黄连降糖片对2型糖尿病模型大鼠IL-6及TNF-α的影响*

闫 镛 ，庞国明 ，苗明三 ，陈倩倩 ，张瑞帅 ，朱 璞 ，武 楠

（1.开封市中医院内分泌科，开封 475000；2.河南中医药大学，郑州 450046）

2型糖尿病（T2DM）是一种常见的内分泌疾病，其发病机制尚未完全阐明，一直是研究的重点内容。近年来越来越多的研究证明炎症因子在糖尿病的发病过程中起着至关重要的作用，炎症因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α)、白介素-6（IL-6）是重要的糖尿病相关炎症因子，多个研究提示TNF-α、IL-6参与了糖尿病的发生。本院自主研发的黄连降糖片，在以往的临床研究中证实具有调节糖脂代谢，改善胰岛素抵抗的作用[1-2]，但其对2型糖尿病血清炎症因子是否有影响还未经研究证实。本实验通过观察黄连降糖片对T2DM模型大鼠血清IL-6、TNF-α的影响，探讨其降糖机制。

1 材料

1.1 动物 健康SPF级SD雄性大鼠120只，体质量（200±25）g。购自济南朋悦实验动物繁育有限公司，室温 20～25℃，湿度 50%～65%，每日光照 12 h。

1.2 药品与试剂 黄连降糖片（黄连、生地、知母、麦门冬、牡丹皮、酒大黄等，每片包含生药0.3 g）由开封市中医院制剂中心提供。盐酸二甲双胍片（中美上海施贵宝制药有限公司提供）。高脂高糖饲料:南京盛民科研动物养殖场提供。链脲佐菌素（STZ）：美国Sigma公司。大鼠葡萄糖测试盒（由上海复兴长征医学科学有限公司提供），TNF-α、IL-6测试盒（由南京建成生物工程研究所提供）。罗氏卓越金锐血糖试纸。

1.3 仪器 奥林巴斯AU400全自动生化分析仪，BioTek Cytation3酶标仪，罗氏卓越型血糖仪等。

2 方法

2.1 造模、分组与给药 所购大鼠普通饲料适应性喂养1周，随机分为造模组及空白组。造模组大鼠高脂高糖饲料喂养4周，禁食12 h，腹腔注射新鲜配制的STZ溶液（45 mg/kg）以诱导T2DM。空白组注射同体积的柠檬酸缓冲液。给药6 d后，剪尾取血，用血糖仪测空腹血糖（FBG）值，大于16.7 mmol/L为造模成功。将造模成功的大鼠随机分为：模型组、黄连降糖片9个不同剂量组（按照成人1次1片-9片，每日3次的服用剂量分组）、阳性对照组（盐酸二甲双胍片）。按照人和大鼠间体表面积折算的等效剂量比值（0．018）计算大鼠给药量，最终确定黄连降糖片灌胃给药量分别为生药0.081、0.162、0.243、0.324、0.405、0.486、0.567、0.648、0.729 g/kg，阳性对照组予盐酸二甲双胍片0.2 g/kg，模型组与空白组给以等剂量的蒸馏水。

2.2 指标检测 实验期间，每周剪尾取血，用血糖仪测量FBG（禁食12 h，不禁水）。实验结束后，大鼠禁食12 h后称体质量，以水合氯醛（30 mg/kg）腹腔注射麻醉，大鼠仰卧位固定，沿腹正中线打开腹腔，经腹主动脉取血，3 500 r/min离心15 min，分离血清，置-40℃冰箱保存。采用生化仪测FBG，酶标仪测 TNF-α、IL-6水平。

2.3 统计学方法 采用SPSS 17.0软件包进行数据统计分析，计量资料采用（x±s）表示，组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD法。P＜0.05表示差异有统计学意义。

3 结果

3.1 黄连降糖片对T2DM大鼠血清TNF-α、IL-6的影响 灌胃治疗4周后，模型组TNF-α、IL-6明显高于空白组（P＜0．05），黄连降糖片不同剂量组，除1片组外，其余剂量组大鼠的TNF-α、IL-6水平均明显低于模型组（P＜0．05）。说明糖尿病大鼠存在TNF-α、IL-6的升高，足量的黄连降糖片能降低2型糖尿病大鼠的血清TNF-α、IL-6含量。见表1。

3.2 不同剂量黄连降糖片对T2DM大鼠FBG的影响 造模成功后，模型组FBG明显高于正常组（P＜0.05）。造模成功后，黄连降糖片不同剂量组与模型组FBG 无统计学差异（P＞0.05）。灌胃1、2、3周后，黄连降糖片除1、2片组外，其余组FBG明显低于模型组（P＜0.05）。灌胃4周后黄连降糖片除1片组外，其余组FBG明显低于模型组空腹血糖（P＜0.05）。见表2。

4 讨论

糖尿病患者长期痰湿不化、血瘀不行，导致炎症的发生，随着炎症的加剧，一些病理产物如痰瘀等也逐渐增多。炎症因子既是病理产物又是致病因素，毒邪内盛是消渴病及其并发症发生发展的基本病理机制。IL-6和TNF-α是与糖尿病相关的炎症因子，其中IL-6可促进超敏C-反应蛋白等急性时相蛋白的合成，促进炎症和胰岛素抵抗（IR）的发生，并且在控制体重指数及体脂含量后，IL-6水平仍然与IR呈正相关，另外IL-6还可诱导胰岛β细胞凋亡，对β细胞产生细胞毒效应[3]。TNF-α与糖尿病的相关性主要表现在：TNF-α可减少胰岛素受体底物-1（IRS-1）的表达，并抑制IRS-1与胰岛素受体结合；可减少葡萄糖转运体4（GLUT4）的表达，直接导致IR，可促进脂解，使游离脂肪酸增加，肌细胞糖代谢降低，肝糖原合成增多，间接引起IR[4]。祁燕等[5]发现糖尿病大鼠血清中的 TNF-α、IL-6、C-反应蛋白和纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）均明显高于空白对照组。邢茂娟等[6]研究表明在肥胖的T2DM患者血浆TNF-α与糖化血红蛋白呈正相关，血浆IL-6与空腹血糖呈正相关。崔思远等[7]认为高血糖可通过氧化应激反应，促进炎症反应，增加炎症因子的分泌，高血糖与炎症反应是相互作用的过程。

表1 黄连降糖片不同剂量组对大鼠TNF-α、IL-6的影响（x±s）Tab.1 Effect of different dosage groups of Huanglian Jiangtang tablets on TNF-α and IL-6 level in rats（x±s）

表2 黄连降糖片不同剂量组对大鼠FBG水平的影响（x±s）Tab.2 Effect of different dosage groups of Huanglian Jiangtang tablets on FBG level in rats（x±s）

黄连降糖片以黄连为君药，配伍酒大黄、知母、麦门冬、生地、牡丹皮等清热滋阴、活血化瘀为主的中药组成，方中的药物除具有清热解毒作用外，现代药理研究还表明其具有抗病原微生物、抗炎、免疫抑制和调节血糖等作用。研究发现，黄连素有降低糖尿病患者或糖尿病模型大鼠IL-6、TNF-α的作用[7-8]，中药黄连复方及加减配伍可通过抑制炎症因子（IL-6、TNF-α）的表达而发挥降糖作用，如三黄汤[9]、黄连苍薏四味方及其配伍[10]。本研究显示，一定量黄连降糖片有显著降糖作用，且能显著降低TNF-α、IL-6水平，故证实黄连降糖片具有较好的抗炎作用，其降糖机制可能与抗炎作用有关。

[1] 闫 镛，李 霄，李亚欢，等.黄连降糖片干预糖调节受损患者糖脂代谢的临床研究[J].中医研究，2016,29(5):27-30.

[2] 闫 镛，王银珊，李亚欢，等.黄连降糖片干预糖调节受损患者胰岛素抵抗的临床研究[J].四川中医，2016,34(5)：94-96.

[3] 张黎明，高 凌.炎症细胞因子在2型糖尿病发病机制中的研究进展[J].重庆医学,2016,45(8):1113-1116.

[4] 王 颖，王兴亚.抗炎药物用于2型糖尿病预防与治疗的研究进展[J].药学进展,2016,40(3):178-188.

[5] 邢茂娟，袁志刚，张海文，等.Visfatin、LI-6、TNF-α与2型糖尿病的相关研究[J].现代生物医学进展,2011,24(29):4908-4911.

[6] 崔思远，李 芳.IL-6与2型糖尿病关系的研究进展[J].中国微生态学杂志,2012,24(11):1051-1054.

[7] 戴建峰,陈美娟，郭 睿，黄连素对2型糖尿病大鼠CRP、LI-6、TNF-α、脂联素的影响[J].中国伤残医学，2014,22(5):34-36.

[8] 孟晓军，曾映娟，孔红娟，等.黄连素对新诊断2型糖尿病患者内皮功能、白介素-6、肿瘤坏死因子-α的影响[J].中国慢性病预防与控制，2011,19(5):504-508.

[9] 叶丽芳，王 旭，尚文斌，等.三黄汤对肥胖2型糖尿病胰岛素抵抗和炎症因子的影响[J].中国实验方剂学杂志，2013,19(7):289-292.

[10]翁 捷，顿文亮.黄连苍薏四味方及其配伍对2型糖尿病大鼠血糖、血脂及血清炎性因子水平的影响[J].现代中西医结合杂志，2017,26(1):18-20.