浅析蛋白芯片在兽药残留中的应用

2018-02-13

畜禽业 2018年5期

(佛山市顺德区北滘镇动物防疫检疫站，广东佛山 528311)

1 材料与方法

1.1 材料

(1)仪器与设备。芯片扫描仪，型号：晶芯EcoScan-100，厂家：北京博奥生物有限公司。离心机，型号：GL-20G-Ⅱ，厂家：上海安亭科学仪器厂。气相色谱-质谱联用仪，型号：TRACEDSQ，厂家：菲尼根。高效液相色谱仪，2695配紫外检测器型，厂家：Waters公司。

(2)试剂。ELISA检测试剂盒、克仑特罗残留检测试剂盒以及磺胺二甲基嘧啶残留检测试剂盒，这3种试剂盒均由r2Biopharm公司生产。蛋白芯片兽药残留检测试剂盒，则由北京博奥生物芯片有限公司生产。纯度为99.6%的克仑特罗和纯度为99.0%的链霉素的标准品，由中国药品生物制品检定所提供。纯度为99.0%的磺胺二甲基嘧啶标准品，由美国的SIGMA公司生产。纯度为100.1%的恩诺沙星标准品，由中国兽医药品监察所提供。

(3)实验用菌。枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株。

1.2 方法

(1)试剂盒的灵敏度评价。①芯片反应：按兽药残留蛋白芯片检测试剂盒说明书进行[1]。②标准曲线溶液的配制：依照实验要求，将各种药物标准品按步骤配制成标准溶液。③扫描及数据处理：芯片反应完毕，进行图像扫描和数据处理；依照校正后的荧光信号强度对各标准品溶液的药物浓度作标准曲线；求出每种待测药物的IC50(荧光信号强度下降一半的兽药浓度)值。

(2)试剂盒的特异性评价。①芯片反应：按兽药残留蛋白芯片检测试剂盒说明书进行。②标准曲线溶液的配制：依照实验要求，将各种药物标准品按步骤配制成标准溶液。③扫描及数据处理：同上，反应完毕后，进行图像的扫描以及相关数据的处理；然后，做标准品曲线；最终求出IC50值。

1.3 样品前处理

①蛋白质芯片检测试剂盒的样品前处理按照兽药残留蛋白芯片检测试剂盒说明书进行。②磺胺二甲嘧啶(ELISA法)和磺胺二甲嘧啶(HPLC法)：均按国家所颁布的文献标准进行。③链霉素残留测定：称取粉碎后的样品适量，加入一定pH 1.5的磷酸缓冲液，离心分离后取上清液；再用10 moL/L NaOH调节溶液pH至8.5，再离心后取上清液作待检测样液[2]。④克仑特罗(EL ISA法)、克仑特罗(GC-MS法)和恩诺沙星(HPLC法)：按照国家所颁布的相关文献进行。