三种处理方式对体外鸡蛔虫卵灭活作用比较试验

2018-03-03黄恩福王冷眉范寅黄小红廖健慧段凯文吴家斌

江西畜牧兽医杂志 2018年1期

黄恩福，王冷眉，范寅，黄小红，廖健慧，段凯文，吴家斌

（1.江西生物科技职业学院，江西南昌 330200；2.江西农业大学动物科学技术学院）

鸡蛔虫是鸡体内最大的线虫，属卵生、土源性线虫。蛔虫卵随粪便排出后不需任何中间宿主，在外界充足氧气、适宜的温度和湿度可直接发育成感染性虫卵。虫卵对外界环境不利因素及常用消毒药物抵抗力很强［1］。人们不断寻求新的消毒药物及紫外线辐射等方法，试图杀灭虫卵活力。目前，蛔虫卵活力测定方法多采用平皿滤纸培养法［2～3］，尚有直接镜检法、活体染色法、荧光显微镜法、动物试验法以及人工孵化法［4～6］。上述各法需时有长有短、操作有繁有简，但均不能完全满足准确、快速、简便、稳定的要求［7］。为此，本试验将虫卵经药物、太阳光照及粪便堆沤方法处理后，采用平皿滤纸培养法，观察鸡蛔虫卵发育各期活力情况，以示对虫卵的灭活效果，旨为防止鸡蛔虫病提供理论参考依据。

1 材料与方法

1.1 鸡蛔虫

雌性蛔虫20条（农贸市场活鸡宰杀点采集）。

1.2 消毒药

5%甲酚皂（厂家：江西草珊瑚消毒用品有限公司；批准文号：卫消字2005第033号），饱和食盐水（自制）。

1.3 虫卵的收集

分别将20条蛔虫近生殖孔端2/3子宫处内的虫卵集于扁形称量瓶中，加少许水形成虫卵液，16×10倍显微镜下检查虫卵液中的蛔虫卵，备用。

1.4 平皿滤纸培养

皿底和周围均以滤纸包裹，皿底滤纸上再平铺7个圆形小滤纸／份样，滴加虫卵液，皿底朝上扣于装有清水的医用方盘中，使周围滤纸始终能接触清水，皿底保持湿度，置30℃恒温箱中孵化培养7d（168 h）。

1.5 试验设计（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ）4组，其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ为试验组，每组3份样，先对份样分别进行处理。

药物处理（Ⅰ）：虫卵浸于10%的甲酚皂中（5%）0.2 h、0.5 h、1 h，离心洗净后培养；太阳光照处理（Ⅱ）：虫卵处于装有1/3清水的青霉素瓶中，以太阳分别照射1 h、2 h、3 h，离心后培养。粪便堆沤组处理（Ⅲ）：虫卵处于成形的新鲜鸡粪便中拌匀，平铺于称量瓶的底部，加滤纸后再添加鸡粪覆盖，置30℃恒温箱内（滴加水防粪便干凅）5 d、10 d、15 d（168 h、240 h、360 h）取出，饱和食盐水漂浮收集虫卵，离心洗净后培养。再用1.4方法培养；第Ⅳ组为对照组1份样。

1.6 虫卵各发育期形态观察

对照组每天取出一块圆形小滤纸，用水洗下表面虫卵于扁称量瓶中，在16×10倍显微镜下观察了解虫卵各发育期的形态并照相。

1.7 灭杀卵计数

取出经平皿滤纸培养7 d（168 h）的试验各组份样，在显微镜下随机计数150个或以上，记录灭杀卵和成活卵。

1.7.1判定标准。卵内有感染性幼虫的为成活卵，否则为灭活卵。

1.7.2计算公式。成活率＝成活卵数／虫卵总数×100%；相对成活率＝试验组成活率/对照组成活率×100%；虫卵灭活率＝（100－相对成活数）×100%。

2 结果

2.1 鸡蛔虫卵各发育期的形态

虫卵各发育期的形态可分为单细胞虫卵、二个胚泡期虫卵、四个胚泡期虫卵、八个胚泡期虫卵、前桑椹期虫卵、桑椹期虫卵、蝌蚪期虫卵、虫样期虫卵、感染期虫卵9种（见图1）。

图1 鸡蛔虫卵9种发育期的形态（16×10倍）

2.2 三种处理方式对鸡蛔虫卵灭活作用

第Ⅰ组3份样的灭活率分别为9.78%、21.72%和98.88%，虫卵随药物作用时间增长，感染期虫卵减少，灭活率增高；第Ⅱ组3份样的灭活率分别为61.12%、96.47%和97.27%，虫卵随太阳光照时间增长，感染期虫卵减少，灭活率增高，光照1 h和2 h的灭活率差异不大；第Ⅲ组3份样的灭活率均为100%。虫卵发育停止于八个胚泡虫卵期，后期均为“0”。灭活作用以第Ⅲ组最好，第Ⅱ组次之，第Ⅰ组较差（详见表1）。

表1 三种处理方式对鸡蛔虫卵的灭活作用比较

3 讨论

3.1 温度、紫外线直射、消毒药物对虫卵发育的影响

结果表明：第Ⅲ、Ⅱ、Ⅰ组平均灭活率分别为100%、84.95%和43.46%，灭活作用以第Ⅲ组最好，第Ⅱ组次之，第Ⅰ组较差。原因是温度、紫外线直射、消毒药物对虫卵发育的影响。

第Ⅲ组虫卵处于30℃恒温箱中，氧份减少，消化不完全的鸡粪便分解产热，温度升高至40℃或以上，细菌繁殖，氧份减少致虫卵发育停止于2～8胚泡期，洗净培养虫卵发育停止并死亡，符合于文献［1，8］虫卵处于高于39℃时虫卵发育停止或死亡；45℃时虫卵在5 min内死亡。第Ⅱ组3份样虽经太阳中的紫外线直射，除照射时间长于文献［12］外，也于随紫外线直射时间延长虫卵萎缩、变性、未见幼虫或部分虫卵明显变黑，结果基本相同；第Ⅰ组3份样虫卵滞留10%的甲酚皂中的时间越长，灭活作用越强，1 h灭活率可达98.88%，略高于太阳光照3 h，但第Ⅱ组平均灭活率远大于第Ⅰ组，符合虫卵对常用的消毒药物抵抗力很强［9～11］。

3.2 对养鸡场粪便处理方法的建议

第Ⅲ组3份样虫卵处于新鲜鸡粪中恒温30℃培养7 d、10 d、15 d，虫卵发育停止于八个胚泡虫卵期，约需1周时间，虫卵灭活率均达100%；粪便堆沤实际操作简便易行，环保，建议推广应用。第Ⅱ组虫卵分别光照1 h、2 h、3 h后培养7 d，虫卵发育大多停止于单细胞虫卵期，卵细胞被灭活，灭活率分别达61.12%、96.47%和97.27%，光照1 h和2 h的灭活率差异不大，说明虫卵通过1 h的太阳光照几乎能灭活虫卵；建议应用时将鸡粪便集中平铺于阳光下暴晒，对虫卵灭活为好的方法。第Ⅰ组鸡蛔虫卵对药物的抵抗力很强，虫卵滞留药物处理时间较长才有一定的灭活力，无应用意义。