凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1及其受体在急性冠脉综合征早期诊断中的应用

陈红伟 李彦明 李彦章

(新乡市中心医院心内科，河南 新乡 453000)

凝集素样氧化低密度脂蛋白受体(LOX)-1是目前动脉粥样硬化疾病研究最热门的蛋白，Pirillo等〔1,2〕研究发现，LOX-1可以被某些蛋白水解酶及炎性因子裂解为可溶性LOX-1并释放入血，可作为早期诊断急性心肌梗死(AMI)的一个指标。Inoue等〔3,4〕研究发现，在反映低密度脂蛋白(LDL)致动脉粥样硬化的作用方面，包含载脂蛋白(Apo)B的LOX-1配体(LAB)指标更优，而且LAB在反映LDL致动脉粥样硬化作用方面的效果优于氧化LDL(ox-LDL)、LDL或氧化脂类。Misaka等〔5〕将血清中LAB和可溶性LOX(sLOX)-1两个指标结合，建立指标LOX-1 Index，在急性冠脉综合征(ACS)患者早期诊断中比sLOX-1更具有优势〔6〕。本文探讨冠状循环和体循环LOX-1 Index在ACS病人早期诊断中的作用。

1 材料与方法

1.1研究对象 2013年1～12月因典型胸痛来河南大学淮河医院心内科住院治疗的患者。根据美国心脏病协会/欧洲心脏病协会(ACC/ESC)的诊断标准〔7〕和排除标准〔①入院前进行过心肺复苏的ACS病人；②入院前3个月内有明显的炎性疾病(感染性疾病、风湿性疾病、发热、自身免疫性疾病、肌病及肌炎进展期等)、脑血管疾病或其他严重的心脏病；③入院前3个月内服用过抗生素及炎症抑制药；④合并肿瘤、肝肾及其他器官功能不全；⑤入院前3个月有外科手术史，AMI病人经静脉溶栓及急诊介入治疗术后病情危重者〕，最终纳入ACS 50例及临床确诊为稳定型心绞痛(EAP)50例。ACS组平均年龄为(61.92±7.63)岁；EAP组平均年龄为(62.20±6.16)岁，ACS和EAP组男性构成比分别为66%和58%且ACS和EAP组高血压(84% vs 90%)、糖尿病(48% vs 52%)、血脂异常(66% vs 74%)、肥胖(28% vs 40%)和吸烟率(62% vs 54%)差异无统计学意义(P>0.05)。本研究得到了河南大学淮河医院伦理委员会的批准，研究对象均知情同意。

1.2资料收集 病人入院后，详细记录冠心病家族史、身高、体重、吸烟史、高血压史、糖尿病史及血脂异常等资料信息。同时根据病情，ACS患者行急诊冠状动脉造影(CAG)，EAP患者行择期CAG后行经皮冠状动脉介入(PCI)。

1.3标本采集 所有患者行PCI前即刻采集外周静脉血5 ml(体循环)，然后根据冠状血管病变部位在PCI前采集冠状动脉病变处血液5 ml(冠状循环)，上述采集到的血液立即处理，放于-80℃冰箱内保存待测。检测指标包括sLOX-1、LAB等。参照Misaka等〔5〕建立的LOX-1 Index计算方法(LOX-1 Index=LAB × sLOX-1)。

1.4主要仪器及试剂 医用低速离心机(上海卢湘仪离心机仪器有限公司TDZ5-WS)、电热恒温培养箱〔常州润华电器有限公司(DHP-9012)〕、全自动酶标读数仪(美国Bio-RAD255)、全自动生化分析仪(日本日立7600)、全自动酶联免疫分析仪〔贝克曼库尔特公司(UniCel DxI 800)〕、384孔检测微孔板(上海百赛生物技术有限公司)、sLOX-1试剂盒(美国R&D公司)、磷酸冲洗液(PBS)、牛血清蛋白(BSA)、HEPES缓冲液、乙二胺四乙酸(EDTA)、四甲基联苯胺(TMB)均购自上海百赛生物技术有限公司。

1.5指标测定 采用抗体酶联免疫夹心法检测sLOX-1浓度，根据购买试剂盒说明书规范操作，用全自动酶标读数仪在450 nm波长下测定OD值，用6个标准孔测量值绘制标准曲线，通过标准计算样品中sLOX-1浓度。根据购买的试剂盒说明进行规范操作，用全自动酶标读数仪在450 nm波长下测定OD值，用6个标准孔测量值绘制标准曲线，通过标准计算样品中LAB浓度。以上实验均重复3次，分别取平均值。

1.6统计学分析 应用SPSS16.0统计软件进行t检验、非参数秩和检验和受试者工作特征(ROC)曲线分析及Spearman分析。

2 结 果

2.1体循环和冠状循环血液sLOX-1、LAB及LOX-1 Index水平 ACS和EAP组冠状循环sLOX-1、LAB和LOX-1 Index水平均显著高于体循环；ACS组冠状循环sLOX-1、LAB和LOX-1 Index水平均分别高于EAP组，同时ACS组体循环sLOX-1、LAB和LOX-1 Index水平也均分别高于EAP组(P<0.05)。见表1。

表1 两组体循环和冠状循环sLOX-1、LAB及LOX-1 Index比较

与体循环比较：1)P<0.05；与ACS组比较：2)P<0.05

2.2体循环和冠状循环血液LOX-1 Index水平相关性 ACS患者冠状循环和体循环血液LOX-1 Index呈正相关(Rs=0.98，P<0.05)；EAP患者冠状循环和体循环血液LOX-1 Index呈正相关(Rs=0.96，P<0.05)。

2.3ROC曲线分析LOX-1 Index在ACS早期诊断中的应用 以患者冠状循环或体循环LOX-1 Index 值为目标变量，以患者是否确诊为ACS(1=ACS,0=EAP)为诊断变量，冠状循环和体循环LOX-1 Index值在ACS早期诊断中均具有良好的效果，ROC曲线下面积(AUC)分别为0.87(95%CI:0.81～0.94)和0.79(95%CI:0.71～0.88)，根据ROC曲线图最左上角点为最佳截断点原则，可以将冠状循环LOX-1 Index值≥347，体循环LOX-1 Index值≥305作为ACS早期诊断的截断点。

3 讨 论

LOX-1是在牛的主动脉内皮细胞内发现的〔8〕。LOX-1与ox-LDL特异性结合，促使血液循环的单核细胞转至内皮下，促进平滑肌细胞和巨噬细胞吞噬脂质，生成泡沫细胞〔9〕。LOX-1可诱导血管平滑肌细胞凋亡，并通过二磷酸腺苷抑制剂抑制其诱导的血小板聚集〔10，11〕，参与动脉粥样硬化从早期到后期的全过程。Murase等〔12〕发现，LOX-1可以被某些蛋白水解酶及炎性因子裂解为sLOX-1并释放入血，可作为早期诊断AMI的一个指标。

Inoue等〔3〕于2007年建立了血清LAB含量的测量标准，为研究人员从配体角度分析LDL致动脉粥样硬化的生物学活性提供了方法。

目前，临床上用于心肌梗死的辅助诊断的心脏标志物包括肌红蛋白(Myo)、肌钙蛋白(cTn)I、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、sLOX-1等，单一的心脏标志物用于临床检测已经不能满足心内科医生的要求，将多种生物标志物联合检测能够更好地服务于临床。研究表明〔13〕，联合检测CK-MB、Myo、cTnI、hs-CRP对ACS诊断的灵敏度为100.0%，特异度为92.7%，显著高于4种指标的单独诊断效率。本研究提示ACS患者冠状动脉血管病变过程中，LOX-1 Index比sLOX-1和LAB更具优势〔3，14〕，是一个ACS早期诊断的更全面综合指标。本研究提示冠状循环和体循环血液LOX-1 Index值在ACS早期诊断中均有良好的效果，这与Kobayashi等〔3,6〕研究结果一致。

本研究为患者做PCI时采集冠状动脉病变部位的血液来代表冠状循环，改进了Misaka等〔5〕采集冠状静脉窦血液来反映冠状循环的方法，减少了患者的痛苦，提高了依从性。虽然该方法采集的血液在反映冠状循环的代表性不如冠状静脉窦血液，但本研究的结论与日本学者的结果一致，并找出了该方法采集血液中LOX-1 Index在ACS早期诊断的临界值，所以通过采集冠状动脉病变部位的血液来代表冠状循环仍具有良好的可靠性。但本研究具有一些局限性，首先由于本课题设计属于探索性研究，样本量相对较少；其次是研究对象纳入时间跨度较长，患者就诊时间和表现差异较大，存在选择性偏倚。

1Pirillo A,Catapano AL.Soluble lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor-1 as a biochemical marker for atherosclerosis related diseases〔J〕.Dis Markers,2013;35(5):413-8.

2郭瑞霞,张 晓,朱记法,等.急性冠脉综合征患者血清可溶性血凝素氧化低密度脂蛋白受体-1和胆红素表达水平的临床意义〔J〕.中国老年学杂志,2014;34(7):1929-30.

3Inoue N,Okamura T,Kokubo Y,etal.LOX index,a novel predictive biochemical marker for coronary heart disease and stroke〔J〕.Clin Chem,2010;56(4):550-8.

4Okamura T,Sekikawa A,Sawamura T,etal.Series:clinical study from Japan and its reflections;LOX-1 ligrands containing apolipoprotein B and carotid intima media thickness in middle aged community dwelling us Caucasian and Japanese men〔J〕.Nihon Naika Gakkai Zasshi,2014;103(1):173-80.

5Misaka T,Suzuki S,Sakamoto N,etal.Significance of soluble lectin like oxidized LDL receptor-1 level in systemic and coronary circulation in acute coronary syndrome〔J〕.Biomed Res Int,2014;2014(649185):1-7.

6Kobayashi N,Takano M,Hata N,etal.Soluable lectin-like oxidized LDL receptor-1(sLOX-1)as a valuable diagnostic marker for rupture of thin-cap fibroatheroma:verification by optical coherence tomography〔J〕.Int J Cardiol,2013;168(4):3217-23.

7Zhang YC,Tang Y,Chen Y,etal.Oxidized low density lipoprotein and C-reactive protein have combined utility for better predicting prognosis after acute coronary syndrome〔J〕.Cell Biochem Biophys,2014;68(2):379-85.

8Sawamura T,Kume N,Aoyama T,etal.An endothelial receptor for oxidized low-density lipoprotein〔J〕.Nature,1997;386(6620):73-7.

9Thakkar S,Wang X,Khaidakov M,etal.Structure based design targeted at LOX-1,a receptor for oxidized low density lipoprotein〔J〕.Sci Rep,2015;5:16740.

10Stancel N,Chen CC,Ke LY,etal.Interplay between CRP,atherogenic LDL,and LOX-1 and its potential role in the pathogenesis of atherosclerosis〔J〕.Clin Chem,2016;62(2):320-7.

11Chu CS,Wang YC,Lu LS,etal.Eletronegative low density lipoprotein increases C-reactive protein expression in vascular endothelial cells through the LOX-1 receptor〔J〕.PLoS One,2013;8(8):e70533.

12Murase T,kume N.Identification of soluble forms of lectin-like oxidized LDL receptor-1〔J〕.Arterioscler Thromb Vasc Biol,2000;20(3):715-20.

13Sabatine MS,Morrow DA,Gibson CM,etal.Multimarker approach to risk stratification in non-ST elevation acute coronary syndromes:simultaneous assessment of troponin I,C-reactive protein,and B-type natriuretic peptide〔J〕.Circulation,2002;105(15):1760-3.

14Sawamura T,Wakabayashi I,Okamura T.LOX-1 in atherosclerotic disease〔J〕.Clin Chim Acta,2015;440:157-63.