梓醇对拟AD模型小鼠小河马突触可塑性的修复作用

宋冲，曹斌

（长沙医学院，湖南 长沙 410219）

引言

阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）是一种神经退行性疾病，患病人群主要体现在老年人群。出现记忆力丢失、认知能力减弱。AD 病人的皮层活组织检查发现突触密度下降25-35%，并且每个神经元的突触数目减少15-35%[1]。突触丢失在海马组织更明显，可达到44-55%[2]。在早期AD 的突触病理变化中，除了突触连接丢失还会出现突触功能低下。本文拟采用梓醇干预小鼠小河马AD模型，深入研究梓醇对小鼠突触可塑性的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料

实验动物：7W 小鼠小河马。光照时间12 h 交替，体重（30±5）g，清洁度良好，自由进水进食。

仪器：小鼠小河马脑立体定位仪：美国STOELTING公司产品；微量注射器（1μl）：医用激光仪器厂；电动牙科钻：SAESHIN 公司产品；Y-迷宫测定仪：张家港市生物医学仪器厂。

1.2 实验方法 采用模型制作参照小鼠脑标准图谱，采用Aβ25-35 加IBO 混合后一次脑内定位注射法，右脑单侧注射。动物分为三组，分别为①对照组；②模型组；③梓醇用药组。实验组小鼠小河马均按每天50 mg/kg 经胃管喂服梓醇，对照组及模型组小鼠小河马喂药等体积蒸馏水，灌服共60 d，每天一次。对照组：10 只，每日以蒸馏水灌胃，连续60 d。模拟组：10 只，每日以蒸馏水灌胃，连续60 d。梓醇组：10 只，每日以梓醇水溶液50 mg/kg/d 灌胃，连续60 d。Y-迷宫测试，在实验前将小鼠小河马分别放入迷宫适应5 min。模型制作60d 后进行Y-迷宫测试，工作电压为35-45 伏[3-4]。Y-迷宫由3个相同的臂组成，分别称为I 臂，II 臂，III 臂。首先将小鼠小河马跟别放入不带电的臂（I 臂，起始臂），转换按钮，使小其所在臂带电面顺时针的臂（II 臂，安全臂）不带电，逆时针臂（III 臂，电击臂）带电，分别驱使小鼠小河马离开原所在臂。若小鼠小河马直接进入顺时针臂（II 臂）则判断为“正确反应”，相反则判断为“错误反应”，灯光持续5 s，然后开始下一次实验。起始臂为II 臂，安全臂为III 臂，电击臂为I 臂，依次进行转换，每天测试20 次。记录连续7 d 的正确反应次数和训练20次所需的总时间min，以第7 d 的结果作为衡量小鼠小河马学习（近期记忆）能力的指标。

放射配基结合分析单点分析法测定注射侧脑内M 胆碱受体密度，放射酶学法测定内胆碱乙酰转移酶（choline acetyltransferase，ChAT）的活性，ELISA 法测定脑内源性神经营养因子（brain-derivedbeurotrophic factor，BDNF）的含量。

2 结果

梓醇组第7 d 20 次测试正确次数（18.33±0.98），显著好于模型组（16.15±2.30），与对照组（19.38±0.92）无统计学差异。梓醇组7 d 20 次测试的正确次数/总反应时间（8.41±0.80）也显著好于模型组（5.92±1.20）且与对照组（9.18±0.63）无统计学差异。放射配基结合分析单点测定注射侧脑内M 胆碱受体密度，对照组（1090±108 fmol/mg Pro），模型组（925±58 fmol/mg Pro）无统计学差异。ELISA 法测定脑内BDNF 含量结果显示，与模型组（0.733±0.221 pg/ug Pro）相比，梓醇组BDNF 含量显著提高（0.849±0.208 pg/ug Pro），且对照组（0.832±0.216 pg/ug Pro）无统计学差异[5]。

3 讨论

AD 是一种以慢性进行性的记忆力减退、认知功能障碍及精神行为异常为主要临床特征的神经变性疾病。由于病因及发病机制尚不明确，目前市场上尚无阻止、延缓或防止这一疾病发生和发展的药物。有效治疗方法的缺乏与疾病快速进展之间存在着尖锐的矛盾。因此，探寻有效的抗AD 防治措施，不仅是目前生物医学研究的重点和热点，也必将成为经济建设和社会发展亟待解决的一个重大问题。

梓醇主要是从中药地黄根部分离提纯得到的一种小分子糖苷，是地黄的主要有效成分之一，分子量为362.45。研究表明，梓醇具有广泛的药理活性。自由基损伤是脑缺血损伤的重要机制之一，神经细胞产生大量的活性氧和自由基直接作用于线粒体膜，ATP 产生迅速减少，Ca2+超载诱发细胞凋亡。体内外的脑缺血研究表明，梓醇治疗后，凋亡细胞显著减少，同时内源性过氧化酶活性显著提高，如谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶等，并且，丙二醛、活性氧自由基的含量和一氧化氮合酶的活性明显下降，这说明梓醇通过提高抗氧化酶活性，增加自由基的清除，抑制线粒体介导的凋亡途径发挥神经保护功能。

本实验通过小鼠小河马AD 模型进行梓醇干预，行为学检测结果表明，梓醇明显改善了动物模型的近期记忆，而放射配基结合分析单点测定结合ELISA 法监测结果显示，经梓醇干预后，BDNF含量显著提高。本实验证明，动物单侧脑基底核部位一次性定位注射淀粉样肽Aβ25-35 和IBO 可造成稳定痴呆模型，应用梓醇能明显改善拟痴呆小鼠小河马的短期记忆能力，对AD 具有显著治疗改善作用。