UPLC用于喘可治注射液中淫羊藿苷稳定性的考察

陈换飞 邹静 白兰 彭婷 张梅（通讯作者）

（1成都中医药大学药学院 中药材标准化教育部重点实验室中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地 四川 成都 611137）

（2 四川省医学科学院·四川省人民医院 四川 成都 610072）

喘可治注射液的主要成分为4种黄酮类化合物：朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C及淫羊藿苷，因注射剂对主成分含量稳定性要求严格，且2015版药典针对淫羊藿饮片主要测定淫羊藿苷含量情况，故本文就喘可治注射液中指标成分淫羊藿苷进行UPLC分析测定，以实现喘可治注射液更准确有效的质量控制。

1.仪器与试药

Ultimate 3000 U HPLC系统，PDA检测器，Thermo Fisher公司；分析天平(上海市天平仪器厂)；离心机(LC-4016)；真空干燥箱(江苏南京海汪制药机械装备有限公司)；药品稳定性试验箱(LHH-150SD)；

淫羊藿苷对照品（中国食品药品检定研究院）；喘可治注射液（国药四川医药集团有限公司）；实验用水为实验室自制重蒸水；色谱乙腈；分析纯甲酸。

2.方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Waters Acquity UPLC BEH‐C18 色谱柱（2.1 mm×150 mm,1.7μm）；流动相：乙腈（A）-水/0.1%甲酸（B）；梯度洗脱∶0～10min（15%A），10～30min（15%～25% A），30～45min（25%～35% A），45～60min（35%～50% A）；柱温35℃；流速0.3mL/min；检测波长270nm；进样量5μL。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取干燥的淫羊藿苷对照品2.5mg于10mL容量瓶中，乙腈-0.1%甲酸水溶液（35：65）溶解并定容至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜过滤即得。

2.3 供试品溶液的制备

精密量取喘可治注射液1ml，乙腈-0.1%甲酸水溶液(35：65)稀释至10ml，摇匀，0.45μm微孔滤膜过滤即得。

2.4 方法学考察

2.4.1 标准曲线 以乙腈-0.1%甲酸水溶液(35：65)为溶剂，取对照品适量，配制含淫羊藿苷10、40、80、120、180、250μg/ml对照品溶液。依“2.1”项下色谱条件进样，以被测物浓度为横坐标x，被测物峰面积为纵坐标y绘制标准曲线，回归方程Y=3.53×107X+52087，r=0.9998。结果表明，淫羊藿苷在0.01～0.25mg/mL浓度范围内线性关系良好。见图1。

图1 淫羊藿苷标准曲线

2.4.2 精密度考察 取“2.4.1”项下0.05mg/mL对照品溶液，连续进样5次，以峰面积计算精密度，RSD为0.08%，表明仪器精密度良好。

2.4.3 准确度考察 取同一0.05mg/mL对照品溶液，挥干溶剂后加入等量0.05 mg/mL淫羊藿苷对照品溶液，溶解，0.45μm微孔滤膜过滤，进样测定峰面积，计算回收率。见表。

表加样回收率实验测定结果（n=6）

2.4.4 重复性考察 取同一0.05mg/mL标准品溶液，连续进样5次，测定含量，得RSD小于1.1%，表明重复性良好。

2.4.5 稳定性考察取 同一0.05mg/mL标准品溶液，分别在0、2、4、6、8、12小时进样测定淫羊藿苷含量，得RSD为1.3%，表明该成分在12小时内稳定。

2.5 淫羊藿苷含量测定

取药品稳定性试验箱中50℃、75%相对湿度条件下储存7日的5个批次喘可治注射液，依“2.3”项下方法制备供试品溶液，测定淫羊藿苷含量。

2.6 实验结果

5批次高温高湿储存的喘可治注射液中淫羊藿苷含量分别为99.8%、100.2%、99.3%、99.0%、99.2%，平均含量为99.5%，RSD为0.49%。说明该注射液中淫羊藿苷成分在相对较高的温度和湿度下储存，稳定性良好。

3.讨论

本文建立了UPLC测定喘可治注射液中有效成分淫羊藿苷的方法，以乙腈（A）-0.1%甲酸水溶液（B）为流动相，流速0.3mL/min，梯度洗脱。柱温35℃，检测波长270nm，进样量5μL。试验表明该分析方法精准确度和重复性好，可有效检测淫羊藿苷的含量变化。同时考察该注射液在50℃、相对湿度75%条件下储存7日淫羊藿苷的含量变化，结果表明注射液中淫羊藿苷含量高于标示量的99.5%，说明其耐热耐湿性良好。

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