广西产拳卷地钱中农药残留检测

2018-03-06王跃峰牛思琪笪舫芳

中国民族民间医药 2018年2期

王跃峰牛思琪笪舫芳王剑朱华*

1.成都中医药大学,四川成都 610075; 2.广西民族大学,广西南宁 530006;3.广西中医药大学,广西南宁 530200

中药材是人们用以防病、治病的特殊商品，因其具有疗效独特、资源丰富、不良反应少等优势[1]，在国内外掀起了绿色消费热潮。为满足日益增长的市场需求，中药材开始像水稻、蔬菜等农作物一样，进行农业化人工种植[2]。大面积种植中药材易造成病虫害相互传染，且栽培过程中药农严重依赖具有高效、速效、经济等特点的化学农药，而过量施用农药或施用农药不当致使中药材农药残留量超标，不仅影响药材疗效，甚至会直接危害人体健康。随着中药被检出重金属和农残等安全限量超标的报道频频出现，中药材及其制剂的质量安全受到质疑，严重制约了中药材及其产品走向国际舞台[3-5]。

为进一步加强中药材的质量控制，增加中药的安全性指标，在2015年版《中国药典》的基础上，经国家药典委员会组织有关单位和专家对黄曲霉毒素、重金属及有害元素、农药残留量等有害物质的控制方法、限度值以及重点品种进行了试验研究[6-8]。《中国药典》收载的人参、西洋参药材及其饮片品种项下增加“农药残留量”部分检查项目，限度为“含总六六六( δ-BHC、γ-BHC、β-BHC、α-BHC 之和)不得过0.2 mg /kg；总滴滴涕(op′-DDT、 pp′-DDE、pp′-DDT、pp′-DDD之和)不得过0.2 mg /kg；五氯硝基苯不得过0.1 mg /kg”。

广西产拳卷地钱来源为地钱科地钱属植物拳卷地钱(MarchantiaconvolutaGao et Chang)，为广西民间常用中草药之一。其始载于《西藏苔藓植物志》，广泛分布在西藏、广西、贵州等高寒山区[9]，是苔藓植物中常见的中草药之一，常用其外治烫伤骨折、体癣、疮病不敛，内治黄疸性肝炎，获得了较好的疗效[10-11]。近年来，我国对中药中农残的研究报道屡见不鲜，农残检测主要采用气相(GC)、高效液相(HPLC)、气相-质谱联用(GC-MS)等检测方法[12-15]。笔者就拳卷地钱中总六六六( δ-BHC、γ-BHC、β-BHC、α-BHC 之和)、总滴滴涕(op′-DDT、 pp′-DDE、pp′-DDT、pp′-DDD之和)和五氯硝基苯9种有机氯农残进行测定，为控制拳卷地钱安全限量提供实验数据，以期为开发利用拳卷地钱药材资源提供安全性保障。

1 仪器与材料

1.1 药材来源拳卷地钱采集于广西南宁市高峰林场，经生药学专家韦松基教授教授鉴定为地钱科地钱属植物拳卷地钱(MarchantiaconvolutaGao et Chang)。

1.2 农药标准品 α-六六六标准品、β-六六六标准品、γ-六六六标准品、δ-六六六标准品、P-P’-滴滴涕标准品、P-P’-滴滴滴标准品、P-P’-滴滴伊标准品、O-P’-滴滴涕标准品、纯度≥99.99%；

1.3 试剂石油醚、苯、丙酮、乙酸乙酯、无水硫酸钠、正己烷等试剂均为分析纯；40g/L氯化钠水溶液；弗罗里硅土：层析用，于620℃灼烧4 h后备用，用前140℃烘2 h，趁热加5%水灭活。

1.4 仪器气相色谱仪(ECD检测器)；旋转蒸发仪；电动振荡器；高速离心机；200 g小型粉碎机；组织捣碎机；10 μL微量注射器：髙速分散器；硅镁吸附剂预处理小柱。

2 方法与结果

2.1 有机氯农药多种残留量的测定

2.1.1 试样制备取所采集的干燥拳卷地钱经粉碎机粉碎，过20目筛制成试样。

2.1.2 提取称取10 g试样(精确到0.00 lg)，加入100 mL三角瓶，加入20 mL石油醚，于振荡器上振摇0.5 h。净化：①层析柱的制备:玻璃层析柱中先加入1 cm高无水硫酸钠，再加入5 g 5%水脱活弗罗里硅土，最后加入1 cm高无水硫酸钠，轻轻敲实，用20 mL石油醚淋洗净化柱。②净化与浓缩：吸取试样2 mL，用100 mL石油醚-乙酸乙酯(95∶5)洗脱，收集洗脱液于蒸馏瓶中，于旋转蒸发仪上浓缩近干，石油醚少量多次溶解残渣，定容至1.0 mL，供气相色谱分析。

2.1.3 测定

2.1.3.1 气相色谱参考条件色谱柱：石英弹性毛细管柱，0.25 mm(内径)×15 m；气体流速：氮气40 mL/min，尾吹气60 mL/min，分流比1∶50；温度：180℃升至230℃，30 min；检测器、进样口温度250℃。

2.1.3.2 色谱分析吸取1 μL试样液注入气相色谱仪，记录色谱峰的保留时间和峰高。再吸取1μL混合标准使用液进样，记录色谱峰的保留时间和峰高。根据组分在色谱上的出峰时间与标准组分比较定性；用外标法与标准组分比较定量。

2.2 五氯硝基苯残留量的测定

2.2.1 标准品制备五氯硝基苯标准贮备液和中间液:准确称取五氯硝基苯0.0100 g，用正己烷溶解，100 mL容量瓶定容，浓度为100 μg/mL；供试液，稀释100倍，标准中间液浓度：1 μg/mL。五氯硝基苯标准使用液:取中间液配制成：0.005、0.010、0.050、0.100、0.150 μg/mL系列标准使用液。载体：Chromsorb W AW 80～100目。固定液:OV-17 和 QF-1。

2.2.2 提取称取经粉碎过40目筛的试样5.0 g置于50 mL离心管中，加20 mL正己烷，高速分散器 (10000 r/min)分散4 min，离心(2000 r/min)5 min，将提取液移入25mL容最瓶中，向离心管中加5 mL正己炫，按上法再提取一遍，将提取液合并，定容至25.0 mL。

2.2.3 净化预处理柱的净化：1 mL丙酮-正己烷(1+9)分两次淋洗，再用1 mL正己烷淋洗。将提取液5 mL过柱，K-D浓缩器集于液体收，丙酮-正己烷(1+9)3mL淋洗，淋洗液并入上述K-D浓缩器，吹氮气浓缩至1mL，备用。2.2.4 气相色谱参考条件进样口温度：23℃；检测器温度：230℃；柱箱温度：190℃；载气(N2)流速：50 mL/min；色谱柱：内径3 mm，柱长1.5 m，玻璃柱，内装涂以1.5%OV-17+2%QF-l固定液，载体为80～100目Chromsorb W AW。

2.2.5 测定五氯硝基苯标准使用液、试样各1 μL注入气相色谱仪，测定，计算五氯硝基苯的含量。检测结果见表1。

表1 广西产拳卷地钱中9种有机氯农药残留检测结果

3 讨论

由于农药品种繁多，性质各异，近几年其检测技术主要是色谱法，其中以气相色谱应用最为广泛。该法检测灵敏度高、简便快捷、分离效果好，可作为拳卷地钱农残安全限量监测及质量控制的有效手段。笔者采用气相色谱法对9种有机氯进行测定，结果为总六六六( α-BHC、β-BHC、γ-BHC、 δ-BHC之和)未检出；总滴滴涕( pp′-DDE、pp′-DDD、op′-DDT、pp′-DDT 之和)未检出；五氯硝基苯未检出。参考《中国药典》收载的人参、西洋参药材及其饮片品种项下“农药残留量”“检查限度”含总六六六( α-BHC、β-BHC、γ-BHC、 δ-BHC之和)不得过0.2 mg /kg；总滴滴涕( pp′-DDE、pp′-DDD、op′-DDT、pp′-DDT 之和)不得过0.2 mg /kg；五氯硝基苯不得过0.1 mg /kg，可见9种有机氯农残检出结果均合格。

拳卷地钱采于广西南宁高峰林场，为南宁市近郊，但其为野生药材，与农作物交集较少，生长在较天然环境下，故农残含量结果未检出说明其生长环境农药污染不明显。

[1]Zhang BG,Yong P,Zhao Z,et al. GAP production of TCMherbs in China[J].Planta Med,2010(76):1948.

[2]杨银慧,豆小文,孔维军,等. 我国中药材中农药登记现状及污染分析[J]. 中国中药杂志,2013(24):4238-4245.

[3]张鹏,李西文,董林林,等. 植物源农药研发及中药材生产中的应用现状[J]. 中国中药杂志,2016,41(19):3579-3586.

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[5]孔令军,张娅婷,谷令彪,等. 中药材农药残留的研究进展[J]. 中国实验方剂学杂志,2015,21(21):231-234.

[6]国家药典委员会.关于中药中重金属、农残、黄曲霉毒素等物质限量标准草案的公示[J]. 中国药品标准,2013,14(1):51.

[7]李.国家药典委员会发布中药重金属、农残、黄曲霉毒素等的限量标准草案[J]. 化学分析计量,2013,22(1):10.

[8]本刊通讯员.《中华人民共和国药典》拟增中药重金属等限量标准[J]. 中国中医药信息杂志,2013,20(1):5.

[9]中国科学院青藏高原综合科学考察队.西藏苔藓植物志[M].北京: 科学出版社,1985: 553.

[10]朱华.广西地钱属药用植物资源调查和形态构造研究[A].中国中医药学会编,第7届全国中药标本馆专业学术讨论会论文集[C]//成都:成都中医药大学,2002:161.

[11]Zinsmeister HD.苔藓植物是生物活性物质的一个资源[J].国外医药(植物药分册),1994,9(5):203 .