MTHFR基因多态性与中年男性冠状动脉病变程度的相关研究

袁帅　邢晓博　李晓　尚兴福　赵雯娜　王芳　王宁　张克传　刘福颂

摘 要：目的 探討四氢叶酸还原酶C677T基因多态性与中年男性冠状动脉病变程度。方法 选择2015年1月～2016年10月经冠脉造影确诊的128例山东沿海地区汉族中年男性冠心病患者（冠脉狭窄>50%），其中急性心肌梗死36例，按照国际心脏病学会和WHO冠心病诊断标准将128例冠心病患者分为急性冠脉综合征（ACS）组67例和稳定性心绞痛（SAP）组61例，并选110例冠脉正常者作为对照组。通过循环酶法测定血浆同型半胱氨酸浓度和PCR荧光法检测MTHER C677T基因型，观察血浆同型半胱氨酸浓度和MTHFRC677T基因型分布与冠脉病变的关系。结果 冠心病组血浆同型半胱氨酸水平明显高于对照组，差异有统计学意义（P<0.01），ACS组明显高于SAP组，差异有统计学意义（P<0.01）。冠状动脉三支病变组血浆同型半胱氨酸水平明显高于单支病变组，差异有统计学意义（P<0.01），且高于双支病变组，差异有统计学意义（P<0.05）。另外，双支病变组高于单支病变组，差异有统计学意义（P<0.05）。冠心病组TT基因型、T等位基因频率明显高于对照组，差异有统计学意义（P<0.01）；CT基因型高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。ACS组TT基因型高于SAP组，差异有统计学意义（P<0.05），T等位基因频率明显高于SAP组，差异有统计学意义（P<0.01）。冠状动脉三支病变组TT基因型、T等位基因频率高于单支病变组，差异有统计学意义（P均<0.05）。结论 MTHERC677T基因多态性及血浆同型半胱氨酸浓度参与山东沿海地区汉族中年男性冠状动脉粥样硬化病变的发生发展，且与冠脉病变严重程度有关。

关键词：MTHFR；基因；同型半胱氨酸；冠心病；冠脉造影；中年男性

中图分类号：R541.4 文献标识码：A DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.03.021

文章编号：1006-1959（2018）03-0067-04

Abstract：Objective To investigate the polymorphism of tetrahydrofolate reductase gene C677T and the degree of coronary artery disease in middle-aged men.Methods From January 2015 to October 2016，128 middle-aged male CHD patients（coronary artery stenosis>50%）diagnosed by coronary angiography in Shandong coastal area were selected.Among them，36 cases were acute myocardial infarction.According to the International Society of Cardiology WHO diagnostic criteria for coronary heart disease in 128 patients with coronary heart disease were divided into acute coronary syndrome（ACS）group of 67 patients with stable angina pectoris（SAP）group of 61 cases，and selected 110 cases of normal coronary artery as a control group.The levels of homocysteine in plasma and the fluorescence intensity of PCR were detected by cyclic enzymatic method to detect the MTHF C677T genotype.The plasma concentrations of homocysteine and the distribution of MTHFRC677T genotypes were also determined.Results The plasma homocysteine level in CHD group was significantly higher than that in control group，The difference was statistically significant（P< 0.01）.The level of plasma homocysteine in ACS group was significantly higher than that in SAP group，the difference was statistically significant（P<0.01）.Plasma homocysteine level in the three coronary artery lesions group was significantly higher than that in the single vessel disease group，the difference was statistically significant（P<0.01），and higher than the double-vessel disease group，the difference was statistically significant（P<0.05）.In addition，the double-vessel lesion group was higher than the single vessel lesion group， the difference was statistically significant（P<0.05）.The frequencies of TT genotype and T allele in CHD group were significantly higher than those in control group，the difference was statistically significant（P<0.01）.The genotype of CT was higher than that of the control group，the difference was statistically significant（P<0.05）.The TT genotype in ACS group was higher than that in SAP group，the difference was statistically significant（P<0.05），T allele frequency was significantly higher than SAP group，the difference was statistically significant（P<0.01）.The TT genotype and T allele frequency in the three coronary artery lesions group were higher than those in the single vessel disease group，the difference was statistically significant（P<0.05）.Conclusion MTHERC677T gene polymorphism and plasma homocysteine concentration are involved in the development of coronary atherosclerosis in middle-aged Han men in Shandong coastal areas，and are related to the severity of coronary artery disease.

Key words：MTHFR；Gene；Homocysteine；Coronary heart disease；Coronary angiography；Middle-aged male

冠心病（coronary heart disease，CHD）日趋成为危害人类健康的主要疾病，尤其男性患者[1]发病年龄出现低龄化，致残致死率明显升高。研究发现：血浆同型半胱氨酸（homocysteine，HCY）[2]水平及参与其代谢的关键酶亚甲基四氢叶酸还原酶（methylenetetrahydrofolate reductase，MTHFR）C677T基因多态性[3]与冠心病的发病率及严重程度密切相关。本研究旨在通过测定山东沿海地区汉族中年男性患者四氢叶酸还原酶C677T基因多态性和血浆同型半胱氨酸水平，探讨其与这类人群冠状动脉病变程度的关系，为进一步全面认识冠心病的病因、发病机理、治疗和预防提供重要依据。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择2015年1月～2016年10月行冠脉造影检查的中年男性患者（<60岁）238例。其中冠脉造影完全正常者110例，年龄45～59岁，平均年龄（53.34±5.26）岁，冠心病患者（冠脉狭窄>50%）128例，年龄42～57岁，平均年龄（52.63±4.91）岁。按照国际心脏病学会和WHO冠心病诊断标准将冠心病组分为急性冠脉综合征（ACS）组67例和稳定性心绞痛（SAP）组61例，其中急性冠脉综合征包括不稳定性心绞痛（UAP）患者31例与急性心肌梗死（AMI）患者36例；根据冠状动脉病变血管数量分为以下三组：冠心病冠脉单支病变60例，双支病变43例，三支病变25例。各组患者冠心病危险因素发生率等均无显著性差异，并排除合并严重肝、肾功能不全、重度心力衰竭、心肌炎、瓣膜病、严重感染、自身免疫性疾病或结缔组织疾病、急性脑梗死、肿瘤性疾病及既往曾接受过PCI或CABG治疗者。

1.2方法

1.2.1一般指标的测定 入院患者空腹8 h，晨起后在安静状态下采取4 ml静脉血，采用德国罗氏公司生产的COBOS 8000生化分析仪，试剂盒由宁波医杰生物科技有限公司提供，采用循环酶法，具体操作步骤严格按照产品说明书进行。正常参考值4.0～15.4 μmol/L。同时测定血清TC、LDL-C、FPG。

1.2.2冠状动脉造影方法 采用Jndkins法，常规进行多体位投照，对冠状动脉狭窄程度进行评价。确定冠状动脉病变程度、支数。冠状动脉直径狭窄50%～70%判定为轻度狭窄，71%～89%为中度狭窄，≥90%为重度狭窄。按狭窄病变累及血管支数分为单支病变、双支病变和三支病变。

1.2.3 MTHERC677T基因多态性 采集患者外周静脉血5 ml，置于含有EDTA的抗凝管中。采用荧光PCR试剂盒（送由北京百世诺基因检测有限公司检测），分别针对MTHFRC677T基因位点设计独立的特异性引物和探针，每一个反应体系通过两种不同荧光通道检测一个位点的基因多态性。不同基因型模板在PCR反应中释放不同的荧光信号，利用仪器对信号强度进行监测和输出，实现结果的定性分析，根据所检测到的荧光信号可以判断模板DNA的基因型。CC为野生型，CT为杂合突变型，TT为纯合突变型。

1.3统计学处理 所有数据均采用SPSS 19.0软件进行统计学处理。计量资料以（x±s）表示，组间差异比较采用t检验；计数资料以率或构成比表示，组间差异比较采用χ2检验。P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1冠心病不同分型血浆同型半胱氨酸水平比较 冠心病组血浆同型半胱氨酸水平明显高于对照组，差异有统计学意义（P<0.01），ACS组血浆同型半胱氨酸水平明显高于SAP组，差异有统计学意义（P<0.01），见表1。

2.2冠心病不同病变支数血浆同型半胱氨酸比较 冠状动脉三支病变组、双支病变组及单支病变组血浆同型半胱氨酸水平明显高于对照组，差异有统计学意义（P<0.01）；三支病变组明显高于单支病变组，差异有统计学意义（P<0.01），高于双支病变组，差异有统计学意义（P<0.05）；双支病变组高于单支病变组，差异有统计学意义（P<0.05），见表2。

2.3冠心病不同分型MTHFRC677T基因型及等位基因频率比较 冠心病组TT基因型、T等位基因频率明显高于对照组，差异有统计学意义（P均<0.01）；两组CT基因型差异无统计学意义（P>0.05）。ACS组TT基因型高于SAP组，差异有统计学意义（P<0.05）；T等位基因频率明显高于SAP组，差异有统计学意义（P<0.01）；两组CT基因型差异无统计学意义（P>0.05），见表3。

2.4冠心病不同病变支数MTHFRC677T基因型及等位基因频率比较 冠状动脉三支病变组TT基因型、T等位基因频率高于单支病变组，差异有统计学意义（P均<0.05）；与双支病变组TT基因型、T等位基因频率差异无统计学意义（P均>0.05）；双支病变组TT基因型、T等位基因频率与单支病变组差异无统计学意义（P均>0.05），见表4。

3 讨论

冠心病在世界范围内已成为危害人类健康的主要疾病，发病年龄日趋低龄化，急性心血管事件甚至猝死低龄化发生率日益增高。除了传统的吸烟、高血压、糖尿病、高血脂等危险因素外，已有大量的临床研究发现：血浆同型半胱氨酸水平以及影响其代谢的关键酶MTHFR基因多态性是冠心病新的危险因素[4]，降低血同型半胱氨酸浓度有可能有效预防冠心病的发生、发展，其代谢酶基因多态性的研究可以从分子生物学角度进一步了解中年男性冠心病的发病原因。

同型半胱氨酸是一种含硫氨基酸[5]，在体内有三种代谢途径，正常情况下其生成和代谢保持平衡，但在遗传性代谢障碍和后天营养摄入不足的影响下会使其在体内聚集形成高Hcy血症，高Hcy通过抑制NO的合成并促进其降解、促进炎症和免疫反应等，加重动脉硬化的发生、发展[6-8]。近年来国内外学者的研究发现：血浆高同型半胱氨酸水平与年轻男性患者的动脉粥样硬化、急性心肌梗死的发生及冠状动脉病变的严重程度有关[9-11]。本研究选取营养状态相似的中年男性入组发现：冠心病组血浆同型半胱氨酸水平明显高于对照组，冠心病组中ACS组血浆同型半胱氨酸水平明显高于SAP组。经冠状动脉造影检查后按病变累及的冠脉支数进一步比较，发现冠状动脉三支病变组血浆同型半胱氨酸水平高于單支病变组和双支病变组，双支病变组高于单支病变组。与上述文献报道基本一致，说明血浆同型半胱氨酸水平可能与早发冠心病及其严重程度有关，但因样本量小，需大样本试验进一步验证。

随着分子生物学的发展，人们开始从基因和蛋白质水平探讨冠心病的发病机制， MTHER是影响Hcy代谢的关键酶，其基因多态性近年来成为研究的热点。MTHER催化N5，N10-亚甲基四氢叶酸还原成N5-甲基四氢叶酸，后者提供甲基给Hcy再甲基化生成蛋氨酸，以维持Hcy的正常血浆水平。若MTHER基因677位点的碱基C被碱基T置换，其编码的丙氨酸被缬氨酸取代，会使酶活性下降，导致血浆Hcy水平升高。已有学者研究发现：MTHFRC677T基因多态性是早发冠心病的危险因素，可作为独立预测因子[12-13]。本研究选取山东沿海地区<60岁的汉族中年男性为研究对象发现：冠心病组TT基因型、CT基因型、T等位基因频率均高于对照组，冠心病组中ACS组TT基因型、T等位基因频率高于SAP组。冠状动脉三支病变组TT基因型、T等位基因频率高于单支病变组，三支病变与双支病變组、双支病变组与单支病变组TT基因型、T等位基因频率差异无统计学意义。可以看出基因分型对冠心病临床分型的预测较敏感，与冠脉受累支数的相关性不明显，但目前涉及这方面的研究较少且存在争议，还需大规模的临床试验进一步证实。

综上所述，MTHFR基因多态性及高Hcy与冠状动脉粥样硬化的发生、发展密切相关，尤其可能是中年男性冠心病患者的独立危险因素，对其早期进行基因检测，利于临床医生更好地临床危险分层、选择合理的治疗方案和进行有效的预后评估，有望降低急性心血管事件的发生，降低死亡率。

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收稿日期：2017-10-9；修回日期：2017-11-14

编辑/成森