猪链球菌分子生物学检测研究进展

猪链球菌病是由猪链球菌引起的一种人畜共患的传染病，会导致猪关节炎、心内膜炎以及肺炎等的发生，同时还可以穿过胎盘屏障导致母猪流产，是我国养猪业面临的重大传染病之一。对猪链球菌病进行快速诊断对于该病的控制意义重大。目前对该病的检测方法主要是通过建立在常规的分离培养以及生化鉴定的微生物学鉴定方法，不仅费时费力，而且检测灵敏度不高。近年来，随着分子生物学技术的不断发展，为猪链球菌的检测提供了新的途径。因此，本文就目前国内外猪链球菌分子生物学方面的检测方法进行具体的论述，以期为同行提供帮助。

一、聚合酶链式反应（PCR）技术

PCR敏感性强，特异性高，还具有高度的重复性，可以快速准确的对病原菌做出诊断，是近年来猪链球菌检测的常用技术。

1.群特异性PCR。谷氨酸脱氢酶基因以及溶血素基因具有良好的群特异性，同时在猪链球菌不同分离菌株之间具有一定的保守性。Okwumabua等根据猪链球菌2型菌株的溶血素基因序列设计了一种引物从而建立了PCR，但是由于受到检测范围的限制，该法对一些血清型以及致病型菌株无法检测出来。因此，Okwumabua等依据猪链球菌2型菌株的谷氨酸脱氢酶基因序列设计了引物并建立了猪链球菌定群PCR，该法能特异性的检出猪链球菌所有血清型菌株。此外，Smith等依据荚膜多糖是猪链球菌血清型鉴定的直接依据这一特点对猪链球菌的主要菌株荚膜基因的DNA序列设计了引物，建立了血清型特异性PCR的检测方法。

2.多重PCR。多重PCR技术能够同时扩增不同的基因片段，因而与普通PCR技术相比具有明显的优势。2009年，聂小想等建立了多重PCR检测体系，实现了对蛋白溶菌酶释放蛋白、溶血素基因以及胞外因子等猪链球菌独立相关因子基因的同步检测。通过对背景明确的试验菌株进行检测分析，具有一定的检测效果。

3.实时荧光定量PCR。实时荧光定量PCR不仅能够快速准确地检测出病原体，还能够判断出疾病的亚临床状态，从而判断出是现感染还是既往感染。孙洋等以荚膜多糖基因为靶基因，建立了2型猪链球菌的荧光实时定量PCR检测方法，这种方法不仅能够准确测定出感染的强度，还避免了假阳性的检测结果，对猪链球菌的检测方法起到了完善作用。

二、环介岛等温扩增技术

环介岛等温扩增技术是一种新型核酸扩增技术，其使用简单、快捷，同时敏感性高，特异性强，而且不需要昂贵的设备。朱水荣等根据2型猪链球菌中国分离猪89K毒力岛中基因序列设计了4条引物，通过环介岛等温扩增技术对2型猪链球菌以及一些其它菌株进行了检测，结果表明这种方法仅对含有89k毒力岛的中国2型猪链球菌检测结果为阳性，说明这种方法具有非常好的特异性。

三、基因芯片技术

基因芯片是通过将核算探针固定在支持物上，荧光标记的靶分子与探针结合后，通过检测荧光信号即可获得样本的基因信息。近年来，基因芯片技术被广泛应用于治病微生物检测中。郑峰等根据基因库中猪链球菌的相关序列，针对不同菌株设计了不同的特异性探针并达到了预期的检测效果。这对于猪链球菌的鉴定具有重要价值。

四、核糖体分型技术

核糖体分型技术是以细菌核糖体中的16S以及23SrRNA基因为杂交探针，利用16SrRNA的群间特异性以及保守性实现细菌的诊断。Staats等利用核糖体分型技术，对猪链球菌毒力进行了研究，结果表明该方法能够起到致病菌株与非致病菌株的区分作用。

五、结语

猪链球菌病作为一种人畜共患的疾病，严重制约着我国养猪产业的发展。在实际的生产实践中，可以将上述方法结合起来用于诊断猪链球菌病，从而对暴发性猪链球菌病起到及时的防控作用。

参考文献（略）