附子丁香散加味穴位贴敷对阳虚型慢传输型便秘大鼠血清血管活性肠肽、P物质水平的影响

白克运，韩玮玮，王本军，解广东，王志荣

(1山东中医药大学附属医院，济南 250014；2山东中医药大学)

慢传输型便秘(STC)是一类以结肠传输时间延长、进食后结肠高振幅推进收缩减少为特征的功能性便秘。近年来研究表明，慢传输型便秘发病率呈上升趋势，占慢性功能性便秘的45.5%[1，2]，其病因复杂，症状顽固。阳虚型便秘为STC的最常见证型之一。前期研究中我们应用源于吴师机《理瀹骈文》的附子丁香散加味穴位贴敷治疗阳虚型STC，取得确切疗效，但其作用机制不明。本研究用洛哌丁胺及氢化可的松制作出阳虚型STC大鼠模型[3，4]，观察了附子丁香散加味穴位贴敷对阳虚型STC大鼠血清血管活性肠肽(VIP)、P物质(SP)水平的影响。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物、主要试剂和仪器 动物SPF级健康Wistar大鼠60只，体质量(200±20)g，购于济南朋悦实验动物繁育有限公司，合格证号SCXK鲁20140007。洛哌丁胺胶囊(西安杨森制药有限公司，批号H10910085) ，枸橼酸莫沙必利胶囊(上海信谊药厂有限公司，国药准字 H20051719)，氢化可的松注射液(上海现代哈森药业有限公司，国药准字H41021930)，VIP、SP酶联免疫检测试剂盒(上海博蕴生物科技有限公司)；Thermo Multiskan MK3 型酶标仪(美国Thermo 公司)，自制大鼠透明塑料固定盒(20 cm×5 cm×7 cm)。

1.2 大鼠分组、阳虚型STC模型制备及附子丁香散加味穴位贴敷方法 将60只大鼠随机分为对照组、模型组、莫沙必利组、穴位敷贴组，各15只。模型组、莫沙必利组、穴位敷贴组大鼠连续21 d按3.0 mg/kg体质量给予咯哌丁胺悬液(咯哌丁胺溶于蒸馏水)灌胃,同时每日给予氢化可的松注射液25 mg/(kg·d)后肢肌肉注射，饲以普通词料；对照组给予同等体积的蒸馏水灌胃。造模结束后禁食不禁水24 h，釆用活性炭灌胃，记录每只大鼠灌胃的时间，再观察并记录大鼠排出第一粒黑便的时间，两者之差记为大鼠的胃肠道通过时间。其中以正常组大鼠排出首粒黑便时间的均数记为判断造模是否成功的标准，即如果大鼠排出黑便的时间大于正常组的均值则视为造模成功，如果大鼠排出黑便的时间小于正常组的均值则视为造模不成功。模型组、莫沙必利组、穴位敷贴组大鼠均造模成功。然后模型组大鼠给予清水灌胃，1次/d，连续21 d。(莫沙必利组给予莫沙必利 1.5 mg/kg体质量灌胃，1次/d，连续21 d。穴位贴敷组大鼠剃除腹部毛发，穴位选择参照林文注主编《实验针灸学》定位神阙穴(大鼠剑突与耻骨联合连线下1/3处)、双侧天枢(神阙穴旁开0.5 cm)。药物：附子、苦丁香，肉豆蔻、干姜、炮川乌、白芷、牙皂、花椒，冰片，研末成粉末，用酒精调合成直径2 cm厚为0.3 cm的饼状膏药，用医用PU防水贴膜将药饼贴敷于神阙穴及天枢穴上，1次/d，每次6 h，贴敷6 d后休息1 d为一个周期，共用药3个周期。

1.3 血清VIP、SP检测方法 末次灌胃后，从各组存活大鼠中随机选取12只，用5%水合氯醛(0.8 mL/100 g)腹腔注射麻醉，抽取腹主动脉血5 mL，静置30 min，3 000 r/min离心15 min，取上清液，-80 ℃冰箱冷冻备用。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清VIP、SP，按照试剂盒说明书操作。

2 结果

各组大鼠血清VIP、SP水平见表1。由表1可见，与对照组相比，模型组大鼠血清VIP水平升高(P<0.05)，SP水平降低(P<0.05)。与模型组相比，莫沙必利组、穴位贴敷组大鼠血清VIP水平降低(P均<0.05)，SP水平升高(P均<0.05)。贴敷组与莫沙必利组血清VIP、SP水平相比，P均>0.05。

表1 附子丁香散加味穴位贴敷对各组大鼠血清SP、VIP含量的影响

注：与对照组相比，*P<0.05；与模型组相比，#P<0.05。

3 讨论

慢传输型便秘(STC)是一类以结肠传输时间延长、进食后结肠高振幅推进收缩减少为特征的功能性便秘，主要症状为排便渐进性困难、粪便干硬、排便费力，伴腹胀不适，顽固性便秘导致患者精神紧张，焦虑抑郁，睡眠障碍，生活质量严重下降[5～7]，且容易诱发多种疾病(心肌梗死、脑卒中、大肠癌等)[8]。西药治疗本病多采用各种类型泻剂及促胃肠动力药物，大多数患者在长期服用泻剂后易产生药物依赖性，形成更加顽固的便秘，甚至导致大肠黑变。外科手术治疗创伤大、并发症多，部分患者术后出现严重腹泻，明显影响生活质量。中医药治疗本病以汤药和针灸为主要治疗方法,而患者常有不受针刺之痛者,有不耐汤药之味者,有不肯服药之人,有不能服药之症。穴位贴敷方法适用于长期慢性病人群,既可治疗病症,又有可免除长期服药、针灸之苦痛，其效果明显亦如吴师机所著《理瀹骈文》中所言“膏药之愈人无异汤药”。

慢传输型便秘属于中医虚证便秘的范畴，STC常见证型为气虚便秘、血虚便秘及阳虚便秘。在临床实践中我们发现，阳虚便秘为STC的最常见证型，此类患者多由于劳累耗气、贪凉饮冷，过用寒凉药物，特别是滥用抗生素及大黄、芒硝等苦寒泻下药物，导致脾肾阳气虚弱，真阳不足，温煦无权，不能蒸化津液，使之阴寒内结，糟粕不行，凝结肠道而成便秘。正如《景岳全书·杂证谟·秘结》曰:凡下焦阳虚，则阳气不行，阳气不行，则不能传送而阴凝于下，此阳虚而阴结也，中医多以温阳通便为治则，临床中我们应用源于吴师机的《理瀹骈文》的附子丁香散加味穴位贴敷治疗阳虚型STC，取得确切疗效。附子丁香散加味穴位贴敷治疗阳虚便秘，最早记载于清代吴师机《理瀹骈文》中，其中附子丁香散来源于《普济方》，由附子、干姜、苦丁香、肉豆蔻、白芷组成，功能温阳降逆，内服用于治疗恶心吐逆，脏冷泄泻等症，研末外用可温阳散结、行气通便，我们通过在临床中的不断实践，在此方基础上，加入气味俱厚、浓烈芳香、辛香温热之炮川乌、牙皂、花椒、冰片，外敷于双侧天枢及神阙穴，此法具有简单便捷、作用安全、起效快、效果好的特点,既可自立一门,又可补内治之不足。

近年对STC的病因病理学研究显示，STC是“肠神经病”,即肠神经系统 (ENS)功能的异常引起的病变。肠神经系统是指胃肠道系统中所含的神经元及其间的网络结构的总称，有"肠道的大脑"之称,能不需中枢神经系统的支配独立行使其功能,控制肠道的运动、内分泌和外分泌、胃肠道的微循环等。血管活性肠肽(VIP能神经元和SP能神经元是肠神经系统中2种重要的肽能神经元, 对胃肠的运动功能起着重要的调节作用。我们可以把ENS看作是一系列在胃肠道重复出现，互相重叠的包括感受神经元、上行和下行中间神经元、上行兴奋性和下行抑制性运动神经元的单元。在这些回路和单元中,神经递质是不可缺少的信息载体。VIP和SP就是ENS中2种重要的神经递质。SP主要存在于中枢神经系统及肠肌间神经丛中，在整个胃肠道内均有分布[9]，SP为调节肠道作用最强的兴奋性递质, 具有强烈促进肠道平滑肌收缩, 刺激小肠、结肠黏膜分泌水和电解质, 促进胃肠蠕动的作用[10]。国内外学者对STC患者结肠组织进行研究后认为STC的发生可能与SP水平降低相关, 这可能是导致结肠传输功能损害的原因之一[11～13]。VIP是肠神经系统中的一种主要的抑制性神经递质，VIP可通过松弛胃肠平滑肌, 抑制结肠和直肠紧张性, 抑制小肠运动, 以减弱胃肠动力, VIP增加造成了肠道动力抑制性背景, 以致肠蠕动性收缩不易发生, 导致便秘[14]。研究表明，便秘患者肠道中 VIP 的表达显著降低，影响结肠下行性抑制，致使巨大迁移性收缩传播障碍[15]。尽管VIP是胃肠道抑制性神经递质, 但国内外大量学者通过对STC患者及动物模型的研究认为VIP有减少趋势, 其含量减少可能导致结肠出现过度的阶段性蠕动，使有效蠕动减弱, 从而出现结肠传输障碍[16]。本研究结果显示，与对照组相比，模型组大鼠血清SP水平下降，VIP水平升高,与文献报道相一致。予以附子丁香散加味穴位贴敷治疗后，穴位贴敷组大鼠血清VIP水平降低，SP水平升高，与模型组相比有显著差异，表明附子丁香散穴位贴敷对阳虚型STC大鼠血清VIP及SP水平有调节作用，可能通过下调血清VIP水平和升高血清SP水平兴奋平滑肌，引起平滑肌收缩，调节肠道功能，促进肠道蠕动，达到治疗阳虚型STC的目的，这可能是附子丁香散加味穴位贴敷治疗阳虚型STC的作用机理之一。

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