牛初乳对轮状病毒的抵抗效果

2018-02-13张万有

畜牧兽医科技信息 2018年11期

张万有

（青海省海东市乐都区农业综合执法大队，青海海东 810799）

轮状病毒是哺乳类动物中一种常见的感染性病毒，不仅感染动物，也能引发婴幼儿及成人的急性腹泻，严重腹泻的患者还会出现脱水等严重不良反应，对身体造成极大的危害。为了提高临床治疗的效果，本文通过实验验证了牛初乳对轮状病毒的抵抗效果。

1 牛初乳抗轮状病毒概况

轮状病毒是双链核糖核酸病毒，由11个RNA片段组成，形状主要以球形为主，其直径为60～80nm，具有双层核衣壳，内层主要呈现放射状排列，形似车轮的线条，故称轮状病毒。牛初乳是奶牛分娩后3d内所产生的乳汁，乳汁中含有许多免疫因子，包括五大免疫球蛋白（Ig）、乳铁蛋白、特异性抗体等，免疫球蛋白能够与病原微生物、毒素等抗原结合，促进婴幼儿免疫系统的发育，抑制病毒感染人体。现代《保健食品检验与评价技术规范》也证实牛初乳具有增加免疫力、改善生长发育能力以及改善胃肠道功能的作用。

2 实验方法

2.1 试验材料

（1）试验组选用过滤除菌的牛初乳，将其分装，放入4℃的冰箱中备用；（2）对照组选用利巴韦林片作为对照药物（阳性）。（3）细胞主要为MA-104细胞株；（4）病毒主要为WA株轮状病毒；（5）试验动物选取轮状病毒阴性实验小鼠，雌雄小鼠放在同一笼中让其自然受孕以及分娩。

2.2 细胞培养

将选取的MA-104细胞置于水浴中融化（37℃），然后离心大约2～3min，将冻存液倒去，放入细胞培养液，标记后将其放入培养箱中培养24h，如果细胞正常生长，继续培养24h，待其生长充满培养时，将培养液舍弃，加入磷酸缓冲盐溶液清洗2～3次，然后加入0.25%的胰酶消化，静置一段时间后如果细胞脱落，则需将胰酶析出再加入培养液，待其混合均匀后测定细胞的数量及浓度，加入96或48孔板中留存。加入磷酸缓冲盐溶液清洗2～3次，将轮状病毒加入培养瓶中，待其完全留存在瓶中后将轮状病毒液体舍弃，然后将2%血清DMEM（4mL）加入到培养瓶中，标记后将其放入培养箱中，每日观察细胞是否出现变化以及异常，待MA-104细胞皆表现为阳性，然后将培养瓶置于-80℃冰箱中冻存（20～30min），然后-80℃～-20℃～4℃逐层解冻，反复冻融3次，然后离心大约20min左右，取上层清液为病毒液，分装后将其放入-80℃保存。2%DMEM将病毒稀释,浓度包括0.1/0.01/0.001……10-10，然后将每个浓度的病毒液接种于96孔中，每个孔100μL，每个浓度三个孔，并设置空白对照以及正常细胞对照组，将其放入培养箱中培养2h，将病毒液舍弃，然后再在每孔中加入2%DMEM维持细胞液200μL，放入培养箱，隔断时间就需观察，到最低稀释度的病毒孔无变化后，对出现的CPE细胞孔数计数，计算病毒的滴度。

2.3 动物试验

将实验动物分为6组，分别为正常组、模型组（接种病毒组）、阳性对照组（利巴韦林）、牛初乳高剂量组、牛初乳中剂量组、牛初乳联合利巴韦林组。分娩后5d的小鼠通过接种病毒液，正常组接种正常细胞培养液。正常组和模型组给予生理盐水，其余几组给予不同浓度的药液，连续给药1周，每天观察小鼠的粪便、脱水、体重等情况。将小鼠处死后将其幽门到回盲部小肠取出，固定制片进行显微镜下病理检测。

3 研究结果

在出生5d后测定小鼠的体重没有明显差异性，感染病毒后，正常组体重增长未出现异常；模型组（接种病毒组）的体重增长慢，在1～4d中，牛初乳中剂量组体重变化与模型组（接种病毒组）的体重增长相似，在第5天体重明显增长；牛初乳高剂量组、牛初乳联合利巴韦林组以及阳性对照组（利巴韦林），在第7天体重增长同正常组。

正常组无腹泻发生，模型组在感染后的3～4d出现严重腹泻、甚至出现脱水现象，牛初乳高剂量组、牛初乳联合利巴韦林组以及阳性对照组（利巴韦林）虽出现腹泻，但后期腹泻程度逐渐减轻；中剂量组出现腹泻，且无明显改善，腹泻持续加重。

正常细胞为单层梭形细胞，被病毒感染后的小肠制片中可见，细胞出现褶皱、细胞内颗粒物显著增加，有部分细胞甚至出现溶解现象。