucoside，TSG）的长期干预对APP/PS1拟阿尔茨海默病 （Alzheimer’s disease，AD）动物模型学习记忆以及突触可塑性的影响。方法：5月龄APP/PS1双转基因小鼠112只，随机分为7组：正常对照组（同窝阴性鼠），正常对照+TSG高剂量（100 mg·kg-1）组，模型组，模型 +TSG 低剂量（50 mg·kg-1）组，模型 +TSG 高剂量（100 mg·kg-1）组，模型 + 多奈哌齐（1 mg·kg-1）组，模型+美金刚（5 mg·kg-1）组，每组16只，雌雄各半。对照组和模型组灌胃给予蒸馏水，其余各组灌胃给予相应剂量的药物，每日给药1次，灌胃给药7个月至12月龄后采用Morris水迷宫和新物体识别行为学方法观察灌胃给予TSG对小鼠学习记忆能力的影响。行为学之后急性分离小鼠海马脑片（选取4组：正常对照组，模型组，模型+TSG低剂量（50 mg·kg-1）组，模型+多奈哌齐（1 mg·kg-1）组，每组记录6个数据），采用细胞外场电位记录的方法记录海马脑片兴奋性突触后电位（EPSP）的斜率，并与基础对照的EPSP斜率相比，计算相应的百分比作为小鼠海马CA1区突触长时程增强（long-term potentiation，LTP）的数值，进而观察TSG对小鼠海马CA1区突触可塑性的影响。结果：①Morris水迷宫行为学结果显示，与正常对照组相比，模型组小鼠逃避潜伏期明显延长（P＜0.001），TSG低剂量和高剂量均可明显缩短模型小鼠逃避潜伏期（P＜0.05）。②新物体识别结果显示，与正常对照组相比，模型组小鼠识别指数明显降低（P＜0.05），TSG低剂量和高剂量均可明显增加模型小鼠的识别指数（P＜0.01）；③LTP 结果显示，与正常对照组相比，模型组小鼠LTP值显著减少，TSG低剂量组对模型小鼠LTP有显著增强作用（P＜0.01）。结论：二苯乙烯苷能够改善APP/PS1小鼠的认知与学习记忆，且能提高其突触可塑性。
二苯乙烯苷；阿尔茨海默病；行为学；LTP
S1-7 复方丹参片对老年痴呆症合并焦虑障碍的研究
郭海彪 徐科一 林娟 王德勤 覃仁安
广州白云山和记黄埔中药有限公司，广州，510515，中国
目的：探讨复方丹参片对老年痴呆症合并焦虑障碍的作用及机制。方法：4月龄野生型小鼠和APP/PS1转基因小鼠分别灌胃给予溶剂或复方丹参片60天后，采用Morris水迷宫实验、新物体识别实验、新奇抑制摄食实验和高架十字迷宫实验评价复方丹参片对APP/PS1转基因小鼠学习记忆功能和焦虑样行为的影响；应用ELISA检测小鼠海马淀粉样蛋白A β40、A β42、γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid，GABA）和脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophic factor，BDNF）的含量；Real time PCR和Western Blot分别检测IDE/NEP的mRNA和蛋白水平变化。结果：复方丹参片720 mg·kg-1明显短缩小鼠在水迷宫实验中找到平台的潜伏期，360 mg·kg-1和720 mg·kg-1明显增加小鼠原有平台象限的探索时间；复方丹参片720 mg·kg-1可显著性增加APP/PS1转基因小鼠对新物体的识别指数；复方丹参片360 mg·kg-1、720 mg·kg-1显著性增加APP/PS1转基因小鼠在高架十字迷宫中开臂的时间百分比和进入开臂的次数；复方丹参片360 mg·kg-1、720 mg·kg-1显著性缩短APP/PS1转基因小鼠摄食潜伏期；复方丹参片360 mg·kg-1、720 mg·kg-1显著性降低APP/PS1转基因小鼠海马A β40、A β42的浓度和增加GABA和BDNF含量；复方丹参片720 mg·kg-1显著性上调APP/PS1转基因小鼠海马IDE、NEP mRNA的表达；复方丹参片720 mg·kg-1显著性增加小鼠海马IDE蛋白表达。结论：复方丹参片改善APP/PS1转基因小鼠的学习记忆损伤和焦虑样行为，可能与增加脑组织GABA和BDNF含量、IDE的蛋白表达及降低A β40、A β42水平有关。
复方丹参片；老年痴呆症；焦虑；γ-氨基丁酸；淀粉样蛋白
S1-8 文冠果壳苷对APP/PS1转基因小鼠突触可塑性的作用及其机制研究
刘 鹏 朱 琳 纪雪飞 迟天燕 邹莉波
沈阳药科大学，生命科学与生物制药学院，沈阳，110016，中国
目的：阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）被认为是突触相关的一类疾病，因此又把它叫做突触失效，最终导致中枢神经系统网络联系受损，认知功能及记忆能力的下降。神经元的损伤和异常信号转导是神经退行性疾病的关键性指标。因此，改善突触结构和功能障碍是改善认知缺陷和阻止阿尔茨海默病发展的一个重要目标。文冠果壳苷是从文冠果果壳中提取的一种三萜皂苷类化合物，前期研究发现其对多种AD模型动物的学习记忆障碍具有显著的改善作用，并可增加海马突触素及PSD95蛋白表达，提示文冠果壳苷可能具有保护突触或提高突触可塑性的作用。方法：本实验通过对行为学、透射电镜、Golgi-Cox染色、免疫组化、电生理和突触相关蛋白表达的考察，验证文冠果壳苷对APP/PS1转基因小鼠学习记忆障碍的改善作用及对突触结构和功能可塑性的影响。结果：Morris水迷宫结果表明，与APP/PS1小鼠相比，文冠果壳苷可以显著缩短逃避潜伏期，提高穿台次数；Y迷宫结果表明，文冠果壳苷可以显著提高APP/PS1小鼠的自发交替反应率；提示文冠果壳苷可以改善APP/PS1小鼠的空间记忆和工作记忆障碍。透射电镜结果表明，与APP/PS1小鼠相比，给予文冠果壳苷后CA1区突触间隙清晰可见，突触前区内有较多的突触小泡，突触前后膜清晰均匀；Golgi-Cox染色结果表明，文冠果壳苷可以显著改善APP/PS1小鼠海马树突棘密度降低；文冠果壳苷可以对抗A β25-35导致的原代海马神经元树突长度降低及多级树突分枝减少；提高APP/PS1小鼠突触结构可塑性相关蛋白（BDNF-TrkB通路相关蛋白）的表达；提示文冠果壳苷对突触结构具有保护作用。电生理实验结果表明，文冠果壳苷可以显著改善APP/PS1小鼠LTP降低；CamKⅡ和GluR1蛋白的表达对于LTP的维持至关重要，Western Blot结果表明，文冠果壳苷可以显著提高APP/PS1小鼠海马突触上和突触外p-CamKⅡ蛋白的表达，促进突触上GluR1蛋白的磷酸化；提示文冠果壳苷对APP/PS1小鼠突触功能可塑性具有保护作用。结论：文冠果壳苷对APP/PS1小鼠的学习记忆障碍具有显著改善作用。其机制可能与调节突触结构相关蛋白BDNF-TrkB及功能维持相关蛋白CamKⅡ-GluR1，进而提高海马突触结构和功能可塑性有关。
S1-9 沉默信息调节因子1对抗APP高表达转基因小鼠脑组织及β-淀粉样肽寡聚体处理的原代培养神经元中氧化应激水平升高的作用
董阳婷1，2曹 坤1，2向 洁1，2徐 毅1，3谭龙春2，3王晓玲2，3齐晓岚2，3肖 雁2，3官志忠1，2，3
1. 贵州医科大学附属医院病理科，贵阳，550004，中国
2. 地方病与少数民族疾病，贵州医科大学教育部重点实验室，贵阳，550004，中国
3. 贵州省分子生物重点实验室，贵阳，550004，中国
目的：由于氧化应激水平升高是阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）的可能性发病机制之一，而沉默信息调节因子1（silent information regulator 1，SIRT1）的功能与抗氧化有关，本文试图了解SIRT1是否能对抗β-淀粉样肽前体蛋白（APP）高表达的小鼠大脑或经β-淀粉样肽寡聚体（A β Os）处理的神经元中氧化应激水平的升高。方法：APP/PS1双转基因种鼠与野生型（WT）雌鼠合笼繁殖，筛选出APP/PS1双转基因小鼠，分别饲养至4月龄或8月龄时，用白藜芦醇（RSV，SIRT1激活剂）或苏拉明（SIRT1抑制剂）通过灌胃方法处理转基因小鼠，每次20 mg·kg-1体重/天，时间 2 个月；采用原代海马神经元培养，用 0.5 μmol·L-1A β Os处理 48 小时后分别用 20 μmol·L-1RSV或300 mg·mL-1苏拉明处理细胞24小时。采用CCK-8方法检测细胞存活率，筛选最佳药物处理浓度；用蛋白印记及实时定量PCR方法分别检测SIRT1蛋白和mRNA表达水平；用免疫组织化学方法检测APP高表达转基因小鼠脑组织内老年斑分布情况；用激光共聚焦显微镜及流式细胞术检测原代海马神经元中活性氧（ROS）水平；用生物化学方法检测小鼠脑组织及细胞中OH-、H2O2、O2.-水平，丙二醛（MDA）含量，以及超氧化物歧化酶（SOD），谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性。结果：与WT小鼠或未经处理的原代神经元相比，APP/PS1小鼠大脑或经A β Os处理的神经元中SIRT1的表达显着降低；小鼠脑组织中老年斑数量明显增加；脑组织及培养神经元中氧化应激水平明显升高，抗氧化酶水平明显降低。APP/PS1小鼠大脑或经A β Os处理的神经元中这些异常改变可通过RSV处理后减弱，而用苏拉明处理后则使其增强。结论：SIRT1可以降低APP高表达小鼠大脑及经A β Os处理的神经元中的氧化应激水平，具有神经保护作用。
S1-10 史他汀类药物对抗β-淀粉样肽神经毒性的非胆固醇依赖性作用机制实验研究
官志忠1，2，3赵 亮1，2董阳婷1，2曹 坤1，2向 洁1，2徐 毅1，2肖 雁2，3齐晓岚2，3禹文峰2，3
1. 贵州医科大学附属医院病理科，贵阳，550004，中国
2. 地方病与少数民族疾病，贵州医科大学教育部重点实验室，贵阳，550004，中国
3. 贵州省分子生物重点实验室，贵州医科大学，贵阳，550004，中国
目的：研究史他汀类药物通过其非胆固醇依赖性作用对抗β-淀粉样蛋白（A β）的 过程中β-淀粉样肽前体蛋白（APP）代谢、尼古丁型乙酰胆碱受体（nAChRs）表达以及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号转导通路的相互作用关系，探讨史他汀类药物对阿尔茨海默氏病（AD）的可能性干预途径。方法：选择原代培养神经细胞及过表达APP670/671的SHSY-5Y细胞，用史他汀类药物（包括洛伐他汀、阿托伐他汀、罗苏伐他汀和辛伐他汀）、A β、nAChR拮抗剂或细胞外信号调节蛋白激酶（ERK）抑制剂分别或合并处理。用生化方法测定细胞存活率、胆固醇含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量；用蛋白印迹法检测nAChR多种亚单位蛋白表达水平，APP代谢途径中α分泌型淀粉样前体蛋白（α APP）、β分泌型淀粉样前体蛋白（β APP）、β淀粉样前体蛋白裂解酶1（BACE1）、β淀粉样前体蛋白裂解酶2（BACE2）及解聚素金属蛋白酶结构域蛋白10 （ADAM10）等的蛋白表达水平，MAPK通路中ERK、c-Jun氨基末端激酶（JNK）及p38磷酸化水平；实时荧光定量PCR测定nAChR亚单位mRNA表达水平。结果：用A β或A β寡聚体处理体外培养神经细胞48小时后见细胞存活率下降、SOD的活性降低和MDA含量增高等毒性作用，用史他汀类药物预处理细胞24小时，均能减轻A β引起的神经毒性作用。用洛伐他汀处理培养细胞24小时后，发现α 7 nAChR蛋白及mRNA表达水平均升高，而α 4、α 3和b β 2未见明显改变；洛伐他汀处理引起α APP分泌增加、β APP减少、BACE1蛋白表达水平降低、而BACE2和ADAM10增高。洛伐他汀处理亦导致phospho-ERK1/2蛋白表达水平升高，而phospho-JNK和phospho-p38未见明显改变。联合应用洛伐他汀与MAPK/ERK1/2抑制剂U0126或α 7 nAChR拮抗剂MLA处理培养细胞，结果显示U0126可以抑制细胞phospho-ERK1/2的磷酸化，降低α 7 nAChR蛋白表达水平，减少α APP的分泌，同时阻断洛伐他汀引起的MAPK/ERK1/2信号转导通路活化、α 7 nAChR蛋白表达水平升高以及α APP分泌增加等作用；MLA处理神经细胞仅能减少α APP的分泌，对其自身的蛋白表达及phospho-ERK1/2的磷酸化均无明显影响，MLA与洛伐他汀共同处理细胞后仅见洛伐他汀诱导的α APP分泌增加作用被减弱，而MAPK/ERK1/2的活化以及α 7 nAChR蛋白表达水平的上调均未被减弱。结论：采用不引起细胞胆固醇水平改变的史他汀类药物剂量处理培养细胞，能减轻A β引起神经细胞毒性作用，引起MAPK/ERK1/2信号转导通路活化、α 7 nAChR蛋白表达水平升高以及α APP分泌增加；其作用机制可能是首先活化phosphor-ERK1/2信号转导通路，该通路的活化刺激α7 nAChR的表达，最终增强APP的非淀粉样代谢过程，活化α-分泌酶，从而促进α APP的分泌，产生对抗A β的神经保护作用。
S1-11 噬菌体展示技术筛选PirB受体拮抗肽及其体外功能研究
李 雨1谢青青1黄依韵2罗焕敏1肖 飞1
1. 暨南大学基础医学院，广州，510632，中国
2. 暨南大学药学院，广州，510632，中国
目的：运用噬菌体展示技术筛选能够与A β42竞争性结合其受体PirB的小分子多肽，并验证其生物学功能，为以PirB受体为靶点的小分子多肽治疗阿尔茨海默病提供新的依据。方法：以PirB受体为目标蛋白，经过三轮生物淘选，从Ph.D.-7噬菌体随机展示肽库筛选获得高特异性的单克隆噬菌体，ELISA检测分析单克隆噬菌体与PirB的结合能力。提取阳性克隆菌ssDNA，测序翻译，分析比对阳性序列与A β42的相似度及疏水轮廓，合成候选多肽。采用MTT检测多肽细胞毒性，利用细胞免疫荧光结合实验验证候选多肽是否和PirB结合。利用链霉素-亲和素结合实验进一步测量候选肽与PirB的结合能力，得到解离常数。采用神经元突起损伤模型探究多肽的体外生物活性。Western Bolt检测PirB下游信号ROCK2，CRMP2，p-CRMP2的表达情况。结果：三轮生物淘选后获得29个阳性克隆，结合ELISA结果选定11个阳性克隆，提取ssDNA，测序翻译，体外合成11条候选肽。经软件分析比对后，其中候选肽P11（命名为P2）与PirB高亲和力的配体A β42有三个相同的氨基酸，与A β42带同样的电荷，具有较高的相似性，更有可能阻断A β42与受体PirB的结合。经过MTT、免疫荧光结合实验及体外神经元损伤模型，对11条候选多肽进行筛选验证发现P2为目标肽，P2可能阻断A β42与受体PirB的结合。MTT结果表明P2在16 μmol·L-1浓度范围内都不具备生物毒性。免疫荧光结合实验表明P2结合能力强。细胞荧光共定位实验也表明，P2能够特异性的与PirB结合。链霉素-亲和素结合实验表明，P2与受体PirB特异性结合，解离常数 Kd 为 0.128 μmol·L-1。生物学功能表明，在原代皮质神经元突起损伤模型中P2可拮抗A β42介导的突起损伤作用，促进神经突起的再生。WB结果表明，P2降低PirB受体下游蛋白 ROCK2，p-CRMP2的表达。结论：成功的从噬菌体随机展示肽库中筛选得到具有生物活性的PirB受体高特异性拮抗肽，命名为P2。P2与受体PirB特异性结合，解离常数 Kd为 0.128 μmol·L-1，P2能缓解A β42引起的神经生长突起抑制作用，促进神经突起再生，其分子机制为降低PirB受体下游信号蛋白ROCK2的表达以及CRMP2蛋白的磷酸化。
S1-12 脑心清片对脂多糖诱导的BV-2细胞的抗炎及抗凋亡作用
朱东海 林 娟 郭海彪 李楚源
广州白云山和记黄埔中药有限公司，广州，510515，中国
目的：通过研究脑心清片（NXQ）对脂多糖（LPS）诱导的小胶质细胞（BV-2）的炎症因子及凋亡细胞的表达作用，探讨脑心清片对脑卒中的抗炎及抗细胞凋亡的作用。方法：采用LPS诱导的BV-2细胞作为体外神经炎症模型，用脑心清片进行干预，用ELISA检测促炎因子IL-6、IL-1 β和 TNF-α的含量水平；采用 Western Blot法检测 IL-6、IL-1 β和 TNF-α、p-Akt、p-Erk、Bax、Bcl-2 的蛋白表达水平。结果：LPS刺激BV-2细胞24 h之后，IL-6、IL-1 β和TNF-α炎症因子表达水平明显升高（P＜0.01），NXQ 预处理后，IL-1 β含量在 10、20 μmol·L-1时相对于 LPS 处理组均有显著性的差异（P＜0.05，P＜0.05），IL-6、TNF-α含量在 20 μmol·L-1时相对于 LPS 处理组均有统计学意义（P＜0.05）；LPS 刺激 BV-2 细胞 24 h 之后，IL-6、IL-1 β和 TNF-α蛋白表达水平明显升高（P＜0.01），NXQ预处理后，能呈现浓度依赖性的降低这些蛋白的表达水平，并且在10、20 μmol·L-1时相对于LPS处理组均有显著性的差异（P＜0.05，P＜0.01）；LPS刺激BV-2细胞24 h之后，p-Akt、p-Erk蛋白表达水平明显降低（P＜0.01），NXQ预处理后，能呈现浓度依赖性的升高这些蛋白的表达水平，并且在 10、20 μmol·L-1时相对于 LPS 处理组均有显著性的差异（P＜0.01，P＜0.01）；LPS 刺激 BV-2 细胞24 h之后，促凋亡蛋白Bax表达水平明显升高（P＜0.01），NXQ预处理后，Bax蛋白表达水平下降，并且在20 μmol·L-1时相对于LPS处理组有统计学意义（P＜0.05）。LPS刺激BV-2细胞24 h之后，抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平明显降低（P＜0.01），NXQ预处理后，Bcl-2蛋白表达水平呈现浓度依赖性的升高，并且在 10、20 μmol·L-1时相对于 LPS 处理组均有统计学意义（P＜0.05，P＜0.05）。结论：脑心清片对脂多糖诱导的小胶质细胞产生的炎症和毒性具有一定的调节作用，通过调节炎症因子的表达和激活Akt/Erk通路，具有抗炎和抗细胞凋亡作用，进一步阐明了脑心清片抗脑卒中的作用机理。
脑心清片；脑卒中；小胶质细胞；炎症因子；细胞凋亡
S1-13 α7神经型尼古丁受体对突触功能和钙信号通路的影响及在阿尔茨海默氏病中的神经保护作用机制研究
王晓玲1，2邓于新1，2官志忠1，2，3齐晓岚1，2
1. 地方病与少数民族疾病，贵州医科大学教育部重点实验室，贵阳，550004，中国
2. 贵州省医学分子生物学重点实验室，贵州医科大学，贵阳，550004，中国
3. 贵州医科大学附属医院病理科，贵阳，550004，中国
目的：研究β-淀粉样蛋白 （β-amyloid protein，A β） 的聚集是否会引起突触形态及相关蛋白表达水平的变化以及与A β、胆碱能受体及突触功能密切相关的钙离子通路是否发生变化，进一步探讨这些改变之间是否具有一定的相关性；研究特异性激动原代海马神经元中的 α7nAChR 对突触形态及其相关蛋白、钙信号通路相关蛋白、Ca2+浓度以及 α7nAChR 对抗 A β 毒性作用的神经保护作用机制，为进一步阐明AD 发病机制提供一定的理论依据。方法：原代培养大鼠海马神经元细胞；实验细胞分为A组：对照组；B组：α7nAChRs特异性激动剂 PNU-282987 处理组；C 组：A β1-42寡聚体处理组；D组：PNU-282987+ A β1-42寡聚体处理组；采用Real-time PCR 法和蛋白免疫印迹 （Western Blot） 法分别测定各组细胞中突触相关蛋白Syn、PSD95、SNAP25、DYN1、AP180，钙信号通路相关蛋白CaM、CaMKⅡ、pCaMKⅡ、CREB、PCREB mRNA 和蛋白表达水平的变化，流式细胞仪检测神经细胞钙离子水平。结果：A β1-42寡聚体可引起神经元细胞内钙超载，A β1-42寡聚体可减少各组细胞中突触相关蛋白Syn、PSD95、SNAP25、DYN1、AP180和钙信号通路相关蛋白CaMKⅡ、pCaMKⅡ、CREB、pCREB mRNA及蛋白表达水平，增加CaM mRNA及蛋白的表达水平；特异性激动海马神经元细胞α7nAChR后神经细胞内钙离子水平相对减少，神经元细胞中的突触相关蛋白 Syn、PSD95、SNAP25、DYN1、AP180和钙信号通路相关蛋白 CaMKⅡ、pCaMKⅡ、CREB、pCREB mRNA及蛋白表达水平升高，且能对抗A β对突触蛋白及钙通路相关蛋白的影响。结论：A β1-42寡聚体对细胞的神经毒性能够损伤突触功能以及钙信号通路；α7nAChR可增加突触相关蛋白的表达以及可能通过激活钙信号通路来抵抗A β的神经毒性发挥神经保护作用。
S1-14 H2S在缺血再灌注损伤中神经细胞自噬发生机制中的作用研究
肖 雁1，2黄 赟1，2刘雨霞1，2田 茂1，2齐晓岚1，2禹文峰1，2官志忠1，2，3
1. 贵州医科大学附属医院病理科，贵州，550004，中国
2. 地方病与少数民族疾病，贵州医科大学教育部重点实验室，贵州，550004，中国
3. 贵州省医学分子生物学重点实验室，贵州医 科大学，贵州，550004，中国
目的：利用siRNA干扰技术干扰H2S生成的关键酶胱硫醚β-合成酶（cystathionine β-synthase，CBS）基因并构建细胞氧糖剥夺再灌注（oxygen-glucose deprivation/reperfusion，OGD/R）模型，探讨OGD/R和CBS基因干扰后SH-SY5Y细胞自噬和凋亡情况及相关信号通路变化。方法：构建OGD/R模型，体外模拟缺血再灌注过程，根据氧糖剥夺和再灌注时间不同共设9组，利用透射电镜观察各组细胞OGD/R后细胞内自噬小体形成情况，根据透射电镜结果选取氧糖剥夺4 h/再灌注24 h作为后续实验的OGD/R模型；脂质体转染法将针对CBS基因的siRNA转入SH-SY5Y细胞内，同时构建OGD/R模型，将细胞分为3个组，分别为CBS干扰组，OGD/R组和CBS干扰+OGD/R组，各组均设相应对照。Real time PCR和蛋白印迹法鉴定CBS基因干扰效率，并检测各组自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1和信号通路中Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR的蛋白表达水平，以及凋亡信号通路中NF-κ Bp65、COX-2 蛋白表达水平；流式细胞术检测各组细胞凋亡水平。结果：透射电镜观察细胞内自噬小体：除正常对照组和氧糖剥夺4 h/再灌注12 h组未观察到自噬小体外，其余各组均在胞质内观察到了较多自噬小体。CBS基因干扰效率达80%。CBS干扰组自噬相关蛋白及相关信号通路蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ，Beclin-1，p-Akt/Akt，p-mTOR/mTOR蛋白表达水平与阴性对照组比较均无统计学差异；OGD/R组与正常对照组比较，OGD/R组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ 明显高于正常对照组， p-Akt/Akt和p-mTOR/mTOR均明显降低，NF-κ Bp65、COX-2蛋白表达水平均高于正常对照组；CBS干扰+OGD/R组与对照组比较，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ，Beclin-1，p-Akt/Akt，p-mTOR/mTOR均无显著差异。CBS干扰组细胞凋亡率与阴性对照组比较无统计学差异；与正常对照组比较OGD/R组细胞凋亡率明显高于正常对照组；CBS干扰+OGD/R组与阴性对照组比较，细胞凋亡率无显著差异。结论：OGD/R能够明显诱导SH-SY5Y细胞发生自噬和凋亡，且可能与Akt/mTOR及 NF-κ Bp65/COX-2信号通路相关；CBS基因干扰后对细胞自噬和凋亡均无明显影响。
H2S；自噬；CBS；p-Akt/Akt；p-mTOR/mTOR；NF-κ Bp65；COX-2
S1-15 硫辛酸抑制AIF介导的非Caspase凋亡通路对多巴胺能神经元的保护机制
禹文峰1，2李成朋1，2韩 飞1，2官志忠1，2，3
1. 地方病与少数民族疾病，贵州医科大学教育部重点实验室，贵阳，550004，中国
2. 贵州省医学分子生物学重点实验室，贵州医科大学，贵阳，550004，中国
3. 贵州医科大学附属医院病理科，贵阳，550004，中国
目的：帕金森病（Parkinson’s disease，PD）最主要的病理变化是中脑黑质多巴胺（dopamine，DA）能神经元的变性死亡，但其病理机制仍然不清楚。硫辛酸是丙酮酸脱氢酶的辅助因子，具有抗氧化性和线粒体保护功能，对PD具有一定的治疗效果。本研究旨在探索硫辛酸是否通过抑制致凋亡因子（apoptosis inducing factor，AIF）介导的非Caspase凋亡通路对多巴胺能神经元发挥神经保护功能。方法：6-OHDA诱导建立单侧损毁的PD大鼠模型后，给予硫辛酸干预；通过行为学、NueN和TH免疫染色观察硫辛酸的保护作用；通过Western Blot、免疫组化、激光共聚焦检测硫辛酸是否可以抑制AIF介导非Caspase依赖性凋亡通路对DA能神经元具有保护作用。6-OHDA诱导PC-12细胞损伤建立PD细胞模型，给予LA干预；通过CCK-8、流式和线粒体膜电位检测硫辛酸的保护作用；通过Western Blot和激光共聚焦检测硫辛酸是否可以抑制AIF介导非Caspase依赖性凋亡通路对多巴胺能神经元具有保护作用。结果：在PD模型大鼠上，硫辛酸能够显著缓解PD模型大鼠行为学的改变，显著减缓PD模型大鼠黑质区神经元的丢失；同时，硫辛酸也显著抑制PD模型大鼠黑质区AIF的线粒体释放和细胞核转移。在PD细胞模型上，硫辛酸能够抑制6-OHDA诱导的PC12细胞凋亡，显著抑制6-OHDA诱导的PC12线粒体通透性转变；同时，硫辛酸也显著抑制PC12细胞模型AIF的线粒体释放和细胞核转移。结论：硫辛酸能够通过抑制AIF介导的非Caspase凋亡通路对多巴胺能神经元发挥神经保护功能。
帕金森病；多巴胺能神经元；致凋亡因子；细胞凋亡；硫辛酸
S1-16 CIG以PTPA为靶点降低rTg4510转基因小鼠的tau蛋白磷酸化及病理表现的研究
马登磊 罗 艺 李 林 张 兰
首都医科大学宣武医院药物研究室，神经变性病教育部重点实验室，北京市神经药物工程研究中心，北京，100053，中国
前言：微管相关蛋白tau在阿尔茨海默病（Alzheimer’s Disease，AD）的发病机制中发挥重要的作用，并且得到了越来越多的关注。过表达P301L突变tau蛋白的rTg4510转基因小鼠具有明显的tau病理表现，广泛应用于AD的基础研究及药理研究中。山茱萸环烯醚萜苷（cornel iridoid glycoside，CIG）为中药山茱萸的有效成分，在我室之前的研究中显示CIG在体外模型中可以降低tau蛋白的磷酸化。方法：本研究应用rTg4510小鼠为AD病理模型，给予CIG药物处理3个月后进行行为学检测，之后分别灌注固定取材及新鲜取材。应用Western Blot等方法检测磷酸化tau蛋白、磷酸化调节酶、微管及突触相关蛋白的表达水平；应用免疫荧光等方法观察病理性tau蛋白、微管的形态、突触相关蛋白表达等；应用Serine/Threonine Phosphatase Assay 检测磷酸酯酶PP2A的活性。结果：实验结果显示CIG可以增加rTg4510小鼠在Morris水迷宫中的空间和工作记忆，改善在物体识别实验中的物体识别记忆，降低小鼠的过度活跃状态。同时CIG可以改善rTg4510小鼠的脑萎缩，降低海马区域的神经元的丢失；同时CIG可以增加rTg4510小鼠骨架相关蛋白的表达，改善细胞骨架形态；增加小鼠突触NMDA受体及突触相关蛋白的表达，增加突触的数量。其主要的机制为CIG降低了rTg4510小鼠脑内多个位点的磷酸化，降低了病理性tau蛋白的沉积；同时降低了磷酸化的可溶性和不可溶性tau蛋白。进一步探讨CIG降低磷酸化的机制，发现CIG对于主要的磷酸激酶GSK-3β的作用不明显；而CIG可以增加主要的磷酸酯酶PP2A的甲基化修饰，并且可以调节PP2A甲基化调节酶LCMT-1/PME-1的比例。同时，CIG可以增加内源PP2A酶的激活因子PPP2R4的表达，并增加PP2A酶的活性。结论：CIG可以改善rTg4510转基因小鼠的认知能力，改善脑萎缩和神经元的丢失，保护细胞骨架形态和突触。其主要机制为CIG降低了tau蛋白的过度磷酸化及病理性tau蛋白的沉积。进一步研究发现CIG可能通过增加内源性PP2A激活剂PPP2R4的表达，进而直接或通过调节PP2A的修饰间接地增加PP2A活性。因此本研究提示CIG可能作为一个潜在的以PP2A激活为靶点的抗AD药物。
S1-17 新化合物DHF-7改善CPZ复合MK-801致精神分裂症模型小鼠学习记忆能力及脑白质病变的机制研究
孙争宇 张 兰 李 林
首都医科大学宣武医院药物研究室，北京市神经药物工程技术研究中心，神经变性病教育部重点实验室，北京，100053，中国
目的：DHF-7为我室自行设计并合成的新化合物。本研究探讨DHF-7改善Cuprizone（CPZ）复合MK-801致精神分裂症（SZ）模型小鼠学习记忆能力及脑白质病变的机制。方法：C57BL/6小鼠用含0.2%的CPZ 混合饲料饲养5周后给予MK-801腹腔注射2周造模。DHF-7灌胃给药7周。运用Y-迷宫、旷场试验、新物体识别试验测试行为学改变；通过免疫组化染色及透射电镜观察髓鞘脱失及髓鞘超微结构变化；Western Blot（WB）检测胼胝体部位多种因子及受体的蛋白表达。结果：CPZ+MK-801复合模型组小鼠与正常对照组相比，行为学测试结果表明：模型组自发交替反应、分辨指数下降，出现认知障碍；进臂总次数、活动总距离增加，出现阳性症状；中央区活动距离增加，出现阴性症状。髓鞘碱性蛋白（MBP）免疫组化染色发现胼胝体区域免疫阳性染色变浅；透射电镜发现胼胝体部位有髓神经纤维分布稀疏，间隙扩大，髓鞘板层分离，厚度变薄，有髓轴突数目明显减少，髓鞘脱失明显。WB检测发现：模型组小鼠脑内MBP、CNP、BDNF、p-Fyn、p-TrkB、p-NMDAR2B、p-B-Raf、p-MEK1/2及p-ERK1/2 表达含量下降。灌胃给予DHF-7（25、50 mg·kg-1）干预后，模型小鼠自发交替反应、分辨指数增高，进臂总次数减少，活动总距离、中央区活动距离减少；MBP免疫组化染色发现胼胝体区域免疫阳性染色变深；透射电镜发现胼胝体部位有髓神经纤维排列紧密，髓鞘厚度增加，未出现板层分离，有髓轴突数目明显增加，髓鞘得到修复。WB检测发现DHF-7给药组小鼠脑内MBP、CNP、BDNF、p-Fyn、p-TrkB、p-NMDAR2B、p-B-Raf、p-MEK1/2及p-ERK1/2 表达含量升高。结论：CPZ复合MK-801模型小鼠能够较全面地反映SZ的认知障碍、阳性症状和阴性症状，为SZ深入的机制研究提供了较好的动物模型。新化合物DHF-7能够改善复合模型致SZ小鼠的症状，其学习记忆能力及脑白质病变的改善可能是通过激活BDNF和p-Fyn、p-TrkB、p-NMDAR2B通路发挥作用，为SZ的治疗提供了新的策略和方法。
S1-18 3，4-二羟基苯甲酸甲酯延缓秀丽线虫衰老的作用及作用机制研究
米象男1，3胡 阳2潘君平1信怡榕1王嘉惠1高 勤1罗焕敏1，2，3
1. 暨南大学基础医学院药理学系，广州，510632，中国
2. 暨南大学医学院病理学与病理生理学系，广州，510632，中国
3. 暨南大学脑科学神经药理研究室，广州，510632，中国
目的：本实验室前期工作发现3，4-二羟基苯甲酸甲酯（methyl 3，4-dihydroxybenzoate，MDHB）具有神经保护、抗细胞氧化损伤及延长秀丽线虫寿命的作用。本论文以秀丽线虫（Caenorhabditis elegans，C.elegans）为模型动物，研究MDHB给药前后对秀丽线虫寿命、应激能力等相关指标的影响，旨在进一步探明MDHB延缓线虫衰老的作用及相关机制。方法：本文以秀丽线虫为模型动物测定MDHB对秀丽线虫寿命、运动能力、生殖能力及抗压能力的影响。本实验主要考察了抑菌性、热量限制途径和daf-2/daf-16参与的胰岛素/胰岛素样生长因子信号通路，通过CRISPR-CAS 9、特定基因突变、荧光显微镜分析、荧光酶标仪及Real-Time PCR等方法进一步研究MDHB延缓秀丽线虫衰老的作用及分子机制。结果：首先，本论文观察MDHB对秀丽线虫寿命的影响，结果表明160 mg·L-1MDHB能显著延长野生型秀丽线虫寿命19%，高于阳性药白藜芦醇。此外，MDHB给药后延长eat-2突变株寿命，对于daf-2和daf-2；daf-16缺失突变体MDHB给药后抗衰老作用消失，对于daf-16缺失突变株，MDHB给药后寿命仍延长，但低于MDHB对野生型秀丽线虫的延寿作用。表明热量限制并非MDHB抗衰老的首要机制，MDHB可能主要通过daf-2/daf-16参与的胰岛素/胰岛素样生长因子通路延缓线虫衰老。其次，本文考察了压力胁迫下，MDHB对野生型线虫和突变株线虫的影响，MDHB给药后提高野生型线虫生存率，对daf-16缺失突变株线虫无延寿作用；MDHB还能降低线虫体内活性氧簇（reactive oxygen species，ROS）水平，提高超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活性，表明MDHB可提高抗氧化损伤能力从而延长线虫寿命。最后，Real-Time PCR 结果显示 MDHB处理后线虫体内daf-2下调，daf-16转录活性上调；使用GFP融合共表达株线虫观察MDHB对daf-16入核状态和sod-3及hsp-16.2表达水平的影响，结果显示MDHB促进线虫daf-16入核，影响一系列与压力应激和寿命相关的生理活动，如活化daf-16靶基因sod-3和hsp-16.2。表明MDHB激活daf-16/FOXO信号通路及其下游靶基因，提高线虫抗氧化损伤和抗热压能力，从而延缓线虫衰老。结论：MDHB可能通过调控daf-2/daf-16参与的胰岛素/胰岛素样生长因子通路提高线虫抗压能力从而延长秀丽线虫寿命。
S1-19 磷酸二酯酶5抑制剂淫羊藿次苷II通过BDNF/TrkB/CREB信号通路减轻淀粉样蛋白25-35片段诱导的大鼠学习记忆减退作用及机制研究
刘 双1李小慧1高健美2刘远贵1石京山1龚其海1
1. 遵义医学院基础药理教育部重点实验室暨特色民族药教育部国际合作联合实验室，遵义，563000，中国
2. 遵义医学院药学院临床药物治疗学教研室，遵义，563000，中国
目的：观察淫羊藿次苷Ⅱ（icariside Ⅱ，ICS Ⅱ）抗淀粉样蛋白25-35片段（A β25-35）诱导的大鼠学习记忆减退模型和PC12细胞损伤的作用，并探索其可能的作用机制。方法：60只健康雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠随机分为5组：假手术组、模型组、ICS II低剂量组、ICS II高剂量组、阳性药组，每组12只。模型组大鼠双侧海马注射5 μL（2 μg·μL-1）A β25-35诱导大鼠学习记忆减退模型，假手术组大鼠同法注入等体积生理盐水。造模后开始给药，给药组每日分别灌胃ICS II低、高剂量，阳性药组每日灌胃西地那非，假手术组及模型组灌胃等体积蒸馏水，连续给药15天。造模10天后Morris水迷宫检测大鼠学习记忆功能，连续5天。行为学检测结束后，ELISA法测定海马PDE 5及cGMP 的含量；采用MTT法和ELISA法分别检测细胞的活力和细胞死亡情况，通过TUNEL染色检测细胞凋亡情况，通过流式细胞术和Mito-SOX染色法分别测定细胞内和线粒体内活性氧含量。通过Westren Blot检测Bcl-2、Bax、BDNF、TrkB蛋白表达及active-Caspase-3和p-CREB的水平。结果：模型组较假手术组大鼠的逃避潜伏期明显延长，象限时间和穿越平台次数明显减少；海马PDE 5水平增加，cGMP水平降低，BDNF及TrkB蛋白表达明显降低，其相关调控信号CREB磷酸化水平明显降低。然而，ICS Ⅱ高剂量组大鼠逃避潜伏期较模型组显著缩短，象限时间和穿越平台次数明显增加；海马PDE 5水平降低，cGMP水平明显升高。BDNF、TrkB蛋白表达明显增高，其相关调控信号CREB磷酸化水平明显增加。ICS Ⅱ能够减少A β25-35诱导的PC12细胞氧化损伤，下调Bax的表达及active-Caspase-3的水平，并 上调BCl2、BDNF、TrkB蛋白表达和CREB的磷酸化水平。此外，TrkB抑制剂ANA-12可阻断ICS II对A β25-35诱导的PC12细胞氧化损伤的保护作用。结论：在本实验条件下，ICS Ⅱ可明显减轻A β25-35诱导的大鼠学习记忆减退和PC12细胞凋亡，其机制可能与降低PDE 5和线粒体内活性氧的含量及上调BDNF/TrkB/CREB 信号通路有关。
淫羊藿次苷Ⅱ；磷酸二酯酶5；β-淀粉样蛋白；脑源性神经营养因子；酪氨酸激酶受体B；cAMP反应元件结合蛋白
S1-20 淫羊藿苷急性毒性试验研究
牛红妹
首都医科大学宣武医院药物研究室，北京，100032，中国
目的：观察淫羊藿苷小鼠急性毒性，初步评价其用药安全性。方法：取健康ICR种小鼠28只，体质量18～22 g，随机分为2组（给药组，空白组），每组14只，雌雄各半，选用最大给药量法进行实验。给药组按淫羊藿苷可以灌胃的最大给药浓度（0.36 g·mL-1）及小鼠可承受的最大体积（0.4 mL·10 g-1）灌胃，上下午各一次，空白组羧甲基纤维素钠（CMC）（0.4 mL·10 g-1）灌胃。灌药后4 h内，每1 h观察小鼠死亡情况，行为活动，精神状态等。连续观察14 d，每日称重，记录小鼠的毒性反应、死亡情况，并计算各脏器的脏器指数。结果：无法得出淫羊藿苷LD50；给药后连续观察14 d，小鼠未见中毒反应，无动物死亡；给药14 d后解剖小鼠，肉眼未见脏器异常；脏器指数评价，2组比较无显著性差异（P＞0.05）。结论：小鼠灌胃给药最大给药量为 28.8 g·kg-1，相当于临床成人日用量的253.19倍，提示淫羊藿苷口服毒性小，临床剂量下用药安全。
S1-21 不同高海拔地区藏族轻度认知功能障碍和阿尔茨海默患者血清氧化相关酶与血红蛋白相关研究
李国锋 钟 欣 杜 灿 郭祥星 彭 海 朱爱琴
青海省人民医院老年医学研究所，西宁，810007，中国
目的：探讨不同高海拔地区藏族轻度认知功能障碍（mild cognitive impairment，MCI）和阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）患者血红蛋白与血清氧化相关酶的变化。方法：选取青海地区：西宁市（中高海拔地区，海拔2 260 m）和玉树市（高海拔地区，海拔4 000 m）世居藏族MCI和AD患者和藏族健康对照组各30例。采用ELISA法测定血清氧化相关酶：丙二醛（MDA），8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平。外周血的红细胞计数（RBCs）、红细胞压积（HCT）和血红蛋白（HB）水平采用美国贝克曼全自动血细胞分析仪检测。结果：和对照组比较，高海拔地区MCI组和中、高海拔地区AD组GSH-PX、8-OHdG和HB水平明显增加，MDA降低明显；和中海拔MCI组和AD组比较，高海拔地区MCI组和AD组RBCs、HCT、HB、GSH-PX和8-OHdG显著增高。高海拔地区藏族健康老人8-OHdG也增高明显。Pearson相关分析发现高浓度HB与血清MDA和8-OHdG有密切关系。结论：高海拔地区的世居藏族老人认知功能减退的早期氧化应激损伤就已经出现并随着海拔和病情严重程度而增高。高原地区MCI和AD患者红细胞增多与氧化应激反应有一定相关性。
S1-22 Nogo-66调节神经细胞β淀粉样蛋白代谢的机制
曹巧玉 黄依韵 谢青青 罗焕敏 肖 飞 郑 青
暨南大学基础医学院，暨南大学药学院，广州，510632，中国
目的：本文重点研究Nogo-66对β淀粉样蛋白（A β）代谢的调节作用及其分子机制，对Nogo-66作用机制进行完善；同时，探讨抑Nogo-66作用对延缓和阻止AD进程的影响。方法：①体外培养新生大鼠原代皮质神经元两天后，加入不同浓度的Nogo-66处理，观察细胞形态及定量分析突起生长状况。②通过ELISA检测不同浓度Nogo-66作用原代皮质神经元后，A β的变化情况。提取新生大鼠原代皮质神经元后，培养两天，加入不同浓度的Nogo-66处理，继续培养48 h，收集上清培养基，检测细胞分泌的A β40和A β42含量。③体外培养新生大鼠原代皮质神经元两天后，分别加入不同浓度的Nogo-66受体阻断剂NEP1-40、受体下游信号分子ROCK（rho-associated coiled coil-containing protein kinase）的抑制剂Y-27632预保护1 h后，用终浓度为1 μmol·L-1的Nogo-66处理细胞，继续培养48 h，收集上清培养基，检测细胞分泌的A β40和A β42含量。④体外培养新生大鼠原代皮质神经元两天后，用2 μmol·L-1的NEP1-40和100 μmol·L-1的Y-27632进行预保护，采用1 μ mol·L-1的Nogo-66处理细胞造模，Western Blotting检测Nogo-66下游信号ROCK通路上各相关蛋白的表达及其磷酸化水平。结果：①形态学观测结果显示，当浓度为4 μ mol·L-1、16 μmol·L-1时，神经元具有明显损伤。MAP2免疫荧光结果显示，Nogo-66能显著性抑制突起再生，0.25 μmol·L-1、1 μmol·L-1各剂量组皮质神经元平均突起长度显著性降低，具有效关系。表明Nogo-66能抑制原代皮质神经元突起的再生。②ELISA结果显示，Nogo-66能促进A β40和A β42含量。其中 0.5 μmol·L-1、1 μmol·L-1的 Nogo-66 能显著增加原代皮质神经元培养基中的 A β40和 A β42含量，具有量效关系。③加入Nogo-66受体阻断剂NEP1-40、ROCK抑制剂Y-27632后，ELISA结果显示，与Nogo-66模型组相比，2 μmol·L-1的NEP1-40能拮抗Nogo-66，显著性降低原代皮质神经元培养基中的 A β40的含量；50 μmol·L-1、100 μmol·L-1的 Y-27632 能拮抗 Nogo-66，显著性降低培养基中的A β40和A β42的含量，但量效关系不明显。筛选出 NEP1-40和Y-27632最佳作用浓度分别为：2 μmol·L-1、100 μmol·L-1。④ELISA 结果显示，Nogo-66 模型组（只加 Nogo-66，不加抑制剂）能显著增加原代皮质神经元和N2a过表达细胞株（由澳门科技大学馈赠）培养基中A β40和A β42的含量。Nogo-66受体阻断剂NEP1-40和ROCK抑制剂 Y-27632能拮抗Nogo-66，显著性降低培养基中的 A β40和 A β42的含量。⑤Western Bolt结果显示，0.5 μmol·L-1、1 μmol·L-1的 Nogo-66 能显著性增加原代皮质神经元细胞和 N2a过表达细胞株的ROCK2和磷酸化的CRMP2的表达水平，且具有明显的剂量依赖性。结论：①Nogo-66能抑制原代皮质神经元突起再生，且促进皮质神经元分泌A β40和A β42；②Nogo-66是通过激活Nogo-66受体及下游信号分子ROCK2和p-CRMP2抑制原代皮质神经元突起再生并促进分泌 A β40和A β42。
S1-23 临床前期阿尔茨海默病（PCAD)防治疗法及安全性
崔德华 王贺成 肖卫忠 樊东升 郭向阳 韩鸿宾
北京大学第三医院，北京，100191，中国
背景：阿尔茨海默病（AD）是一种与年龄密切相关的神经退行性疾病。随着我国的人口老龄化趋势加剧，该病的发病人数与发病率也逐年提高。AD 的发病隐袭，病程长，多中心临床药物试验，因安全性隐患导致失败。目前临床前期AD（PCAD）的防治药物研发安全性问题更为重要。目的：探究以A β为靶标的口服AD疫苗对于A β清除的相关生物学机制，研究口服AD疫苗能否即安全又能阻止AD病理进展及改善临床症状。方法：口服疫苗研制及试验方法参照本实验室及国内外合作已发表论文。结果：①我们发现该口服疫苗可以有效地感染HEK293细胞系，并可以使细胞稳定的表达A β，具有较好的疫苗活性。在动物实验中，我们采用 APP/PS1转基因小鼠模型，在口服AD疫苗免疫后利用ELISA的方法进行检测脑组织A β水平，发现口服疫苗可以显著地降低A β水平，证明了该口服AD疫苗的有效性。同时我们发现口服免疫后小鼠的体重无明显改变，体型、色泽、血常规等无变化，初步证明了口服AD疫苗对于小鼠的安全性。②我们发现口服疫苗可以上调脑组织内自噬相关指标LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比例，下调p62蛋白的水平，提高了LC3和A β的共定位，说明口服AD疫苗免疫后脑内自噬功能被上调；Akt/mTOR信号通路被抑制；同时我们也发现抗体与补体C1q&C3水平在给予疫苗后显著上升。这些结果提示口服疫苗可能通过自噬增强及活化抗体、补体系统促进A β清除。结论：口服AD疫苗能够安全有效地促进脑内Aβ的清除，其作用机制可能为通过对Akt/mTOR的抑制继而提高自噬活性，同时口服免疫可以提高抗体以及补体关键蛋白水平，促进Aβ清除。在动物体系具有比较好的安全性。我们的研究初步揭示了参与Aβ清除的两条重要途径的影响因素及其机制，阐明了口服AD疫苗为临床早期干预AD提供了新的理论与新途径（Fig.1，2）。
Fig.1 Schema of the established effects of oral rAAV/Aβ vaccination on Aβ clearance
Fig.2 Oral vaccination is likely to be a safe and effective strategy for early intervention in AD
S1-24 基于LPS诱导小鼠炎症模型的LW-AFC抗炎作用研究
曾 菊1，2程 斌1，2程肖蕊1，2周文霞1，2张永祥1，2
1. 军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所，北京，100850，中国
2. 国家抗毒药物和毒理学重点实验室，北京 100850，中国
目的：免疫炎症学说是阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）的重要发病机制学说之一，为研究中药五类新药六味地黄苷糖（LW-AFC）是否可通过抗炎发挥防治AD的作用，本课题采用脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导小鼠炎症模型，观察六味地黄苷糖（LW-AFC）对在体小鼠长时程增强（long-term potentiation，LTP）的作用及其可能的机制。方法：灌胃给予雄性BALB/c小鼠LW-AFC两周，第14 d给药结束后30 min腹腔单次注射LPS（250 μg·kg-1），4 h后在体记录兴奋性突触后电位，其后取血测定外周血淋巴细胞亚群，外周血和脑组织中炎性细胞因子以及脑组织中小胶质细胞和星形胶质细胞激活情况。结果：腹腔注射LPS 4 h后小鼠海马DG区的兴奋性突触后电位降低，即LTP减弱，预防给予LW-AFC可明显减轻LTP减弱，说明LW-AFC可保护炎症所致小鼠神经突触可塑性损伤。进而发现，LW-AFC可显著提高炎症模型小鼠脾脏淋巴细胞中CD19+细胞的比例，调低CD4+/CD3+细胞比例；同时，LW-AFC能明显升高外周血中CD3+/CD4+细胞比例，降低CD4+/CD3+细胞比例。此外，LW-AFC还可显著降低炎症小鼠外周血、海马和大脑皮层中炎症相关细胞因子 TNFα、IL-6、IL-1 β、IL-12、INFγ、IL-10、MCP-1 的水平，脑组织中尤其海马部位炎症因子下降更为显著。脑组织切片免疫荧光染色结果显示预防给予LW-AFC可明显抑制小胶质细胞的过度激活。结论：LW-AFC对炎症所致突触可塑性受损具有明显保护作用，其作用可能与调节淋巴细胞亚群及抑制炎性细胞因子水平有关，提示LW-AFC可能通过抑制炎症反应发挥防治AD作用。
LW-AFC；突触可塑性；炎症因子；淋巴细胞亚群
S1-25 基于 快速老化模型小鼠SAMP8的CA-30抗阿尔茨海默病的作用研究
雷 曦1，2王健辉1，2程肖蕊1，2张小锐1，2刘 港1，2周文霞1，2张永祥1，2
1. 军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所，北京，100850，中国
2. 抗毒药物与毒理学国家重点实验室，北京，100850，中国
目的：采用阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）的动物模型-快速老化模型小鼠SAMP8，研究六味地黄汤活性部位CA-30防治AD的作用及可能机制。方法：应用筑巢试验观察小鼠的日常活动执行能力，微弱光线旷场检测小鼠的自主活动度，Morris水迷宫实验和穿梭箱实验分别观察CA-30对小鼠空间学习记忆能力和主动回避反应能力的影响；采用放射免疫法和酶联免疫吸附法检测下丘脑-垂体-肾上腺轴（hypothalamic-pituitary-adrenal，HPA）和下丘脑-垂体-性腺轴（hypothalamic-pituitary-gonadal，HPG）中相关激素的水平；采用流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚型、采用液相蛋白芯片技术检测血浆中细胞因子的含量；采用宏基因组测序方法检测肠道菌群。结果：与正常对照组相比，SAMP8的老化度评分显著升高，自主活动性、筑巢能力、空间学习记忆能力和主动回避反应能力均显著降低。给予CA-30能够明显改善其老化征象，提高其自主活动度、空间学习记忆能力和主动回避反应能力。同时，与正常对照相比，SAMP8的神经内分泌免疫调节（neuroendocrine immunomodulation，NIM）网络平衡失调，给予CA-30对其NIM网络平衡失调具有调节作用，具体表现为：CA-30能够显著降低SAMP8小鼠HPG轴中促性腺激素释放激素（gonadotrophin releasing hormone，GnRH）、黄体生成素（luteinizing hormone，LH）和卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone，TSH）的分泌水平，增加外周血中B细胞（CD19+）的表达量，减少抑制性 T 细胞（CD3e+，CD8a+）、调节性 T 细胞（CD4+，CD25+）和活化 T 细胞（CD3e+，CD25+）的表达量，此外，CA-30还能纠正抗炎细胞因子IL-4、IL-5水平的降低，从而改善SAMP8免疫功能低下的状态。与正常对照相比，SAMP8的菌群物种丰度在门、纲、目、科、属、种水平上均存在显著差异，CA-30能够显著改善SAMP8在5个层级水平上的菌群物种紊乱，调节百分比分别为：门12.5%、纲28.6%、目25%、科27.8%、属13.8%，提示给予CA-30能够改善SAMP8肠道菌群的紊乱状态。结论：六味地黄活性部位CA-30能够改善快速老化型AD模型小鼠SAMP8学习记忆能力，同时可调节肠道菌群以及NIM网络平衡，提示CA-30有可能成为防治AD的潜在药物。
CA-30；阿尔茨海默病；SAMP8；学习记忆；神经内分泌免疫调节网络；肠道菌群
S1-26 山茱萸环烯醚萜苷对血管性痴呆大鼠模型学习记忆功能的影响
孟 敏
首都医科大学宣武医院，北京，100053，中国
目的：明确山茱萸环烯醚萜苷对双侧颈总动脉结扎所致血管性痴呆大鼠模型的药效学作用。方法：106只SD大鼠随机分为7组（假手术组，模型组，CIG小剂量组，CIG中剂量组，CIG大剂量组，尼莫地平组，血塞通组），行双侧颈总动脉结扎手术（假手术组只游离，不结扎），以尼莫地平和血塞通作为阳性对照药，术后6 h开始，按1 mL·100 g-1体重给予灌胃给药，每日一次（假手术组和模型组给予等体积蒸馏水）。给药30日及90日进行Morris水迷宫、物体识别实验和避暗实验，观察山茱萸环烯醚萜苷对血管性痴呆大鼠模型学习记忆功能的影响。采用免疫组织化学方法，检测大鼠脑内神经元存活情况和乙酰胆碱转移酶（choline acetyl transferase，ChAT）表达。结果：给药30日后，模型组与假手术组比较，物体识别指数明显下降，差异具有显著性（P＜0.05），给药后物体识别指数上升，差异具有统计学意义（P＜0.05）。给药90日后，模型组与假手术组比较，物体识别指数明显下降，差异具有显著性差异（P＜0.05），给药后物体识别指数上升，差异具有统计学意义（P＜0.05）；模型组与假手术组相比，Morris水迷宫逃避潜伏期明显加长，差异具有统计学意义，给予山茱萸环烯醚萜苷给药后，逃避潜伏期明显缩短，差异具有统计学意义（P＜0.05）。免疫组化的结果显示，模型组大鼠皮层和海马的NeuN神经元减少，ChAT表达量减少，给予CIG灌胃给药后，神经元存活数量明显增加，ChAT表达量显著增高。结论：山茱萸环烯醚萜苷能够通过保护神经元和促进ChAT表达，改善血管性痴呆大鼠模型的学习记忆能力。
S1-27 药物组合吲哚美辛与阿托伐他汀对阿尔茨海默病的治疗作用研究
王健辉1，2程肖蕊1，2张小锐1，2刘 港1，2周文霞1，2张永祥1，2
1. 军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所，北京，100850，中国
2. 抗毒药物与毒理学国家重点实验室，北京，100850，中国
目的：观察吲哚美辛与阿托伐他汀组合对阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）的治疗作用。方法：在口服给予APP/PS1转基因小鼠药物组合吲哚美辛与阿托伐他汀90 d后进行Morris水迷宫和穿梭箱实验，并应用免疫荧光染色技术，观察小鼠脑中的A β沉积；应用AlphaLISA技术检测小鼠中枢以及外周血中的A β含量；应用液相蛋白芯片技术和流式细胞术，检测小鼠外周血中细胞因子和脾细胞上清液中淋巴细胞亚型；应用放射免疫和化学发光技术，检测小鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴（hypothalamic-pituitary-adrenal，HPA）和下丘脑-垂体-性腺轴（hypothalamicpituitary-gonadal，HPG）中的相关激素水平。结果：药物组合吲哚美辛与阿托伐他汀能够显著改善APP/PS1转基因小鼠的空间学习记忆能力和主动回避反应能力，降低海马中的A β沉积以及A β1-42水平，显著抑制外周血中促炎因子 IL-1 β、IL-23、GM-CSF、TNF-α、NF-β和 eotaxin 的分泌，并促进抑炎因子IL-4和G-CSF的分泌。同时，药物组合吲哚美辛与阿托伐他汀能够增加CD4+，CD28+T细胞的数量，降低CD4+，CD25+，Foxp3+T细胞的数量，显著降低HPA轴中ACTH、HPG轴中GnRH和LH的水平。结论：药物组合吲哚美辛与阿托伐他汀合用能够改善APP/PS1转基因小鼠紊乱的免疫系统，调节神经内分泌系统的失衡，进而改善APP/PS1转基因小鼠的学习记忆能力和病理损伤，提示吲哚美辛与阿托伐他汀的组合有可能成为防治AD的潜在药物。
吲哚美辛；阿托伐他汀；阿尔茨海默病；APP/PS1转基因小鼠；学习记忆；A β；细胞因子；淋巴细胞亚型；神经内分泌
S1-28 快速老化模型小鼠海马囊泡谷氨酸转运体表达与兴奋性毒性关系的研究
王 静1，2程肖蕊1，2周文霞1，2张永祥1，2
1. 军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所，北京，100850，中国
2. 抗毒药物与药理学国家重点实验室，北京，100850，中国
目的：已有研究表明，阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）的发病机制与谷氨酸兴奋性毒性有关，囊泡谷氨酸转运体（vesicular glutamate transporters，VGLUTs）位于谷氨酸能突触前神经元的囊泡膜上，特异地将细胞质中的谷氨酸转运进突触囊泡，其在囊泡膜上的数量以及囊泡外胞质中的谷氨酸浓度，决定了其转运谷氨酸进入囊泡的速度和囊泡的填充程度。然而，在AD病人大脑皮层中VGLUT1与VGLUT2显著减少，但是却存在严重的谷氨酸（glutamic acid，Glu）兴奋性毒性这一矛盾现象。本研究的目的是采用AD动物模型探讨VGLUTs减少但却存在谷氨酸兴奋性毒性的可能原因。方法：采用微透析技术，采集快速老化模型小鼠SAMP8及其对照SAMR1海马部位组织间液，通过 HPLC电化学方法检测氨基酸类神经递质的含量。采用Western Blot方法，检测海马中VGLUT1和VGLUT2的表达，并检测降解VGLUTs的酶calpain、caspase3的表达及Glu作用的突触后受体NMDA、AMPA的表达情况，同时检测高亲和力谷氨酸转运体EAAT1/2、谷氨酰胺酶、谷氨酰胺合酶，以及谷氨酰胺转运相关的SN1、SAT1的表达。结果：与SAMR1相比，SAMP8小鼠海马部位VGLUT1/2表达降低，海马组织间液Glu升高。一方面，位于星形胶质细胞上的Glu转运体EAAT1和 EAAT2表达降低，另一方面，突触后膜上NMDAR1、NMDAR2A、NMDAR2B、NMDAR2C、NMDAR2D的表达降低，AMPA2表达升高，提示可能是由于这两个方面的因素导致了突触间隙Glu浓度过高，造成了兴奋性毒性。在SAMP8小鼠海马部位，谷氨酰胺合酶和谷氨酰胺酶降低，转运谷氨酰胺的转运体SN1降低、SAT1升高，提示这可能会导致胞质中Glu减少，从而反馈调节VGLUTs的表达降低，同时，降解VGLUT1/2的酶caspase3表达增加，两者最终导致了SAMP8小鼠海马中VGLUTs减少。结论：AD动物模型SAMP8海马中VGLUTs减少而Glu增多，其可能原因是降解VGLUT1/2的酶增多和胞质中Glu减少，同时突触后Glu受体和EAAT1/2表达降低。
阿尔茨海默病；囊泡谷氨酸转运体；谷氨酸；突触后受体
S1-29 疾病特异性诱导性多功能干细胞AD模型建立
张 林1，2，3蒋 宁1，2周文霞1，2张永祥1，2
1. 军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所，北京，100850，中国
2. 抗毒药物与毒理学国家重点实验室，北京， 100850，中国
3. 沈阳药科大学，沈阳，110015，中国
目的：将阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）患者和认知正常人的血细胞重编程为诱导性多功能干细胞（induced pluripotent stem cells，iPSCs），进一步诱导为神经干细胞和神经元，观察不同来源iPSCs向神经干细胞和神经元分化能力的差别及细胞凋亡情况。方法：将散发性AD患者和认知正常人来源的外周血细胞重编程为iPSCs，进一步诱导为神经干细胞和神经元，应用IncuCyte ZOOM动态细胞观察系统记录分化过程中细胞生长曲线，应用免疫细胞荧光实验对诱导得到的神经干细胞和神经元进行鉴定，采用TUNEL原位末端标记法检测诱导得到神经干细胞和神经元的细胞凋亡情况。结果：经过7 d诱导，iPSCs可分化为神经干细胞，AD患者和认知正常人来源神经干细胞均可表达神经干细胞标记物Nestin，Sox1，Sox2和Ki67。AD患者来源的神经干细胞的生长曲线低于认知正常人。增殖标记物Ki67染色结果显示，AD患者和认知正常人来源神经干细胞中Ki67阳性细胞比例没有显著差异，TUNEL检测结果显示AD患者来源神经干细胞中TUNEL阳性细胞显著多于认知正常人（P＜0.001），提示导致AD患者来源的神经干细胞的生长曲线低于认知正常人的原因可能与AD患者来源的神经干细胞凋亡增多相关。神经干细胞向神经元诱导分化第1天时，AD患者来源神经干细胞诱导培养板中MAP2阳性细胞比例为11.7%，显著高于认知正常人培养板中MAP2阳性细胞比例2.9%（P＜0.01）；诱导至第16天时，AD患者来源神经干细胞诱导培养板中MAP2阳性细胞比例为83.8%，显著高于认知正常人培养板中MAP2阳性细胞比例51.3%（P＜0.001）；TUNEL检测结果显示分化至第16天时，AD患者来源神经元中TUNEL阳性细胞显著多于认知正常人（P＜0.001）。结论：AD患者来源神经干细胞向神经元分化时分化速度大于认知正常人iPSCs诱导的神经干细胞，且分化的神经元凋亡多于认知正常人。由AD患者iPSCs诱导得到的神经干细胞和神经元凋亡增多，与AD患者大脑中神经细胞丢失的病理特征相似，提示其可以作为一种研究AD发病机制及药物筛选的模型。
阿尔茨海默病；诱导性多功能干细胞；神经干细胞；神经元；细胞凋亡
S1-30 SOD模拟物AEOL-10150延长SAMR1小鼠平均寿命并抑制衰老相关分泌表型
张小锐1，2程肖蕊1，2王健辉2曾 菊2马丁丁2张宏超2周文霞1，2张永祥1，2
1. 军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所，北京，100850，中国
2. 抗毒药物与毒理学国家重点实验室，北京，100850，中国
目的：观察SOD模拟剂AEOL-10150在抗快速老化小鼠（SAMR1）上的抗衰老作用及其作用机制。方法：18月龄SAMR1小鼠，雌雄各半，每周皮下注射AEOL-10150（2 mg·kg-1）1次，连续给药直到动物死亡。采用Morris水迷宫，新物体识别，筑巢实验和强迫游泳实验观察动物的行为变化。通过免疫荧光观察脑组织中DCX+神经元的数量。流式细胞术检测造血干细胞、淋巴细胞亚群和ROS水平。细胞因子水平用Luminex法测定。结果：AEOL-10150能延长SAMR1小鼠的平均寿命，但对最大寿命没有明显影响。此外，AEOL-10150能显着提高老年小鼠空间学习记忆能力，但不能增加下丘脑MBH区和海马DG区DCX+神经元的数量。我们进一步观察了AEOL-10150对外周血造血干细胞和淋巴细胞亚群和细胞因子的影响。结果显示，AEOL-10150能显著延缓造血干细胞的消耗，调节淋巴细胞亚群和细胞因子的释放。其中，AEOL-10150能够剂量依赖性地抑制血浆中衰老相关分泌表型（senescence-associated secretory phenotype，SASP）相关炎性细胞因子TNF-α和IL-17的水平。结论：AEOL-10150具有抗衰老作用，其抗衰老作用可能与调节免疫力及抑制SASP产生密切相关。
衰老；SOD模拟物；平均寿命；衰老相关分泌表型
S1-31 新型小分子化合物OAB-14改善AD模型动物认知障碍作用及机制研究
邹莉波 袁春玲 郭晓丽 周晓昱 陈国良
沈阳药科大学，生命科学与生物制药学院，沈阳，110016，中国
目的：阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）发病机制复杂，相关假说众多。尽管存在争议，A β毒性假说仍是最为公认的主要致病机制之一。据报道，抗肿瘤药贝沙罗汀能够快速清除AD模型小鼠脑内A β并改善学习记忆障碍，但其不良反应严重。我们参考贝沙罗汀合成了一系列化合物，并从中筛选出一个新型小分子化合物OAB-14。本研究旨在考察OAB-14对AD模型小鼠学习记忆障碍的改善作用及对神经元和突触可塑性的影响，并从A β生成、清除两个方面考察OAB-14对A β的作用。方法：采用8月龄APP/PS1双转基因小鼠，灌胃给予OAB-14（50、100和200 mg·kg-1）、贝沙罗汀（100 mg·kg-1）或溶剂，连续给药15天。给药第6天开始依次进行新物体辨别、Y迷宫、Morris水迷宫实验。采用Western Blot方法考察OAB-14对A β生成相关蛋白、A β降解酶、突触相关蛋白、M1/M2型小胶质细胞标志物、神经炎症因子、ApoE通路相关蛋白及ApoE亚型的影响；采用非变性凝胶电泳考察酯化ApoE的水平；采用免疫组化和Thio-S检测A β沉积；ELISA法测定可溶和不溶性A β1-40、A β1-42含量；采用免疫荧光对小胶质细胞和A β进行共定位；透射电镜检测海马CA1区神经元细胞核、线粒体、突触超微结构。结果：模型组小鼠在新物体辨别、Y迷宫、Morris水迷宫实验中表现出显著的形象辨别记忆、工作记忆和空间学习记忆障碍；社会交往实验中主动接触时间缩短，社会交往能力下降；筑巢实验中生活自理能力也显著下降。与模型组相比，OAB-14能剂量依赖性地改善APP/PS1小鼠形象辨别记忆、工作记忆、空间学习记忆障碍，提高小鼠社会交往能力及生活自理能力。OAB-14 200 mg·kg-1连续给药15 d，对A β生成相关蛋白APP、ADAM10、BACE-1、PS1的表达没有显著影响，提示OAB-14可能不影响A β的生成。OAB-14显著增加A β降解酶NEP、IDE的表达；增加ApoE、ABCA1、ABCG1的表达，提高酯化ApoE水平，增加小胶质细胞吞噬A β。提示OAB-14可能通过活化ApoE通路，并提高A β降解酶的表达，增加脑内可溶性A β的清除。OAB-14还能显著提高小胶质细胞表面受体CD36的表达，从而促进对纤维化A β的清除。OAB-14促进小胶质细胞由促炎的M1型向抗炎、吞噬的M2型转换，在增加其对A β清除的同时，减少炎症因子的表达。透射电镜结果显示，OAB-14能促进APP/PS1小鼠海马神经元细胞损伤的修复，改善突触超微结构，增加NeuN标记的神经元细胞数及NeuN蛋白表达。OAB-14可显著增加ApoE3的表达，降低ApoE4的表达，增加H3的乙酰化水平，活化BDNF通路，提高突触相关蛋白SYP、GAP43、PSD95的表达。结论：OAB-14能显著改善APP/PS1双转基因小鼠的学习记忆障碍，减少脑内A β沉积，其机制可能与增加A β降解酶表达，活化ApoE通路，提高小胶质细胞对A β的清除有关。同时，OAB-14能减少海马神经元丢失及提高突触可塑性，这可能与减少A β对神经元的毒性以及活化BDNF/TrkB/raf/ERK信号通路有关。本课题的研究为将OAB-14开发为抗AD新药提供了药效学依据。
S1-32 基于 非标记液相色谱-串联质谱组学方法的阿尔茨海默病血清生物标志物的研究
许婷婷1郭 鹏2张 巍2王晓良1
1. 中国医学科学院北京协和医学院，药物研究所，北京，100050，中国
2. 首都医科大学附属北京天坛医院，北京，100050，中国
目的：通过非标记液相色谱-串联质谱（liquid chromatography-tandem mass spectrometry，LC-MS/MS）组学的方法寻找在AD患者和年龄相匹配的健康对照者（healthy control，HC）血清中存在的差异蛋白，为AD的早期诊断与预测提供相关依据。方法：本研究共收集AD患者血清和HC血清各40个，然后每5个样品等体积混合成一个样品池即每组n=8，经去除血清中两种高峰度蛋白即白蛋白和IgG处理后，进行非标记液相色谱-串联质谱组学分析，鉴定到一些在AD疾病组和HC对照组中存在的差异蛋白，然后采用ELISA和Western Blotting（WB）方法进行扩大验证组学结果中鉴定到的部分差异蛋白，目前研究阶段共验证了以下 6个差异蛋白，分别是 Apolipoprotein M（ApoM）、Kininogen-1（KNG1）、Apolipoprotein F（ApoF）、S100A8、Platelet factor 4（PF4）和 C4b-binding protein beta chain（C4BPB）；除了验证上述组学中的部分差异蛋白外，我们还在同一批样本中验证了3个与AD发病有关的蛋白即Apolipoprotein E（ApoE）、Complement C3（C3）和 Complement factor H（CFH）。结果：在 AD 疾病组和HC对照组中组学分析结果共鉴定到61个差异蛋白，其中在AD疾病组中表达上调的蛋白共26个，表达下调的蛋白共35个；扩大验证结果如下：①ELISA结果表明ApoM和KNG1在AD患者血清中的含量与HC相比都是显著下降的，该结果与组学结果一致；②ELISA结果显示ApoF和C4BPB在两组中的含量不具有统计学差异；③S100A8的ELISA结果表明该蛋白在AD患者血清中的含量是显著上升的，但ELISA结果与组学结果相矛盾，具体原因待查，PF4的ELISA和WB结果均证明该蛋白在AD患者血清中的含量是显著降低的；④ELISA数据结果显示ApoE在两组中的含量不具有统计学差异，CFH在AD患者血清中表达显著上调，而C3在AD患者血清中表达显著下调。结论：本研究结果表明ApoM、KNG1、CFH、C3和PF4这5个蛋白有望成为AD候选的血液生物标志物，这些蛋白主要参与胆固醇转运、补体和凝血反应、免疫应答以及炎症等过程，可能参与AD的发病过程。但仍需要进行更大规模的临床验证。
S1-33 Cuprizone对少突胶质细胞相关蛋白的影响
顾丽红 李 林
首都医科大学宣武医院药物研究室，北京市神经药物工程技术研究中心，神经变性病教育部重点实验室，北京，100053，中国
目的：研究双环己酮草酰双腙（cuprizone）对少突胶质细胞（oligodendrocytes，OLs）相关蛋白的影响。方法：新生24 h Sprague-Dawley（SD）大鼠的大脑皮层胶质细胞混合培养7天后，采用恒温摇床振荡分离与差异贴壁方法并结合条件培养基纯化培养细胞，纯化培养3 d后加入含有25 nmol·L-1cuprizone培养基继续培养3 d。光学显微镜观察细胞形态；免疫荧光染色鉴定细胞类型。Western Blot检测MBP、Fyn、Erk1/2等蛋白的含量。结果：获得高纯度成熟的少突胶质细胞，荧光MBP染色阳性。相较于正常细胞组蛋白，Cuprizone组细胞MBP，Erk1/2及磷酸化Fyn（416位点）蛋白含量明显降低。结论：Cuprizone对髓鞘形成细胞-少突胶质细胞相关蛋白的表达成抑制作用。
少突胶质细胞；细胞培养；双环己酮草酰双腙
