孔雀支原体病的临床诊断和实验室检疫

2018-02-14程秀荀

畜牧兽医科技信息 2018年6期

程秀荀

（河南省临颍动物疫病预防控制中心，河南漯河 462600）

禽支原体病又称禽支原体，其病原主要为鸡毒支原体（MG），滑液支原体（MS）和火鸡支原体（MM）；而引起孔雀感染致病的禽源支原体通常为鸡毒支原体。

Delaplane和stuart（1943）首次将由鸡毒支原体引起的疾病命名为慢性呼吸道病（RD），并现仍在应用。孔雀支原体病的临床特征为潜伏期较长，多呈慢性经过，尚可有部分隐性病例。以呼吸困难、气管锣音等呼吸道症状表现为主。孔雀支原体病的病理组织学变化特征为呼吸道组织戮膜单核细胞浸润，黏液腺及淋巴组织增生。

1 流行病学

世界多数国家均有鸡毒支原体感染禽类的报道，并已从包括孔雀、环颈雉、鹧鸪、鹌鹑、鸵鸟、珍珠鸡、花尾棒鸡和鸽等30余种禽体中检出了病原。带菌禽和病禽是本病的主要传染源，亦可通过被污染的饲料、饮水、器具及其他环境进行传播，种蛋、甚至雄鸟的精液也可能造成孔雀后代发病；另外，人和其他外来动物也可成为本病的传播媒介。自然感染以呼吸道、消化道和经卵传递为主要感染途径。孔雀在寒冷舍饲养时，舍内温差大，饲养密度过高，通风不良及营养失调等因素，可成为本病流行的诱因。

2 临床症状

通常有较长的潜伏期，相邻各自独立鸟舍间的鸟只病情传播也无明显特征，甚至有隔舍进行传播或与病鸟相邻鸟舍不发生新病例的情况存在。病鸟表现精神不振，采食减少，育成鸟生长发育迟缓，成鸟体重下降，并伴有体温上升等全身症状。典型的呼吸道症状，可出现重度的呼吸困难，病鸟张口、伸颈，当呼吸道分泌物增加时，出现咳嗽、气管锣音，病鸟频频甩头试图排出黏液，使呼吸更加困难，这时可在病鸟口角处附有透明、混带有气泡、粘稠的液体。

3 病理学检疫

3.1 病理剖检变化

喉头及气管黏膜充血、水肿、附有黏稠渗出物，有时气管黏膜面出现局灶性的增厚区。严重病例炎症可蔓延至支气管和肺。气囊病变在孔雀支原体病有较高的发生率，表现胸气囊透明度下降、呈混浊半透明状，气囊壁粗糙、增厚，附有丝状或斑点状纤维素性或干酪样渗出物；病程较长时，在腹气囊也可见到相似的病变。

3.2 病理组织学变化

孔雀支原体病以呼吸道和气囊病变为主。气管黏膜白细胞浸润，上皮细胞间出现大量杯状细胞，固有膜的血管充盈，支气管黏膜下层中腺泡和排泄管扩张，内充满黏液，黏液中混有数量不等的白细胞、脱落的被复上皮和黏液腺及其排泄管的上皮细胞。病变气管表现纤维素性炎症，以纤维素析出和迅速凝固为特征，随着炎症的发展，纤维素继续增厚，形成较为致密的灰白色、点或片状物体覆于气囊表面，这种纤维素样物质也可深入于气囊组织内部，和气囊壁联系在一起。4病原学检疫

4.1 病料采集和处理

可用棉拭从其口咽、气管、泄露殖腔中取样；病死鸟可从气管、肺和气囊病变组织中采集样品。用于分离培养禽源支原体的培养基可选用经修改的Frey氏固体和液体培养基，液体培养基配方：基础液80mL（配法：NaCl 2.5g，KCl 0.2g，Mg2SO4·7H2O，Na2HPO40.8g，KH2PO40.05g；葡萄糖 5g，乳蛋白水解物2.5g，依次溶于500mL蒸馏水中，115℃高压灭菌20min）；猪血清 12mL，L- 半胱氨酸（1%）1mL；辅酶Ⅰ（1%）1mL，精氨酸（5%）0.2mL。半胱氨酸与辅酶Ⅰ预先混合10min后，加入其他成分，调pH值至7.6。固体培养基配方：在上述基础液中加入1%纯化琼脂，121℃高压蒸气中灭菌15min，冷至56℃时加入其他成分。

4.2 镜检

将液体培养物在37℃环境中，培养5～7d，经5000转/min离心30min，取沉淀物一滴作涂片，干燥后用甲醇固定2～3min。用pH7.2的PBS将姬姆萨染液稀释20倍，染色3h，再用PBS冲洗，干后用丙酮脱色10s，自然干燥后在油镜下观察。通常情况下，首次培养检出率较低，可每隔3～5d传代一次，连续传数代，以增加分离的数量。禽支原体有多种生长形态，除球形、球杆形基本形状外，尚有丝形、环形等多种形状。该种微生物姬姆萨着色良好，呈革兰氏弱阴性。

4.3 菌落观察

将固体培养物置于37℃，潮湿环境中培养3～5d，进行观察。典型的禽支原体菌落较小，呈圆形、光滑、湿润、中央致密隆起、边缘整齐，具凸起乳头状、稍平煎蛋状或脐状外观；液体培养物可表现轻度混浊。根据鸡毒支原体和滑液支原体菌落具有吸附红细胞的特性可用红细胞吸附试验与非病原支原体菌落相鉴别。取5mL成鸡抗凝血液，用2～3倍生理盐稀释，2000转/min离心10min，弃上清液，再加生理盐水重复离心冲洗2～3次，制成0.25%鸡红细胞悬液。取该悬液15～20mL，滴加于菌落表面，室温下作用15～20min后，用生理盐水反复冲洗2～3次，用低倍镜观察，如菌落表面吸满红细胞，则判为阳性。