iASPP表达与鼻咽癌患者临床病理学特征及预后的关系*

焦红叶，薛 飞，程 友

(南京军区总医院耳鼻喉科，江苏南京 210000)

鼻咽癌是耳鼻咽喉科较为常见的恶性肿瘤，且近5年发病率逐年上升[1]。鼻咽癌易早期发生淋巴结或血行转移，预后较差[2]。 p53基因是重要的抗癌基因，对肿瘤细胞的发生、增殖、分化及凋亡起调控作用，p53凋亡刺激蛋白抑制因子(inhibitory member of the ASPP family，iASPP) 可以发挥拮抗p53的生物学效应，在促进癌细胞异常持续性增殖过程中发挥重要作用，也提高了癌细胞的侵袭能力[3-6]。因此，iASPP可为鼻咽癌的早期诊断及预后评估提供实验室参考指标。为探讨iASPP在鼻咽癌诊断中的价值，本研究分析了鼻咽癌患者iASPP表达水平，报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2010年1月至2012年12月在本院经病理学证实为鼻咽癌的133例患者，同时选取本院病理科既往收集的30例患者鼻咽部慢性黏膜炎活组织蜡块作为对照组。鼻咽癌组133例，其中男89例、女44例，年龄39～75岁，平均(53.3±12.5)岁，病理学分型：Ⅰ型6例、Ⅱ型13例、Ⅲ型114例，TNM分期：Ⅰ期13例、Ⅱ期33例、Ⅲ期57例、Ⅳ期30例，92例患者获得随访。对照组30例，其中男20例、女10例，年龄33～70岁，平均(51.4±15.0)岁。纳入标准：(1)鼻咽癌的诊断依据中华医学会头颈外科学分会制订的诊断标准[6]；(2)年龄18～79岁；(3)所有患者均经过病理活检或术后病理学证实；(4)获取组织学标本前，患者无鼻咽癌放化疗史；(5)患者一般资料、临床资料收集完整。排除标准：(1)具有放化疗史；(2)复发性鼻咽癌患者；(3)各项临床资料不完整，无法纳入统计的患者。两组患者年龄、性别比较，差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2方法

1.2.1免疫组织化学 采用石蜡切片(切片厚度3 mm)脱蜡至水，切片厚度3 mm，3%过氧化氢(H2O2)室温孵育5 min；去离子水冲洗3次，每次3 min，采用10%牛奶蛋白(1 g蛋白加入100 mL纯水)封闭，室温孵育 5 min；加入iASPP抗体(鼠来源，南京碧云天生物科技有限公司)，37 ℃孵育2 h；磷酸缓冲盐溶液(PBS)冲洗3次，每次5 min，滴加辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗(兔来源，购自罗氏检测公司)，37 ℃ 孵育30 min；PBS冲洗3次，每次5 min，加入硝基四氮唑蓝/5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸(NBT/BCIP)显色5 min，复染，脱水，透明，封片，镜下观察。OLIPICS电子显微镜购自上海精密仪器有限公司，配套试剂购自南京泰康生物科技有限公司。

1.2.2判断标准 阳性着色的iASPP蛋白定位于细胞质、细胞核，显色为黄色、褐色，(1)依据显色强度：无色(0分)、淡黄色(1分)、棕黄色(2分)、褐色及黑色(3分)；(2)依据阳性细胞所占比例： <5%为0分、≥5%～≤25%为1分、 >25%～≤50%为2分、>50%～≤75%为3分、>75%为4分。两种积分之和，0～1分为阴性(-)；2分为弱阳性(+)；3～5分为阳性(++)、6～7分为强阳性(+++)。

2 结 果

2.1两组标本中iASPP蛋白阳性表达率比较 鼻咽癌组织中iASPP蛋白阳性表达率(72.18%)高于对照组的20.00%(χ2=28.461，P<0.01)，见表1、图1。

表1 两组标本中iASPP蛋白阳性表达率比较(n)

A:鼻咽部慢性黏膜炎组织;B:鼻咽癌组织

图1免疫组织化学染色(×400)

2.2iASPP蛋白表达与鼻咽癌患者临床相关特征的关系 原发肿瘤(T3～T4)、发生淋巴结转移患者iASPP蛋白阳性表达率高于原发肿瘤(T1～T2)、未发生淋巴结转移的患者(P<0.05)，而iASPP表达与患者的年龄、性别、病理学分型、TNM分期无关(P>0.05)，见表2。

表2 iASPP蛋白表达与鼻咽癌患者的临床相关特征的关系[n(%)]

2.3随访结果分析 92例鼻咽癌患者获得随访，其中iASPP蛋白阳性表达患者63例、阴性表达患者29例，iASPP蛋白阳性表达患者的5年生存率(71.43%)与阴性表达患者(86.21%)比较，差异无统计学意义(χ2=2.993，P=0.084)，见图2。

图2 鼻咽癌患者的5年生存函数图

3 讨 论

临床上鼻咽癌早期血行转移率可达25%以上，临床预后较差，5年生存率不足35%[7-8]。恶性肿瘤依靠超声或CT等早期诊断较困难。而通过对鼻咽癌发病过程中相关生物学机制的研究，可以为鼻咽癌患者的早期诊断提供潜在的理论参考指标。

p53/CYC/NOTCH信号通路及p53/HES信号通路的激活，可以促进上游转录调节基因的激活，提高转录增强子或启动子的活性，进而促进癌细胞细胞周期的调控，促进癌细胞凋亡[9-10]。而iASPP通过拮抗性抑制p53受体，进而沉默了p53导致的保护性效应的产生[11]。iASPP对于相关保护性信号通路的抑制，促进了癌细胞的自我增殖，并提高了浸润能力，促进了病情进展[3，12]。已有的研究探讨了iASPP在鼻咽癌患者病灶组织中的异常表达，但缺乏对于iASPP的表达与患者临床病理特征间关系的研究。

本研究发现，在鼻咽癌病灶组织中，iASPP的表达明显上升，表达阳性率高于正常组织，提示iASPP可能参与了鼻咽癌的发生、发展过程。侯文群等[13]和WANG等[14]通过回顾性分析研究了73例患者临床资料，从免疫组织化学结果中可以发现明显的iASPP表达阳性率的上升，且iASPP的阳性率越高，患者的病情越严重、预后越差，这与本研究的结果一致。在发生了淋巴结转移的患者中，iASPP的阳性表达率较高，提示iASPP促进了癌细胞对于淋巴结的浸润。此外，iASPP的表达与鼻咽癌原发灶的范围有关，提示在癌细胞早期浸润或扩张过程中，iASPP的生物活性作用可能较为剧烈，也提示iASPP的表达对于原发部位恶性肿瘤的生物学调控作用较为明显，而对于转移或淋巴结转移等部位的调控作用较弱。

综上所述，鼻咽癌患者癌组织中iASPP的表达上调，与患者的淋巴结转移、原发肿瘤的范围有关，但本研究对于iASPP在鼻咽癌患者中血清学诊断价值分析不足，存在一定局限性。

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