各基因型乳腺癌C—kit的表达及其临床意义

徐斌 余英豪 郑曦 吴钦穗

[摘要] 目的 观察各基因型乳腺癌C-kit的表达情况，探讨C-kit检验的临床意义。方法 随机选取福州市第一医院2014年1月—2016年2月间收治的乳腺浸润癌患者200例作为样本，对具有完整资料乳腺浸润癌患者标本进行ER、PR、HER-2、CK5/6、EGFR检测，并选取100例患者给予Gleevec靶向治疗。观察各基因型乳腺癌C-kit的表达情况，观察Gleevec靶向治疗的临床疗效。结果 肿瘤直径≤2 cm、无淋巴结转移、乳腺癌分期为1期与2期、乳腺癌分级为1级者，C-kit的阳性表达率更高。给予Gleevec靶向治疗，有效率为67.0%。结论 临床可采用C-kit检验的方法，对患者的病情加以评估，以为疾病治疗方案的制定提供参考，使疾病治疗的有效率得以提升，使乳腺癌患者的寿命得以延长。

[关键词] 乳腺癌；酪氨酸激酶C-kit；Gleevec靶向治疗

[中图分类号] R5 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2018）01（a）-0031-03

Expression and Clinical Significance of C-kit in Breast Cancer of Different Genotypes

XU Bin1， YU Ying-hao2， ZHENG Xi1， WU Qin-sui1

1.Department of Pathology， the First Hospital of Fujian， Fuzhou， Fujian Province， 350009 China； 2.Department of pathology Fuzhou General Hospital， Fuzhou， Fujian Province， 350025 China

[Abstract] Objective This paper tries to observe the expression of C-kit in breast cancer of different genotypes and to explore the clinical significance of C-kit test. Methods 200 patients with invasive breast cancer treated in the First Hospital of Fujian from January 2014 to February 2016 were selected as the samples. ER， PR， HER-2， CK5/6 and EGFR were detected in patients with invasive breast cancer with complete data， and 100 patients were treated with Gleevec targeted therapy to observe the expression of C-kit in various genotypes of breast cancer and to observe the clinical efficacy of Gleevec targeted therapy. Results The tumor diameter less than 2 cm， lymph node metastasis， staging of breast cancer was stage 1 and 2， grade 1 of breast cancer， the positive expression rate of C-kit was higher. The effective rate of Gleevec targeted therapy was 67.0%. Conclusion Clinical C-kit test can be used to evaluate the patients condition， and to provide reference for the formulation of disease treatment program， so that the effective rate of disease treatment can be improved， and the life span of breast cancer patients can be prolonged.

[Key words] Breast cancer； Tyrosine kinase C-kit； Gleevec targeted therapy

乳腺癌为女性常见的恶性肿瘤，是影响女性健康水平及生活质量的主要疾病。受特异性初筛指标缺乏的影响，患者早期症状多不明显。确诊时，疾病往往已进入进展期。有研究指出[1]，酪氨酸激酶C-kit是參与到肿瘤生长中的主要物质，将吉非替尼等酪氨酸激酶抑制剂应用到乳腺癌的治疗中，效果显著。该院2014年1月—2016年2月间收治的乳腺浸润癌患者中，随机选取200例作为样本，观察了各基因型乳腺癌C-kit的表达情况，并对其临床意义进行了分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

于该院收治的乳腺浸润癌患者中，随机选取200例作为样本。患者资料如下：性别均为女性。年龄36～60岁，平均（50.00±3.01）岁。患者术前均未做化疗、免疫或放射治疗。

1.2 方法

1.2.1 免疫组化方法检测HER-2 免疫组化采用EliVisionTMplus免疫组化染色方法。主要步骤如下：石蜡切片脱蜡、水化，PBS冲洗3×3 min；高温高压抗原修复；加3%过氧化氢溶液，室温下孵育10 min，以阻断内源性过氧化物酶；PBS冲洗3×3 min；加第一抗体，室温下孵育60 min；PBS冲洗3×5 min；加聚合物增强剂（试剂A），室温下孵育20 min；PBS冲洗3×3 min；加酶标抗鼠聚合物（试剂B），室温下孵育30 min；PBS冲洗3×3 min；加新配制的DAB显色液，显微镜下观察3～10 min，阳性显色为棕色；自来水冲洗，苏木素复染，0.1%盐酸分化，自来水冲洗，PBS冲洗返蓝；梯度酒精脱水干燥，中性树脂封片。

1.2.2 FISH方法检测HER-2基因扩增 将免疫组化结果中出现强阳性标本病例（+++）及部分中等阳性（++）病例采用FISH方法进行HER-2基因擴增检测。①切片预处理：取3 μm 厚乳腺癌组织石蜡切片，分别置于涂多聚赖酸载玻片上，置于68℃下过夜烘烤。室温下组织切片常规脱蜡至去离子水；50℃用30%[w/v] 酸性亚硫酸钠处理组织切片30 min。2×SSC 溶液中（pH=7.0） 漂洗5 min×2；37℃下取0.40 mL蛋白酶K 储存液（20 mg/mL） 溶于40 mL 2×SSC（pH=7.0）得到蛋白酶K工作液（200 μg/mL） ； 将组织切片浸泡在蛋白酶K 工作液中消化；2×SSC 溶液中漂洗5 min×2； 依次置于-20℃预冷的70%乙醇、85%乙醇和100%乙醇中各2 min 脱水； 室温浸入丙酮溶液中2 min，自然干燥玻片；加热玻片至56℃。②探针与样本杂交及洗脱暗处将变性后的探针混合物滴于玻片上组织中央，立即加盖盖玻片，避免盖玻片与组织之间产生气泡；用橡皮胶封边；将玻片置于自动杂交仪，83℃6 min，37℃中杂交16～20 h。移去盖玻片，在46℃水浴箱中依次置于50%甲酰胺/2×SSC 溶液10 min×3，2×SSC 溶液10 min，2×SSC/0.1%NP40 溶液5 min，70%乙醇5 min。③结果观察玻片自然干燥后滴加10 μL二脒基苯基吲哚（DAPI） 复染液封片20 min 后在荧光显微镜下选用特异的单通道滤波片观察癌细胞核的FISH 结果。绿色荧光为17 号染色体着丝粒，橙红色荧光为HER2 基因，细胞核由DAPI 复染成蓝色。

1.3 观察指标

①观察200例患者的乳腺癌基因分型情况，采用Nielsen标准进行判定；②评价各基因型乳腺癌组织C-kit的表达情况；③随访分析部分乳腺癌患者（100例）Gleevec靶向治疗的疗效。

1.4 判定标准

1.4.1 免疫组化法HER-2判读标准 全部瘤细胞中细胞膜均无染色或<30%瘤细胞膜染色者结果为（-）；瘤细胞>30%细胞膜不完整弱染色者结果为（+）；瘤细胞>30%细胞膜轻至中度完整染色者为（++）；瘤细胞>30%细胞膜完整强染色者为（+++）。

1.4.2 HER-2基因扩增判定标准 红色信号代表检测的靶基因，绿色信号代表靶基因所在的染色体着丝粒。检测EGFR基因计数30个细胞，统计Ratio值（30个细胞核中红色信号数/30个细胞核中绿色信号数）Ratio<1.8为阴性结果，提示该标本无HER-2基因扩增；Ratio>2.2为阳性结果，提示该标本HER-2基因扩增；Ratio在1.8～2.2之间时，可以选择增加计数或重做。

1.4.3 疗效判定依据 患者临床症状有所缓解，病理检验结果提示肿瘤无进展时，视为治疗有效。

1.5 统计方法

应用SPSS 21.0统计学软件统计学软件进行数据分析，计数资料[n（%）]，进行χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 200例患者的乳腺癌基因分型情况

200例患者的乳腺癌基因分型情况，见表1。

2.2 各基因型乳腺癌组织C-kit的表达情况

通过对研究结果的观察发现，以ER（-）、PR（-）、HER-2（-）为主要特征的三阴型乳腺癌患者共80例，C-kit的表达情况如下：①肿瘤大小：肿瘤最大直径≤2 cm者共48例，C-kit阳性表达者共29例，阳性表达率60.4%。与肿瘤直径>2 cm者相比，数据差异有统计学意义（P<0.05）。②淋巴结转移：该组样本无淋巴结转移者共64例，C-kit阳性表达者共43例，阳性表达率67.2%。与伴随淋巴结转移者相比，数据差异有统计学意义（P<0.05）。③乳腺癌分期：该组样本乳腺癌1期与2期者共50例，C-kit阳性表达者共35例，阳性表达率70.0%。与3期及4期患者相比，数据差异有统计学意义（P<0.05）。④肿瘤分化情况：该组样本中，1级乳腺癌患者共95例、C-kit阳性表达者共60例，阳性表达率63.2%。2级乳腺癌患者共83例、C-kit阳性表达者共29例，阳性表达率34.9%。3级乳腺癌患者共22例、C-kit阳性表达者共14例，阳性表达率63.6%。

2.3 部分乳腺癌患者（100例）Gleevec靶向治疗的疗效

采用Gleevec靶向治疗方法治疗后，100例患者中，共67例治疗有效，有效率67.0%。表明Gleevec对有C-kit蛋白表达的乳腺癌细胞具有调控作用，在治疗乳腺癌方面，临床疗效值得肯定。

3 讨论

C-kit、PDGF-R、EGFR、VEGFR以及BCR-ABL融合蛋白等，为参与乳腺癌肿瘤生长的主要酪氨酸激酶，其中C-kit是由C-kit原癌基因编码的受体型跨膜蛋白酪氨酸激酶生长因子受体蛋白[2]。国外研究发现[3]，该基因表达异常，与乳腺癌的发病密切相关。各学者的研究成果虽不一致，但均证实了C-kit与乳腺癌之间的关系[4-5]。该文研究发现，200例乳腺癌患者，乳腺腔内A型者占比75.5%，在各乳腺癌基因型中占比最高。基底样型患者占比14.5%，患者数量仅次于乳腺腔内A型。根据乳腺癌患者肿瘤直径、肿瘤分期及淋巴结转移情况的不同，C-kit的表达情况同样有所不同[6]。肿瘤最大直径≤2 cm的48例患者，C-kit阳性表达者共29例，阳性表达率60.4%。表明，乳腺癌患者的肿瘤直径，与之C-kit阳性表达率存在显著联系。随着肿瘤最大直径的增大，C-kit的阳性表达率呈下降趋势。无淋巴结转移者的64例患者，C-kit阳性表达者共43例，阳性表达率67.2%。C-kit阳性表达率的高低，与乳腺癌患者肿瘤细胞的转移情况有关，无淋巴结转移者，C-kit的阳性表达率更高[7-8]。乳腺癌1期与2期的50例患者，C-kit阳性表达率70.0%。表明，随乳腺癌的进展，C-kit阳性表达率会有所降低。除此之外，乳腺癌分级为1级及3级者，C-kit的阳性表达率均处于60%以上，阳性表达率更高。徐雪瑶[9]指出，肿瘤直径≤5 cm者，C-kit阳性表达率为51.82%，与该课题研究成果存在一定的差异，判断由划分依据缺乏一致性所导致。该学者同样指出，无淋巴结转移者，C-kit阳性表达阳性率64%，临床分期为1期及2期者，C-kit阳性表达率66%，与该课题研究成果一致。表明该课题所用研究方法，具有一定的有效性。为评估Gleevec靶向治疗乳腺癌的临床疗效，该课题选取100例乳腺癌患者，给予Gleevec靶向治疗现，结果显示，患者疾病治疗的有效率为67.0%。以C-kit检验结果为依据，给予Gleevec靶向治疗，可起到一定的疗效。

综上所述，乳腺癌患者C-kit的阳性表达率，与之肿瘤分期、肿瘤直径及淋巴结转移情况显著相关。临床可采用C-kit检验的方法，对患者的病情加以评估，以为疾病治疗方案的制定提供参考，使疾病治疗的有效率得以提升，使乳腺癌患者的寿命得以延长。

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[9] 徐雪瑶.三阴乳腺癌组织VEGF、KAI-1、c-kit表达及临床病理意义[D].乌鲁木齐：新疆医科大学，2011.

（收稿日期：2017-10-09）