宫颈癌组织miR-127的表达变化及其意义

吴新华，张庆，张珂，顾晓荔

(郑州大学第二附属医院，郑州 450052)

目前Ⅰ～Ⅱa期宫颈癌患者的首选治疗方案是子宫根除手术合并盆腔淋巴结清扫术，但患者预后并不乐观；Ⅱb期以上宫颈癌手术机会小，预后更差[1,2]。微小RNA可以产生类似抑癌基因或者癌基因的作用，是近年来肿瘤相关研究的热点[3]。研究发现，微小RNA 127(miR-127)在多种肿瘤中发挥抑癌基因样作用，能抑制多种癌细胞的生长、迁移及侵袭[4～6]。有关miR-127在宫颈癌组织中的表达变化及其与宫颈癌临床病理参数和宫颈癌患者预后关系的研究甚少。本研究探讨miR-127在宫颈癌发生发展中的作用。

1 资料与方法

1.1 临床资料 2011年9月～2012年3月于我院行手术治疗的宫颈癌患者93例。纳入标准：初诊宫颈癌患者；手术前均未接受放疗、化疗等其他治疗；标本于肉眼可见肿瘤病灶处收集；术后经病理检查确诊为宫颈癌。排除标准：年龄>80岁；术前已接受其他治疗或已发生远处转移；合并其他肿瘤；无法通过病理检查确诊；术后5年内失访。患者年龄24～64(55.32±13.43)岁，其中≤50岁者67例，>50岁者26例；FIGO分期Ⅰ期71例，Ⅱa期22例；肿瘤直径≤4 cm者69例，>4 cm者24例；肿瘤类型为溃疡型21例，内生结节型37例，菜花型35例；鳞癌72例，腺癌19例，其他病理分型2例；组织分化程度为低分化47例，中分化42例，高分化4例；肌层浸润深度≤1/2肌层51例，>1/2肌层5例，全肌层37例；有淋巴转移28例，无淋巴转移65例。电话随访1～60个月。另选31例因子宫肌瘤行子宫切除术的患者，年龄25～66(54.85±14.32)岁。两组年龄具有可比性。本研究经医院伦理委员会审核批准，患者或其家属均签署知情同意书。

1.2 宫颈组织miR-127表达检测 术中收集手术切除标本，储存于液氮罐中。采用实时荧光定量PCR法检测miR-127表达。具体方法：称取液氮罐中保存的宫颈癌组织或子宫肌瘤组织100 mg，磨成粉末，加入TRIzol试剂提取总RNA，超微量分光光度计检测纯度，并计算RNA浓度，OD260/OD280在1.8～2.0者用于后续实验。按Mir-XTMmiRNA First-Strand Synthesis Kit试剂盒说明书操作，将1 μg RNA逆转录为cDNA，用cDNA行实时荧光定量PCR。引物序列：miR-127正向引物5′-TCCGTCTGAGCTTGGCTAAA-3′，反向引物5′-UCGGAUCCGUCUGAGCUUGGCU-3′；内参U6正向引物5′-CTCGC-TTCGGCAGCACA-3′，反向引物：5′-AACGCTTCACG-AATTTGCGT-3′。以2-ΔΔCt法计算miR-127相对表达量。重复3次，取结果平均值。miR-127相对表达量≥均数为高表达，否则为低表达。

1.3 宫颈癌组织miR-127表达与患者临床病理参数及预后关系的分析 采用方差分析或t检验分析miR-127表达与患者年龄、肿瘤FIGO分期、直径、类型、病理分型、组织学分级、肌层浸润深度及淋巴结转移的关系。Kaplan-Meier法绘制宫颈癌患者癌组织miR-127高表达和低表达者的生存曲线，计算5年生存率和生存时间。

2 结果

2.1 癌组织及正常宫颈组织miR-127相对表达量比较 癌组织及正常宫颈组织miR-127相对表达量分别为0.93±0.67、9.63±0.53，P<0.05。

2.2 宫颈癌组织miR-127表达与患者临床病理参数的关系 宫颈癌组织miR-127表达与患者年龄、FIGO分期、肿瘤直径、肿瘤类型、病理分型、组织学分级、肌层浸润深度无关(P均>0.05)，与淋巴结转移有关(P<0.05)。见表1。

2.3 宫颈癌组织miR-127表达与患者预后的关系 宫颈癌患者miR-127高表达53例，低表达40例。miR-127高表达与低表达者5年生存率分别为92.45%(49/53)、62.50%(25/40)，生存时间分别为(57.79±1.20)、(49.20±2.62)个月，P均<0.05。

表1 宫颈癌组织miR-127表达与患者临床病理参数的关系

3 讨论

宫颈癌的发生、进展是多基因、多细胞因子共同调控的复杂生物学进程，HPV感染、染色体突变等是其危险因素[7]。微小RNA为一类可能同时具有致癌与抑癌功能的小分子非编码RNA分子，在宫颈癌的发生和进展过程中存在异常表达[8]。Zhai等[9]在C2C12细胞中外源性增加miR-127表达后，发现miR-127过表达促进了肌原细胞的分化，在生物体内对于肌肉的再生有显著的促进作用，过表达的miR-127能够改善小鼠模型的肌营养不良症状。miR-127更多的研究是集中在肿瘤临床治疗中的应用方面。Lu等[10]研究证实，miR-127-3p与HE4表达水平可能成为早期乳腺癌的鉴别诊断标志物。Catto等[11]分析9种微小RNA与膀胱癌组织中相关靶基因作用的关系时发现，微小RNA同时具有促癌与抑癌两种作用方式，其中以miR-127为代表的5种微小RNA的作用路径尚未收录于京都基因与基因组百科全书中。Tryndyak等[12]发现，在肺癌组织中存在包括miR-127在内多种微小RNA的异常表达，且其异常表达与细胞增殖、上皮-间质细胞转化(EMT)密切相关。Pan等[13]检测肝切除术后大鼠体内miR-127的表达水平并分析其与肝再生的关系，发现miR-127能抑制肝细胞的增殖能力。Zhang等[14]发现miRNA-127-3p通过调控SETD8酶阻止骨肉瘤细胞的增殖与转移。在此基础上，Tu等[15]确定5种人骨肉瘤细胞系与一种成骨细胞系中MEG3、miR-127与ZEB1的表达及细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的关系。他们发现，MEG3在体内的作用类似于miRNA海绵，可与miR-127结合并抑制其表达，从而促进细胞增殖与迁移，其认为miR-127低表达将促进骨肉瘤细胞与成骨细胞的增殖与迁移。

本研究结果显示，miR-127在宫颈癌组织中的表达水平显著低于正常宫颈组织，且其表达与发生淋巴结转移有关。与前述研究中miR-127能抑制肺癌细胞的增殖、EMT，抑制肝细胞增殖能力，抑制miR-127的表达能促进骨肉瘤与成骨细胞增殖、迁移等作用的报道相符；提示miR-127低表达可能促进宫颈癌细胞的增殖与迁移；检测宫颈癌组织miR-127有助于宫颈癌治疗方案的选择。本研究结果显示，宫颈癌组织miR-127高表达5年生存率高于低表达者、生存时间长于低表达者。提示宫颈癌组织miR-127低表达者预后较差。

综上所述，miR-127在宫颈癌发生、发展过程中发挥了抑癌基因样作用。检测宫颈癌组织miR-127表达有助于判断宫颈癌患者预后。

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