丹参酮ⅡA抑制血管平滑肌细胞增殖的作用机制探讨

韩芬

VSMC在临床上被认为是产生多种动脉疾病的细胞水平根源, 若VSMC加速生长, 则会在很大程上导致高血压、冠心病及糖尿病等血管疾病的发生, 临床研究认为对VSMC增殖进行抑制可对心血管疾病的预防和控制起到良好的作用［1］。丹参酮ⅡA具有溶脂性, 可对人体的血管细胞皮进行有效保护, 同时也可对血小板聚集进行抑制, 从而对心肌缺血区的冠状动脉血流量情况进行有效的改善, 对VSMC增殖的抑制效果良好［2］。本文主要是通过实验的方式对丹参酮ⅡA抑制VSMC增殖作用进行探讨。

1 材料与方法

1.1 实验动物 选取体重在125 g左右、身体健康的雄性SD大鼠120只, 分为对照组、A组和B组, 各40只。

1.2 材料与试剂

1.2.1 材料 丹参酮ⅡA(上海第一生化药业有限公司), 低糖DMEM培养液(上海慧颖生物科技有限公司), 胎牛血清(上海酶联生物科技有限公司)。

1.2.2 试剂 V-FITC、Binding Buffer细胞凋亡检测试剂盒(上海研卉生物科技有限公司), RT-PCR试剂盒(北京天根生化科技有限公司)。

1.3 实验方法 将全部大鼠脱臼处死, 将其腹主动脉取下后祛除内膜与外周结缔组织, 所有操作过程均为无菌操作。使用具有预冷效果的PBS将大鼠的中膜组织进行冲洗, 剪成小块后放置于培养瓶中, 将细胞放置于含有浓度为10%的FBS的DMEM低糖培养液当中, 并在浓度为5%的CO2、温度约为37℃的培养箱中进行培养。1周后发现细胞在其组织边处爬出, 之后平均隔1 d进行1次培养液的更换, 当细胞处于80%左右的融合状态后, 进行传代, 并取VSMC的4～6代完成纯化后进行分组干预：对照组在VSMC中加入浓度为30%的50 μl FBS培养液；A组使用浓度为30%的25 μl FBS培养液、剂量为10 ml/L的25 μl丹参酮ⅡA；B组使用浓度为30%的25 μl FBS培养液、剂量为20 ml/L的25 μl丹参酮ⅡA。使用四唑盐(MTT)法对细胞毒性进行检测、流式细胞仪进行细胞凋亡检测。

1.4 观察指标 比较三组平滑肌细胞抑制情况及细胞凋亡情况、p21 mRNA相对表达量。

1.5 统计学方法 采用SPSS21.0统计学软件对研究数据进行分析处理。计量资料以均数±标准差(±s)表示, 采用t检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 三组平滑肌细胞抑制情况比较 平滑肌细胞抑制情况：A、B组的吸光度值(0.639±0.018)、(0.298±0.015)均低于对照组(1.432±0.121), 差异均具有统计学意义(P＜0.05)；A组吸光度值高于B组, 差异具有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1 三组平滑肌细胞抑制情况比较( ±s)

表1 三组平滑肌细胞抑制情况比较( ±s)

注：与对照组比较, aP＜0.05；与A组比较, bP＜0.05

组别 只数 吸光度值对照组 40 1.432±0.121 A组 40 0.639±0.018a B组 40 0.298±0.015ab

2.2 三组细胞凋亡情况、p21 mRNA相对表达量比较 对照组的细胞凋亡率、p21 mRNA相对表达量均低于A、B组, B组的细胞凋亡率、p21 mRNA相对表达量均高于A组, 差异均具有统计学意义(P＜0.05)。

3 讨论

临床上对冠心病和高血压等心脑血管疾病常会使用中药方法进行治疗, 丹参属于一种中药药材, 其性微寒、味苦,可作用于患者的心、肝等部位, 具有良好的活血通络、清心除烦及止痛祛瘀的功效［3］。临床上通过实验显示丹参具有较强的药理作用, 可有效增强患者的心肌收缩能力、对冠状动脉血管进行扩张、使血流量增加并能够对其心脏功能进行改善等。丹参是丹参酮ⅡA的最主要成分, 能够对平滑肌细胞增殖情况进行有效抑制, 具有积极的抗缺血缺氧、微循环的作用。在正常的生理状况下, VSMC可对血管扩张情况进行有效调节, 具有对血管功能的维持、对调节因子释放的分泌作用［4,5］。但当机体内的血管内皮功能发生损伤后, 多种的细胞因子会得到释放, 并会作用于VSMC膜受体当中, 从而将细胞内的信号传导通路进行全面激活, 最终形成对VSMC的增殖促进作用［6］。

在临床上, 许多心血管疾病的病理基础均为VSMC出现异常增殖情况而导致的［7］, 所以临床上对VSMC增殖的抑制研究十分重视。本文主要是以SD大鼠作为研究对象, 通过对大鼠腹主动脉的培养来进一步获取VSMC, 在此基础上使用丹参酮ⅡA进行药物干预, 并使用MTT检测法对大鼠的细胞毒性进行检测。通过检测结果显示, 直接加入FBS培养液的对照组的吸光度值明显要高于使用剂量不同的丹参酮ⅡA+FBS培养液的A、B组(P＜0.05), 而A、B组进行组间比较显示, A组的吸光度值明显高于B组(P＜0.05)；对照组的细胞凋亡率与p21 mRNA表达量明显低于A、B组(P＜0.05),B组的细胞凋亡率与p21 mRNA表达量明显高于A组(P＜0.05)。由此可见使用丹参酮ⅡA可有效对VSMC的增殖进行抑制。p21基因表达产物为p21蛋白, 是一种细胞周期性的调控蛋白, 若受到相关条件的诱导便会发生促进细胞凋亡的情况［8-10］, 本研究中对照组的细胞凋亡、p21 mRNA表达量均低于A、B组, 可见丹参酮ⅡA可通过对p21 mRNA相对表达量的抑制, 进而对VSMC增殖进行有效抑制。

综上所述, 丹参酮ⅡA对VSMC增殖的抑制作用显著,且该药物的机制在很大程度上同细胞周期蛋白p21的表达强度有关。

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