赛鸽感染新城疫的诊断及抗体水平检测*
2018-02-19李婷婷刘华栋陆冰洋唐娟王彩先丁树荣詹丽娥
李婷婷,刘华栋,陆冰洋,唐娟,王彩先,丁树荣,詹丽娥
(山西省农业科学院畜牧兽医研究所 太原 030032)
鸽新城疫又称鸽I型副粘病毒病或鸽瘟,是由鸽I型副粘病毒(Pigeon Paramyxovirus 1,PPMV-I)引起的一种急性、热性、高度接触性传染病。鸽新城疫与鸡新城疫的病原和临床症状十分相似,PPMV-I传播迅速,主要通过呼吸道和消化道传播,一年四季均可发生,不同年龄、品种的鸽都易感,发病率100%,死亡率80%以上。主要临床表现为胃肠道出血、严重腹泻和神经症状。鸽群一旦感染PPMV-I后,其神经症状将严重影响赛鸽的飞行功能,使赛鸽失去比赛的资格。鸽新城疫对养鸽业造成巨大威胁和损失,是养鸽业重点防控的传染病之一。
2018年7月下旬,山西省忻州市某赛鸽公棚从一养殖户处收340羽赛鸽,其中部分赛鸽陆续出现精神不振、采食量减少、饮水量增加、拉黄绿色水样稀粪、扭颈、斜翅等症状,5d开始出现死亡,养殖户紧急前来就诊。为了及时查明该病发生的原因,减少对养殖户的损失,经过流行病学、临床症状、病理剖检、PCR鉴定和抗体检测等综合诊断,确诊为感染鸽新城疫。
1 发病情况
发病初期病鸽精神不振、羽毛蓬乱无光泽、食欲减退、饮水增加,部分病鸽呼噜、咳嗽、呼吸困难,排黄绿色水样稀便。后期个别鸽呈现神经症状,头颈向背后扭曲、不能站立、双翅下垂。
表1 鸽新城疫抗体效价统计表
剖检病变主要集中在消化道,腺胃乳头肿胀、出血,腺胃与肌胃交界处出血;十二指肠黏膜出血、水肿,盲肠扁桃体肿大、出血。呼吸道有卡他性炎症,喉头、气管中有浆液性或卡他性渗出物,气管出血。
2 实验室诊断
2.1 抗体检测
鸽群中随机采集21份血液进行抗体检测,按照《新城疫诊断技术》(GB/T16550—2008)规定方法进行血凝抑制试验(HI),检测待检赛鸽血清的新城疫抗体效价。HI抗体效价≥5log2时免疫效果良好,判定为合格。检测结果由表1可知,该赛鸽公棚的新城疫抗体效价水平低且离散度大,21份被检样品中仅有11份样品HI抗体效价≥5log2,免疫合格率仅为52.4%。
2.2 RT-PCR鉴定
根据该赛鸽公棚鸽群疫病流行特征,结合发病情况、剖检病变及血清抗体检测结果,采集病死鸽的肺脏、脾脏组织,使用购自北京世纪元亨生物技术有限公司的“新城疫病毒通用型RT-PCR检测试剂盒”检测PPMV-I。
2.2.1 病毒RNA的提取 取肺脏、脾脏组织各1g,剪碎混匀后取0.05g混合物,加入1.5mL生理盐水进行研磨。8,000rpm离心2min后,取上清液100μL于新的离心管中,按照试剂盒使用说明书,经过裂解、吸附、洗涤、洗脱后得到模板RNA备用。
2.2.2 RT-PCR扩增及电泳 取无菌的PCR反应管,根据反应配置体系,分别加入RT-PCR反应液、酶混合液和模板RNA,混合均匀成20μL体系,置于荧光PCR仪中。PCR扩增程序为:42℃ 45min,94℃ 3min;循环94℃ 30s,55℃30s,72℃ 30s,共35次;最后72℃延伸7min。PCR扩增产物在110V电压下使用1.5%的琼脂糖凝胶电泳检测,结果见图1。
由图1可见,阳性对照出现362bp扩增带。被检测样品1与阳性对照一致,在362bp出现扩增带,可判定为鸽I型副粘病毒阳性。
3 结果与诊断
通过PCR鉴定,结合临床症状、病理剖检变化和抗体水平检测得出,该赛鸽公棚感染鸽新城疫。
4 防治措施
4.1 赛鸽公棚采取的紧急措施
针对试验结果,迅速将发病鸽群进行隔离饲养,淘汰出现神经症状的重病鸽,无害化处理所有病死鸽、淘汰鸽及其粪便和饲料。并应用1/100浓度的百毒杀和1/25浓度的碘伏两种消毒剂,每天轮流对养殖环境和养殖工具进行全面彻底的喷洒消毒,用以杀灭细菌,抑制病毒增殖,防治疫情扩散和蔓延。待病情控制后,改为1周消毒1次。
同时,全棚赛鸽紧急接种新城疫克隆C30株疫苗2倍剂量点眼。发病鸽群饲料中添加丁胺卡那霉素,饮水中交替添加黄芪多糖及电解多维,以提高鸽群免疫力,预防继发感染,使用至疫情得到控制为止。
经过该方案治疗5d后,鸽群没有再出现死亡现象,临床症状较轻的赛鸽症状也逐渐减轻。11d后全群采食正常,精神状态良好,疫情得到控制,鸽群基本痊愈。
4.2 平日预防工作
赛鸽公棚要做好平时卫生防疫工作。定期对鸽舍、饲养场地和饲养用具开展消毒。新收赛鸽应作好检疫工作,并隔离观察2周以上。饲养人员进出鸽场必须严格消毒,饲料和饮水也应定期检测。
建立合理的免疫程序和免疫监测制度。选择正确的疫苗,并定期检测鸽群的新城疫抗体水平,对于抗体水平较低或者抗体水平参差不齐的情况要及时补种。
5 讨论
随着我国养鸽业不断扩展,鸽I型副粘病毒病在全国多地都有流行发生,肉鸽、信鸽和赛鸽等各类鸽子均可感染发病,不同年龄的鸽都有感染性,而乳鸽的易感性最高,其发病率和死亡率都很高。新城疫在世界上曾有过四次大流行,其中第三次大流行始于20世纪70年代末的中东地区,后迅速传播到欧洲并造成20世纪80年代初的大流行,主要为嗜神经型,而这次流行正是由种鸽传播引起的。鸽Ⅰ型副粘病毒被认为是经典新城疫病毒的变异株,最近几年,该病毒在全世界范围内很多国家分离到,说明自从20世纪80年代以来该病毒已经在全世界范围内长期存在和流行[1]。因此,鸽Ⅰ型副粘病毒的流行对养鸽业甚至养禽业都有巨大的威胁和损失,成为危害禽类的一种最主要的疾病。
赛鸽公棚的养殖模式与种鸽或肉鸽场不同,每年春季或秋季会从不同养殖户收购幼鸽,集中饲养、训练后参加秋季或春季的比赛。多数赛鸽养殖户养殖的种鸽或幼鸽免疫工作不到位,抗体水平参差不齐,造成鸽新城疫潜伏感染严重。本试验中该赛鸽公棚不关注免疫效果,在收购幼鸽后用LaSota灭活疫苗免疫鸽群后未检测抗体效价,从而造成免疫失败,未能起到有效的保护作用。因此,赛鸽公棚需严格执行合理的免疫程序和免疫监测制度,定期检测鸽群的新城疫抗体水平。
图1 新城疫RT-PCR检测结果
目前,鸽新城疫的防治主要依靠免疫接种疫苗,但是在实际应用中,大量养殖户用鸡新城疫疫苗免疫鸽群。虽然,鸽副粘病毒病和鸡新城疫病毒存在着很高的交叉反应,但是有研究表明,现有的鸡新城疫疫苗株并不能有效的保护鸽群免受PPMV-I的感染。因此,实际应用中亟待研发专用的鸽新城疫疫苗,有效防治鸽新城疫感染。■