GRIN1、GRIN2B基因多态性与氯胺酮依赖的关联研究＊

蓝晓嫦，刘玉平，刘恩益，周超，王怀坤，段炼，丁毅

（广州市惠爱医院，广州医科大学附属脑科医院，广州510370）

氯胺酮俗称“K粉”，是苯环利啶(N-1-phenycyclohexypieridine，PCP)的衍生物，属非竞争性N-甲基-D-天门冬氨酸（NMDA）受体拮抗剂，是目前我国流行最广泛的三大新型毒品之一[1]。有文献报道，在氯胺酮滥用者中，12.7%的人经历过与氯胺酮相关的急性中毒，13.5%发生了攻击他人行为，40.3%和5.5%的人出现相关的性冲动和性暴力行为，12.1%经历过不同程度的精神障碍[2]，长期滥用氯胺酮还会导致一系列的并发症，包括药物依赖、记忆力损害、腹痛、肝功能障碍等[3]，这些都为个人身心健康、社会治安和公共卫生造成危害。尽管氯胺酮滥用带来的个人、社会和公共卫生问题越来越严重，但是目前对其成瘾的相关机制和相应的处理对策并未阐明。本研究拟通过遗传学研究探讨NMDAR1和NMDAR2B受体基因多态性是否与氯胺酮成瘾的发生存在关联，拟在此研究基础上探索出能够准确判定和检测氯胺酮成瘾心理渴求变化的生物学标记。

1 研究对象和方法

1.1 研究对象

从2013年7月～2017年5月期间在广州市惠爱医院物质依赖科和广州市白云自愿戒毒医院住院治疗的氯胺酮依赖者。入组标准：（1）汉族，18～50岁，采用DSM-IV-TR半结构式会谈药物依赖诊断量表（SCIDAD），符合DSM-Ⅳ-TR中关于氯胺酮依赖的临床诊断标准，（2）尿液滥用物质筛查氯胺酮阳性，（3）由本人签署书面知情同意，排除标准：（1）合并SCID中其他严重精神疾病；（2）伴有严重的躯体疾病者；（3）合并有其它物质滥用者（如传统型毒品、酒精或其它种类新型毒品等，尼古丁除外）。正常对照组入组标准：（1）无精神疾病史及精神活性物质滥用史，（2）尿滥用物质筛查阴性，（3）由本人签署书面知情同意书；排除标准：（1）符合SCID中任何精神疾病诊断或有相关家族史者，（2）同患者组。本方案经我院伦理委员会审批、备案。所有入组对象签署书面知情同意。

1.2 血液标本采集及DNA检测

所有入组患者均于入组次日早上7：00～7：30空腹抽取肘部静脉血液样本5ml（EDTA抗凝管），同期收集匹配的正常对照组血液样本，送我院实验中心进行离心（3000转，离心10分钟）分离出血细胞和血清，标本存放在实验中心-70的冰箱。收集完所有标本后用冰盒保存统一外送至上海瑞立生物科技有限公司，委托该公司的专业检测技术人员采用聚合酶链式反应(PCR)及限制性片段长度多态性(RFLP)技术对样本进行基因分型鉴定。

1.3 统计学方法

采用SPSS18.0 进行数据管理。用直接计数法计算等位基因及基因型频率，卡方检验检测等位基因频率是否符合Hardy—Weinberg平衡定律，且比较患者组和对照组基因型分布的差异。采用独立样本t检验比较组间年龄，x2检验比较性别差异、组间基因型及等位基因的频率。显著性水平取α=0.05。

2 结果

2.1 本研究共入组了113例符合氯胺酮依赖的患者，其中男性105例，女性8例；同时入组136例健康对照者，其中男性123例，女性13例；两组受试者性别经卡方检验差异无统计学意义（x2=0.49，p=0.48）。患者组平均年龄（28.80±6.49）岁；对照组平均年龄（26.55±6.14）岁，两组受试者年龄经t检验差异无统计学意义（p≥0.05）。

2.2 H-W平衡检验 经检验，患者组和对照组GRIN1、GRIN2B等位基因频率分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律（P＞0.05），观察值和理论值之间差异无显著性，符合Hardy-Weinberg遗传平衡法则，表明这些样本能够代表一般人群。

2.3 经卡方检验，GRIN1基因型及等位基因在氯胺酮依赖组与健康对照组间的分布差异无统计学意义（p≥0.05）。（见表1）。

表1 GRIN1基因型及等位基因在氯胺酮依赖组与对照组间的分布比较

表2 GRIN2B基因型及等位基因在氯胺酮依赖组与对照组间的分布比较

2.4 经卡方检验，GRIN2B基因型及等位基因频率在氯胺酮依赖组与健康对照组间的分布差异无统计学意义（p≥0.05）。（见表2）。

3 讨论

药物成瘾是一种以中枢神经系统适应性或可塑性改变为基础的慢性、复发性的脑疾病，其特征表现为强制性的觅药行为和高复吸率；成瘾者具有个体易感性差异[4]。氯胺酮是现阶段最常用的几种新型毒品之一，尽管目前国内外对氯胺酮的滥用、流行及其危害都十分关注，但对氯胺酮成瘾性的研究报道较少，尤其对氯胺酮成瘾的分子生物学基础缺乏相应的研究。

有研究表明成瘾和学习记忆都依赖于一些共同的神经生物学机制，由相同的神经营养因子调节，并具有某些共同的细胞内信号转导过程以诱导特定基因的表达，都伴随着谷氨酸能突触可塑性的改变[5-6]。因此，谷氨酸能系统，尤其是N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体在药物成瘾的研究中受到了越来越多的重视[7]。从行为学实验来看，似乎NMDA受体可介导减轻或抑制吗啡等诱导的动物药物刺激辨别等行为以及能减轻阿片类的躯体依赖症状[8]。另一方面分子生物学实验也进一步证实了NMDA 受体亚单位(包括NMDAR1亚单位结合一个或几个不同的NMDAR2(NR2A-2D)亚单位以及NMDAR3A亚单位)参与了药物成瘾的形成。研究发现，NMDAR1亚单位参与了吗啡的躯体依赖症状，NMDAR2B 亚单位参与了吗啡的奖赏效应。侧脑室微注射NMDAR1的反义寡核苷酸能显著减轻纳洛酮促发吗啡依赖的大鼠撤药症状。Narita 用免疫组织化学的方法发现吗啡诱导小鼠形成条件性位置偏爱后，其大脑皮质区、海马和边缘前脑区NMDAR2B亚单位表达显著增加[9]。

至此，尽管关于NMDA受体在物质成瘾或渴求的研究很多，但是对于本身作用于NMDA受体的氯胺酮成瘾与NMDA受体间的关系，目前却还没有相关研究报道。本研究通过病例对照研究方法探讨了氯胺酮成瘾者NMDA受体亚基NMDA1基因(GRIN1 )和NMDA2B基因(GRIN2B)多态性，研究结果显示氯胺酮依赖组与健康对照组间GRIN1、GRIN2B基因型和等位基因频率分布差异无统计学意义，提示GRIN1、GRIN2B基因多态性与氯胺酮依赖可能无关联性。但是本文样本数不大，基因的变异本身受到多方面的影响，如种族、环境、人群迁移等，而成瘾性疾病是一种复杂的慢性脑病，鉴于其病因学和治疗上的意义，将来还是有必要继续深入进行氯胺酮成瘾的遗传学方面研究，今后可加大样本量对两者的关联性做进一步研究。

致谢：衷心感谢广州市白云自愿戒毒医院戒毒科病房医生护士给予的支持和帮助。

[1]高小平.对制造新型毒品类似物的发现、认识及对策的思考[J]．中国药物依赖性杂志，2008, 17(5)：383-385.

[2]连智, 刘志民, 刘锐克, 等。我国部分地区氯胺酮滥用流行病学调查[J]．中国药物依赖性杂志,2005,14(4): 280-283.

[3]Morgan CJ, Curran HV. Ketamine use：a review[J]．Addiction, 2012,107(1)：27-38.

[4]郝伟, 赵敏, 李锦, 等. 成瘾医学:理论与实践.[ M].第1版 北京:人民卫生出版社,2016:4 -5.

[5]Helmuth L. Addiction．Beyond the pleasure principle[J]．Science,2001,294(5544):983- 984.

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[7]周双桨, 王学义. NMDA受体在精神活性物质依赖中的作用[J]. 神经疾病与精神卫生, 2010, 10(4): 415-418.

[8]Popik P, Mamczarz J, Fraczek M, et al. Inhibition of reinforcing effects of morphine and naloxone-precipitated opioid withdrawal by novel glycine site and uncompetitive NMDA receptor antagonists[J]. Neuropharmacology,1998, 37(8): 1033-1042.

[9]Narita M, Aoki T, Suzuki T. Molecular evidence for the involvement of NR2B subunit containing N-methyl-D-aspartate receptors in the development of morphine-induced place preference[J]. Neuroscience,2000,101(3): 601-606.