结直肠腺癌术后组织中细胞周期素A1、E与磷酸酶及张力蛋白同源蛋白的关系

祁艳娟 秦爱萍 龙启福 陈 凡 周 毛 赵 兴 丌淑君

(青海大学附属医院肿瘤放疗科，青海 西宁 810001)

结直肠腺癌是高增殖性的肿瘤，其增殖活性与腺体分化程度有关〔1〕。细胞周期素(Cyclin)A1可以直接调节哺乳动物机体中细胞周期，是细胞周期调控的正性因子，在G1期转入S期过程中至关重要〔2〕。CyclinE也是细胞周期调控的正性因子，其活性是在G1期末达到高峰，是细胞进入S期的关键性调节基因〔3〕。磷酸酶及张力蛋白同源蛋白(PTEN)是肿瘤抑制性的基因，在正常结肠黏膜中高表达，在肿瘤性进展时表达丢失〔4〕。本文关注结肠腺癌中CyclinA1、CyclinE和PTEN表达，分析其临床意义及相关性。

1 资料与方法

1.1一般资料 2011年1月至2015年12月青海大学附属医院诊断为结直肠腺癌并行手术根治的患者102例为观察组，其中男54例，女48例，年龄49～85岁，平均(57.0±7.8)岁。纳入均经病理医师再次阅片复诊，并符合WHO中的诊断标准及分型。排除标准：①术前行放、化疗；②有肠道手术史；③伴有其他器官恶性肿瘤。选择上述病例中距肿瘤边缘>5 cm的非肿瘤性的结肠黏膜组织23例为对照组，其中男12例，女11例，年龄51～79岁，平均(56.3±6.9)岁。两组一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2CyclinA1、CyclinE和PTEN蛋白的检测 均采用免疫组化SP法，3种蛋白均为浓缩液。先进行预实验，按不同配比浓度进行观察，选择最理想的浓度用于正式实验。由同一技师操作，严格按实验步骤进行，二氨基联苯胺(DAB)显色，减少人为误差。

1.3CyclinA1和CyclinE蛋白检测结果的判定方法 CyclinA1或CyclinE的阳性部位是细胞核，PTEN的阳性部位是细胞质，以染成棕黄色颗粒为阳性反应细胞，均选择上皮细胞染色分布明显且集中的区域进行观察，每张切片选择3个高倍视野，计算阳性率，取平均值，以阳性细胞≥10%定为阳性，以阳性细胞<10%定为阴性。

1.4统计学方法 采用SPSS17.0统计软件进行χ2检验，线性相关分析。

2 结 果

2.1两组CyclinA1、CyclinE和PTEN表达比较 两组CyclinA1、CyclinE和PTEN表达差异有统计学意义(P<0.01)。见表1。

表1 CyclinA1、CyclinE和PTEN在两组中表达的比较〔n(%)〕

2.2CyclinA1、CyclinE和PTEN在观察组不同病理特征中的比较 CyclinA1、CyclinE和PTEN的阳性率均与肿瘤的最大径和增殖指数密切相关，CyclinA1、CyclinE的阳性率与肿瘤的浸润深度和脉管累犯密切相关。见表2。

2.3CyclinA1、CyclinE和PTEN的相关性 CyclinA1和CyclinE的表达呈正相关(r=0.50，P<0.05)，其他指标间未见明显相关性(P>0.05)。

表2 CyclinA1、CyclinE和PTEN在观察组不同病理特征中的比较〔n(%)〕

3 讨 论

结直肠腺癌无论分化程度的高低，均伴有较高的增殖活性及较强的侵袭能力。细胞周期是细胞生命活动的重要过程，正常情况下，细胞在周期时相在变迁中进行增殖、分化、衰老及死亡的一系列状态中〔5〕。细胞周期调控异常时，细胞将进入病理状态，如细胞分化异常及恶性肿瘤的形成等〔6〕。CyclinA1和CyclinE是细胞周期家族的重要成员，CyclinA1属于高度保守的细胞周期蛋白家族，具有组织特异性，可以结合转录因子E2F-1、P21家族蛋白等，CyclinA1可以与细胞周期蛋白依赖性蛋白质激酶2形成复合物，引起E2F-1的磷酸化，调节细胞周周期〔7,8〕。CyclinE由395个氨基酸残基组成，于G1晚期出现，其能促进G1/S时相转换，G1期缩短，使肿瘤繁殖时对生长因子的需要量明显减少，增强其增生的作用。CyclinE可以与CDK1、CDK3相结合发挥生物学作用〔9,10〕。PTEN是较为经典的肿瘤抑制基因，具有磷酸酶的生物学作用，可以引起细胞内第二信使磷脂酰肌醇(3,4,5)-三磷酸(PIP3)形成去磷酸化的作用，促进细胞凋亡，阻止细胞周期的进程，抑制肿瘤形成和肿瘤细胞的繁殖〔11,12〕。

本研究结果提示CyclinA1和CyclinE高表达及PTEN低表达是促进结直肠癌形成和进展的重要因素。CyclinA1和CyclinE表达升高时可以引起肿瘤细胞的繁殖。也有研究认为CyclinA1和CyclinE是P53下游的一个靶位，能有效诱导细胞多倍体的形成，减少细胞凋亡，促进肿瘤细胞的活化〔13,14〕。本文结果提示CyclinA1、CyclinE和PTEN直接促进肿瘤细胞的增殖，引起肿瘤细胞的生长，肿瘤细胞体积明显增大，肿瘤趋于活跃状态〔15,16〕。本文提示CyclinA1、CyclinE二者可能对肿瘤的侵袭和脉管浸润有一定的促进作用。也有观点认为CyclinA1、CyclinE在肿瘤进展中的调控作用是通过P27的来实现的，进而促进细胞分化、介导细胞黏附及调控细胞凋亡〔17,18〕。本文提示CyclinA1和CyclinE二者在肿瘤进展中的作用具有协同效应。PTEN在肿瘤中的作用是去磷酸化作用形成的，其在结直肠癌中与CyclinA1和CyclinE并不具有协同效应〔19〕，其具体机制有待更多实验来证实。

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