高分离度液相色谱-四极杆-飞行时间质谱联用法检测不同种类茶叶对人参皂苷的影响

戴雨霖，乔梦丹，越 皓，宋 岩

（长春中医药大学，长春 130117）

人参的主要有效成分是人参皂苷[1]。《中华本草》中记载“人参不宜与茶同服”[2]。同样在《中药学》中记载服用人参时“不宜同时吃萝卜或喝茶”，以免影响补力[3]。茶叶主要含有单宁和茶多酚[4]，单宁有一定的收敛作用，易与蛋白质结合，形成鞣酸蛋白，影响吸收而降低药效。茶多酚的含量在茶叶里面很高，约含20%～35%。茶多酚是混合物，比如绿茶里主要叫儿茶素，红茶里的儿茶素经过发酵过程变成了茶黄素。然而，茶叶是一个庞大的范畴，其中包括绿茶、白茶、红茶等，每种茶叶的化学成分不同，每种茶叶与人参合用的效果也一定不尽相同。吴红娟等[5-6]利用高效液相色谱法和紫外分光光度法对参茶同用对人参总皂苷含量影响进行了研究，结果研究技术不能完全说明合用前后的效果。

快速分离液相色谱-四极杆-飞行时间质谱联用（RRLC-Q-TofMS）技术是天然产物有效成分定性定量分析的工具[7-8]。本研究首次采用RRLC-Q-TofMS技术研究茶叶对人参皂苷的影响，从化学成分变化的角度阐述二者合用禁忌的科学内涵，为人参新资源食品的合理应用提供借鉴。

1 材料与方法

1.1 材料 绿茶：卢正浩牌西湖龙井，杭州正浩茶叶有限公司，批号：2016-02-15；白茶（特级）：芳羽安吉白茶，安吉递铺三官大明山茶厂，批号：2016-04-06；普洱茶（特级）：大益普洱茶，勐海茶厂，批号：2014-04-23；茉莉花茶：翡翠谷茉莉花茶，黄山市歙县翡翠谷茶叶有限公司，批号： 2016-03-01；红茶（特级）：武夷山金骏眉红茶，批号：2016-03-20；红茶：乐品乐茶，祁门红茶，安徽中联茶叶进出口有限公司，批号：2016-04-01；乌龙茶：璟福源乌龙茶，批号：2016-05-10。实验用人参样品来源于第四次全国中药资源调查，经长春中医药大学药学院于澎教授鉴定为五加科植物人参Panax ginsengC.A.Mey. 的干燥根和根茎；人参皂苷 Rg1、Rf、Rb1、Rc、Re和Rb2等对照品，纯度均＞98%，购于南京泽朗医药科技有限公司；其他试剂均为分析纯。

1.2 仪器 Agilent 1200 型快速分离液相色谱系统和Agilent 6520 Q-TOF 质谱仪（美国 Agilent 公司）。

1.3 方法

1.3.1 样品制备 人参组：人参3 g；人参绿茶组：人参3 g，绿茶3 g；人参白茶组：人参3 g，白茶3 g；人参普洱茶组：人参3 g，普洱茶3 g；人参茉莉花茶组：人参3 g，茉莉花茶3 g；人参红茶（祁门）组：人参3 g，祁门红茶3 g；人参红茶（金骏眉）组：人参3 g，金骏眉红茶3 g；人参乌龙茶组：人参3 g，乌龙茶3 g。将以上各组分别放入250 mL锥形瓶中，各加开水200 mL，密闭浸泡15 min，取上清液100 mL备用。

分别精密称取备用液各25 mL，通过离心，吸取上清液，0.22 μm孔径的有机滤膜滤过后，待测。

1.3.2 色谱质谱条件 色谱柱： Agilent Eclipse Plus C18 柱（2.1 mm×150 mm×3.5 μm）；梯度洗脱：流动相： 0.1%甲酸水溶液（A），乙腈（B）；流动相梯度：0～9 min、0%～19%（B）；9～25 min、19%～25%（B）；25～28 min、25%～50%（B）；28～31 min、50% ～90%（B），31～32 min、90%～99%（B）；柱温30 ℃；流速0.3 mL/min ；进样量5 μL。电喷雾负离子扫描模式（ESI-），干燥气（N2）流速：8 L/min、温度350 ℃，雾化气压力

2.41 ×105/mPa，毛细管电压3 500 V，碎裂电压220 V，锥孔电压35 V，质量扫描范围 （m/z ）150～2 000。

2 结果

2.1 人参皂苷的LC/MS研究 色谱条件优化结果表明，0.1 %的甲酸水溶液和乙腈二元线性梯度洗脱，人参皂苷Rg1、Rf、Rb1、Rc、Re和Rb2得到了较理想的分离效果。

采用RRLC-Q-TofMS联用技术，根据人参皂苷类化学成分的色谱保留时间，准分子离子峰和二级质谱碎片信息，并参考文献[9]进行解析，分析比较了6种人参皂苷在不同样品中的含量。见图1。

2.2 不同种类茶叶对人参皂苷含量的影响比较 将7组样品（人参组、人参绿茶组、人参普洱茶组、人参茉莉花茶组、人参红茶（祁门）组、人参红茶（金骏眉）组、人参乌龙茶组）中的6种人参皂苷进行分析比较。结果：人参组与参茶同用比较，6种人参皂苷均有不同程度降低。其中Rg1与Rb1最为明显：人参组中Rg1含量达到13.8 mg/g左右，而人参乌龙茶组含量只有8.2 mg/g左右。与人参组相比最接近的是人参绿茶组，达到了13.2 mg/g左右；以人参皂苷Rb1为考察指标，人参白茶组与人参红茶（金骏眉）组含量最低，人参茉莉花组含量最高，达到了3.6 mg/g左右，与人参组最接近。其他人参皂苷Rc、Rb2、Rf和Re，人参组与其他参茶组相比，下降趋势不明显，不具有统计学意义。由此，茶的种类不同，与人参的相互作用也不尽相同。

3 结论

通过人参和不同种类的茶叶进行合用，利用RRLC-Q-Tof MS联用技术对人参皂苷的成分及含量进行了鉴定比较。研究中所应用市面上销售常见的茶叶，结果显示，乌龙茶与人参合用，对人参的药效发挥影响最大，而绿茶与人参合用，会微小的影响人参皂苷的含量，但差异不大。由于茶叶分为发酵和未发酵的品种，其中的单宁和茶多酚含量有较大差异，可能是导致人参皂苷含量差异的原因。与人参皂苷相互竞争或者抑制浸出的茶叶中的特殊物质是下一步研究的重点。

[1]CHOI K T. Botanical characteristics, pharmacological effects and medicinal components of Korean Panax ginseng C A Meyer[J]. Acta Pharmacologica Sinica, 2008, 29(9):1109-1118.

[2]国家中医药管理局《 中华本草》编委会.中华本草[M].上海:上海科学技术出版社, 1998.

[3]高学敏.中药学[M].北京:中国中医药出版社, 2002:510.

[4]DAVID I G, BIZGAN A M, POPA D E, et al. Rapid determination of total polyphenolic content in tea samples based on caあeic acid voltammetric behaviour on a disposable graphite electrode[J]. Food Chemistry, 2015(173):1059-1065.

[5]吴红娟,何桂霞,姚颖,等.参茶同用对人参总皂苷含量影响的研究[J].湖南中医药大学学报, 2009, 29(1):33-34.

[6]吴红娟,何桂霞,姚颖,等.高效液相色谱法测定参茶中人参皂苷Rg1和Re浓度[J].中国康复, 2009, 24(5):301-302.

[7]方春雪,位鸿,何蕊,等.液相色谱串联质谱临床应用进展[J].长春中医药大学学报, 2016, 32(2):405-406, 440.

[8]陈佩东,周习.白芍总皂苷部位的液质联用分析[J].长春中医药大学学报, 2015, 31(2):241-244.

[9]戴雨霖,越皓,孙长江,等.高分离度快速液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法分析酒制和醋制人参的皂苷类成分[J].分析化学, 2015, 43(8):1181-1186.