基于基层实验条件的几种兽医血清学试验方法改进

2018-02-15贺鹏程

畜牧兽医杂志 2018年6期

贺鹏程

(甘肃省庄浪县畜牧兽医局，甘肃庄浪 744699)

近年来，随着基层兽医实验室建设的不断推进，常用血清学检测技术得到普遍推广和应用，其在动物疫病防控中的作用日渐凸显。但是，受制于基层兽医实验室经费投入不足，实验条件简陋，实验耗材、诊断试剂不能充足供应，实验人员岗位变动频繁，技术良莠不齐，试剂耗材价格居高不下，检测数量不断增加等因素，在兽医血清学检测技术许多环节都日益完善的今天，如何在诸多不利条件下更加准确快速的开展血清学试验，仍有不断努力的空间。

小反刍兽疫、包虫病、狂犬病等重大动物疫病的监测和免疫抗体检测。在基层兽医实验室上述几种试验常用且质量可靠的诊断试剂主要采用青岛某中心、兰州某研究所、哈尔滨某研究所生产或提供技术支撑公司生产。

笔者在严格遵守上述几种试验相关技术标准如《高致病性禽流感诊断技术》(GB/T18936-2003)、《口蹄疫诊断技术》(GB/T 18935-2003)和试剂盒说明书及所在实验室《质量手册》等基础上，本着节约诊断试剂，提高检测效率，保证检测质量，快速完成检测任务的目的，根据多年实验室工作经验，对原有试验方法的某个点或部分做了适应性修改。本文现将这些修改逐一介绍，以供兽医实验室技术人员、诊断试剂生产单位和相关标准修订做参考。

1 布病虎红平板凝集试验

1.1 修改结果判定方法

将原受检血清在4 min内判定结果，改为4 min±20s范围内判定结果。

1.2 修改目的及效果

明确了肉眼观察的时间节点，减少了误判，全程观察时间由240 s缩短到40 s,提高了可操作性，提升了检测效率。

1.3 适用条件

适用于动物布病筛查。

2 布病试管凝集试验(SAT)

2.1 修改血清稀释方法

将原羊、猪血清稀释方法，第一管加1.15 mL稀释液，加血清0.1 mL混匀后再弃去0.25 mL，再对倍稀释至第4管。改为，第一管加0.92 mL稀释液，加血清0.08 mL混匀，再对倍稀释至第4管；将原牛、马、鹿、骆驼血清稀释方法，第一管加1.2 mL稀释液，加血清0.05 mL混匀后再弃去0.25 mL，再对倍稀释至第4管。改为，第一管加0.96 mL稀释液，加血清0.04 mL混匀，再对倍稀释至第4管。

2.2 修改目的及效果

减少了第1管混匀后的弃去环节，减少了反复加减多次操作造成的误差，提高了检测效率，原稀释比例不变。

2.3 适用条件

普遍适用，样品数量较多时尤适用。

3 正向间接血凝试验(IHA)

3.1 修改加样方案

将96孔微量反应板从中间划线一分为二，第一孔原来加血清和稀释液各50μL优化为加血清25 μL、稀释液75μl从而使稀释度由第一孔的1∶2变为1∶4，依次做2倍系列稀释至第6孔，第6孔的稀释度由1∶64变为1∶128，大于1∶32的判定标准两个稀释度，反应板划线右侧同左侧。

3.2 修改目的及效果

使原来每个反应板检8份样品增加到16份样品，节约了试剂，提高了检测效率，满足定性判定要求，不影响判定结果。

3.3 适用条件

该项修改满足抗体检测结果≥1∶32判为阳性等只做定性判定，对最终效价不做确认的大量样本普检。抗原等试剂不足时尤适用。

4 血凝和血凝试验(HA-HI)

4.1 修改加样方案

将微量反应板向右旋转90°加样，原来横向2倍系列稀释至第10孔，11、12孔为对照，变为横向2倍系列稀释至第6孔，第7、8孔为对照，使每板由可检8份样品增加至12份。

4.2 修改目的及效果

使原来每个反应板检8份样品增加到12份样品，节约了诊断试剂，提高了检测效率，满足定性判定要求，不影响判定结果。

4.3 适用条件

该项修改满足抗体检测结果≥1∶16判为阳性等只做定性判定，对最终效价不做确认的大量样本普检。抗原等试剂不足时尤适用。

5 酶联免疫吸附试验(间接ELISA)

5.1 修改结果判定方法

将原来结果计算公式“样品效价=(OD样品-OD阴性)÷(OD阳性-OD阴性)，样品效价>n为阳性(n为常数)”需要逐孔OD值带入公式计算，修改为n值代入公式变换不等式先计算出“临界值OD值”再逐孔样品OD值比较大小。

5.2 修改目的及效果

减少了大量重复计算，降低了计算过程中出错的几率，大幅提高了判定速度，样品数量较多时效果尤为明显。

5.3 适用条件

只适用于使用上述公式或类似方法进行结果计算的间接ELISA试剂盒，不适用阳性、阴性、空白对照的计算。

6 酶联免疫吸附试验(液相阻断ELISA)

6.1 新建1板检测80份加样方案

取两块稀释板，第一块1～10列每孔加稀释液150 μL，第二块稀释板1～10列每孔加稀释液50 μL，再在第一块1～10列逐孔依次加被检血清10 μL(稀释比例为1∶16)，混匀后取50 μL转移到第二块稀释板(稀释比例为1∶32)，混匀后弃去50 μL，加病毒抗原每孔50 μL(稀释比例为1∶64)。