超声提取玫瑰花渣中的总黄酮

谢 琼，胡 爽

玫瑰是蔷薇科蔷薇属多年生常绿或落叶性灌木。玫瑰花含有多种微量元素、膳食纤维、VC和人体必需氨基酸等营养成分。玫瑰花渣是提取玫瑰精油的过程中的废弃物。冯作山等人[1]通过DPPH法对玫瑰花和玫瑰花渣抗氧化效果进行了研究，结果表明玫瑰花的DPPH自由基清除率和玫瑰花渣相差不大，抗氧化效果相当，是一种抗氧化成分含量丰富的天然原料。张佳婵等人[2]研究发现玫瑰花渣黄酮冻干粉对羟自由基、ABTS自由基和DPPH自由基均具有清除能力。超声波具有的物理特性能促使植物细胞组织破壁或变形，使有效成分提取更加充分。试验以提取精油后的玫瑰花渣作为原料，用超声法提取玫瑰花渣中的总黄酮，优化了最佳提取工艺条件，为玫瑰花渣的再利用提供参考依据，使玫瑰花渣变废为宝。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

玫瑰花渣，市售；玫瑰花提取精油后经烘干、粉碎，过20目筛备用。

1.2 试剂

芦丁标准品，中国药品生物制品检定所提供；亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、无水乙醇、均为分析纯。

JA5003N型电子天平、KQ2200DV型数控超声波清洗器、台式超声波清洗器、7230G型紫外可见分光光度计、DHG-9202-0SA型电热恒温干燥箱等。

1.3 芦丁标准曲线的绘制

准确称取芦丁对照品20.0 mg，用50%的乙醇溶解，定容于100 mL容量瓶，摇匀，制备成0.2 mg/mL芦丁对照品溶液。准确量取 0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL于25 mL的容量瓶中，用50%的乙醇稀释至12.5 mL，加入5%亚硝酸钠溶液0.7 mL，摇匀，静置5 min后加入10%硝酸铝溶液0.7 mL，摇匀，静置5 min后加入1.015 mol/L的氢氧化钠溶液10 mL，用50%乙醇定容至刻度，摇匀，静置10 min后于波长510 nm处测定吸光度，用试剂空白作为参照溶液。用吸光度为纵坐标，质量浓度为横坐标，绘制标准曲线，得标准回归方程为Y=7.964 9X+0.019 97，相关系数R2=0.999 5。

1.4 玫瑰花渣总黄酮的测定

准确称取玫瑰花渣粉末2.0 g，用不同料液比、乙醇体积分数、超声次数、超声时间，提取后过滤，浓缩至干，用60%的乙醇溶解，得到玫瑰花渣总黄酮提取液。吸取1 mL提取液于25 mL比色管中，测定吸光度，按照芦丁标准曲线的回归方程换算成总黄酮质量浓度[3]。

2 玫瑰花渣总黄酮含量的影响因素

2.1 单因素试验

2.1.1 乙醇体积分数对玫瑰花渣总黄酮含量的影响

准确称取5份2.0 g玫瑰花渣粉末，分别溶于体积分数为40%，50%，60%，70%，80%的乙醇中，超声提取30 min，过滤浓缩至干，按1.4中的方法测定玫瑰花渣中的总黄酮含量。

乙醇体积分数对玫瑰花渣总黄酮含量的影响见图1。

图1 乙醇体积分数对玫瑰花渣总黄酮含量的影响

由图1可以看出，乙醇体积分数为40%～60%时，总黄酮含量逐渐增加；乙醇体积分数为60%～80%时，总黄酮含量逐渐降低。因此，选用60%乙醇为最佳体积分数。

2.1.2 料液比对玫瑰花渣总黄酮含量的影响

准确称取2.0 g玫瑰花渣粉末5份，分别溶于20，30，40，50，60 mL的 60%乙醇溶液中，超声提取30 min，过滤，浓缩至干，按1.4中的方法测定玫瑰花渣中的总黄酮含量。

料液比对玫瑰花渣总黄酮含量的影响见图2。

图2 料液比对玫瑰花渣总黄酮含量的影响

由图2可以看出，当料液比为1∶10～1∶20时，总黄酮含量逐渐上升，继续增加乙醇用量，总黄酮含量逐渐降低。因此，选用浸提的最佳料液比为 1∶20。

2.1.3 超声时间对玫瑰花渣总黄酮含量的影响

准确称取2.0 g玫瑰花渣粉末5份，分别加入体积分数70%乙醇40 mL，设定每次超声提取时间分别为10，20，30，40，50 min，过滤后浓缩至干，按1.4中的方法测定玫瑰花渣中的总黄酮含量。超声时间对玫瑰花渣总黄酮含量的影响见图3。

图3 超声时间对玫瑰花渣总黄酮含量的影响

由图3可以看出，超声时间为10～30 min时，总黄酮含量逐渐上升，当超声时间继续增加时，玫瑰花渣总黄酮含量缓慢减少。因此，选用30 min为最佳超声时间。

2.1.4 超声次数对玫瑰花渣总黄酮含量的影响

准确称取2.0 g玫瑰花渣粉末5份，分别加入体积分数60%乙醇40 mL，超声提取1，2，3，4，5次，时间分别为30 min，过滤后浓缩至干，按1.4中的方法测定玫瑰花渣中的总黄酮含量。

超声次数对玫瑰花渣总黄酮含量的影响见图4。

图4 超声次数对玫瑰花渣总黄酮含量的影响

由图4可以看出，随着提取次数从1次增加到3次，总黄酮含量逐渐上升，之后又缓慢下降。因此，试验选用最佳超声次数为3次。

2.2 正交试验

根据影响玫瑰花渣总黄酮含量的单因素试验结果，选择乙醇体积分数、料液比、超声时间、超声次数4个因素，每个因素3个水平进行正交试验。

L9（34）正交试验因素与水平设计见表1，L9（34）正交试验结果见表2。

表1 L9（34）正交试验因素与水平设计

由表2的结果分析可以看出，超声波提取玫瑰花渣总黄酮最佳的是A2B1C1D3，即乙醇体积分数60%，料液比1∶15，超声时间20 min，超声次数4次。各

表2 L9（34）正交试验结果

因素对玫瑰花渣总黄酮含量的影响由大到小依次为A＞C＞B＞D，即乙醇体积分数＞超声时间＞料液比＞超声次数。

3 结论

（1）通过用超声提取法正交试验，玫瑰花渣中的总黄酮提取的最佳工艺条件是乙醇体积分数60%，料液比1∶15，超声时间20 min，超声次数4次。

（2）与常规的有机溶剂提取法相比，超声法具有提取时间短、提取率高、溶剂需要量少等优点。提取过精油的玫瑰花渣中总黄酮含量丰富，用超声提取可以提高提取效率和玫瑰花渣的开发利用价值。

[1]冯作山，谢琼，余永婷，等.玫瑰花渣中抗氧化成分提取工艺研究 [J].食品工业科技，2007（8）：143-145.

[2]张佳蝉，谢娅霏，虞旦，等.玫瑰花渣中黄酮类物质的提取及其抗氧化活性研究 [J].食品工业科技，2014（6）：2-9.

[3]张冬冬，徐迪，洪伟，等.超声提取柑橘皮中总黄酮的研究 [J].农产品加工，2017（5）：1-3.◇