AOTF-NIR在精芪双参胶囊黄芪甲苷含量快速分析中的应用

任绪华 苏婷 姜文月 李亚东 崔宪利 于园园 高陆＊

1 长春中医药大学 （吉林 长春 130000）2 吉林省现代中药工程研究中心有限公司 （吉林 长春 130000）3 吉林长白山药业集团股份有限公司 （吉林 白山 134300）

精芪双参胶囊由黄芪、黄精、人参、丹参组成。其中君药黄芪主要成分黄芪甲苷在本药物药效中起到了主要作用。本研究依据CFDA部颁标准对精芪双参胶囊中黄芪甲苷进行含量测定并与声光可调-近红外光谱技术（AOTFNIR）相关联，建立一种快速无损测定黄芪甲苷含量的新方法。

1.材料

1.1 仪器

Luminar-5030声光可调近红外光谱分析仪（BRIMROSE公司），L-3000高效液相色谱-蒸发光检测仪（RIGOL公司）。

1.2 试剂

黄芪甲苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110781-201515，纯度93%）；乙腈（Fisher）；高纯氮气；超纯水。

1.3 药物

由于建立模型所用样品含量范围和分布情况直接影响校正模型的预测性能[1]，本研究收集不同时期生产的不同批次的精芪双参胶囊样品80批（校正集样品70批、验证集样品10批）。

2.方法与结果

2.1 光谱采集

取校正集样品，倒入光谱采集槽中，在1100～2300nm扫描，扫描间隔2.0nm，扫描次数300次[2,3]。每批次样品扫描3次，得到校正集样品光谱图。验证集10批样品与校正集样品操作一致，见图1～2。

图1. NIR校正集原始光谱

图2. NIR验正集原始光谱

2.2 指标检测

上述80批样品黄芪甲苷含量测定依照CFDA部颁标准WS-5136（B-0136）-2014Z检查项下方法进行检测。

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水（36﹕64）为流动相；流速0.8mL/min；柱温40˚C；蒸发光散射检测器检测，气体流速2.7L/min。理论塔板数按黄芪甲苷峰计算应不低于6000。

对照品溶液的制备：取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每0.45mg/mL的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取约本品内容物2.5g，用2%氢氧化钾的甲醇溶液加热回流2次，分别为1h、0.5h，每次加溶液50mL，滤过，滤液蒸干，残渣加热水30mL使溶解，以三氯甲烷-正丁醇（2﹕1）的混合溶剂萃取4次，每次30mL，分取下层溶液，蒸干，加甲醇使残渣溶解并定容至5mL量瓶中，摇匀，即得。

测定法：分别精密吸取5μL、20μL对照品溶液，10μL供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定，以外标两点法计算对数方程，即得。测定色谱图见图3～4。

图3. 对照品黄芪甲苷HPLC-ELSD图

图4. 样品黄芪甲苷HPLC-ELSD图

2.3 NIR定量校正模型建立与验证

为消除噪音和基线漂移等影响，用prospect软件对原始光谱进行一阶导数九点平滑预处理[3]。采用PLS法将测定结果与经过预处理光谱进行关联，用CAMO化学计量学软件建立模型，以交叉-验证法建立各指标校正模型[4]。经筛选优化，得到黄芪甲苷PLS模型。见图5。利用验正集样品对已建立的校正模型进行预测分析，预测结果见表1。

图5. 黄芪甲苷PLS模型

表1. 黄芪甲苷的预测结果(%)

黄芪甲苷校正模型显示，所建立模型R2=0.9533，RMSEC=0.0066，RMSEP=0.0163，性能较好。验证集样品验证结果显示，黄芪甲苷的实测值与预测值偏差为2.02%，精芪双参胶囊中黄芪甲苷采用常规检测方法测定的实测值与NIR校正模型预侧值之间相关性良好，测定准确性较高。

3.讨论

本研究利用AOTF-NIR技术，建立黄芪甲苷校正模型后，无需长时间样品处理，便可快速、无损预测精芪双参胶囊中黄芪甲苷的含量，预测结果较为准确，且能够满足生产中精芪双参胶囊中黄芪甲苷的检测需求。本研究不仅缩短了精芪双参胶囊的检测周期、减少耗材使用、降低检测成本，而且能够实现现场分析和在线应用[5]。若进一步增加样本数量，扩大样本的覆盖范围，可以建立更加稳定的模型，为精芪双参胶囊质量控制提供快速、高效的检测方法。

[1]钟英杰,李亮,庞云露,等.近红外光谱技术在中药研究中的应用[J].药物分析杂志,2015,35(10):1697-1703.

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[3]杨丽,李菁,刘翠红,等.AOTF近红外光谱技术在淫羊藿浓缩过程在线检测中的应用[J].中国医药导报,2014,11(24):111-114.

[4]李洋,吴志生,史新元,等.中试规模和不同提取时段的黄芩配方颗粒质量参数在线NIR监测研究[J].中国中药杂志,2014,39(19):3753-3756.

[5]吴莎,刘启安,李云,等.最小二乘支持向量机和偏最小二乘法在栀子中间体纯化工艺近红外定量分析中的应用[J].中草药,2015,46(7):990-997.