高效液相色谱仪基本原理、应用及故障排除

俞兆程

（武威市环境保护监测站 甘肃武威 733000）

1 高效液相色谱仪基本原理

高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相,通过高压泵进入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分按照极性大小顺序被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。

2 高效液相色谱仪的应用

液相色谱法的分离机理是基于混合物中各组分对两相亲和力的差别。根据固定相的不同，可分为液固色谱、液液色谱和键合相色谱。高效液相色谱法与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相。由于高效液相色谱法具有分离效能高、选择性好、灵敏度高、分析速度快、适用范围广、色谱柱可反复使用的特点，在我国各项科学研究和检测工作当中都有广泛的应用。为保证高效液相色谱仪在物质研究工作中的作用效果，在完成物质溶液制备工作之后，还需要采取常规的方法对所配置的溶液实施简单检测，明确溶液的基本物理性质，配合适当的预处理技术开展溶液色谱检测工作。与单一物质检测设备相比，高效液相色谱仪具备分辨率高、反应速度快和色谱柱利用性强等优势，能够弥补其他仪器设备在物质检测时潜藏的弊端，使得其在我国生物化学工程、食品工程和环境现状分析等事业中有着广泛的应用。

3 高效液相色谱仪常见故障排除

3.1 流动相气泡故障

对流动相气泡故障来说，出现这一故障的原因在于流动相滤头长时间浸泡在水或乙酸铵等缓冲液当中，造成过滤器中霉菌大量繁殖。如果不能采取适当措施控制这一现状，必然导致过滤器堵塞，流动相中出现气泡的可能性大大提升。针对于这一故障，在高效液相色谱仪使用之前，应将其过滤器浸泡在5%的硝酸溶液当中，并利用超声破进行过滤器清晰。消除过滤器中污垢，从而减少流动相中气泡含量，保证流动相在物质溶液检测过程中的作用效果。

3.2 柱压过高故障

色谱柱作为高效液相色谱仪中重要组成部分，保证色谱柱内部压强的稳定性，不仅能够提升高效液相色谱仪运行效果，还能够改善高效液相色谱仪运行弊端，使得物质溶液检测工作顺利开展。但是该仪器设备在长时间运行过程中很有可能出现色谱柱内部压强过高的问题，造成基线漂移，检测准确性下降，影响溶液检测试剂作用效果。而且高效液相色谱仪出现柱压过高故障的原因主要有缓冲液盐分沉积和样品污染沉积这两方面，这就应针对各项原因制定分类解决措施，避免柱压过高这一故障延伸[2]。对于缓冲液盐分沉积来说，应利用40℃—50℃的纯水对色谱柱进行全面冲洗，尽可能保证色谱柱中压强降到规定的范围内。对于样品污染沉积来说，不仅需要利用纯水冲洗色谱柱，还需要应用适当浓度的甲醇溶液对色谱柱进行二次冲洗，控制样品污染对高效液相色谱仪中色谱柱产生的影响，使得色谱柱在相应检测中的作用效果得以提升。

3.3 物质溶液色谱检测效果不佳

众所周知，高效液相色谱仪的作用为物质溶液色谱检测。因此，在对相应溶液进行综合检测工作时，就应保证高效液相色谱仪中各个零部件处于相互配合的状态，减少高效液相色谱仪在运行时出现问题的可能，确保物质溶液检测工作顺利开展。但是在完成物质溶液综合检测工作之后，还有可能出现色谱检测效果不佳这一弊端，而出现这一问题的原因主要表现在色谱柱污染和柱头填料塌陷这两方面上。对于色谱柱污染来说，需利用纯水对色谱柱进行反响冲洗，之后采用甲醇进行物质冲洗。重复进行这两步工作，在解决色谱柱污染问题的同时，避免物质溶液检测之后出现色谱效果不佳等问题[3]。对于柱头填料塌陷这一故障来说，应及时清除色谱柱中遭受污染的填料，并在新填料装入时辅助一定浓度的甲醇溶液，同时保证色谱柱中填料的密实性，有效控制仪器设备检测效果不佳对高效液相色谱仪作用效果产生的影响。

3.4 检测器峰型不规则

在对物质容易实施综合检测时，可能会因为高效液相色谱仪运行状态和检测器作用效果不佳而出现检测器峰型不规则的问题。如果不能对这一故障实施有效排除，必然导致物质溶液综合检测效果变差，对于溶液检测真实性也有极大的影响。从检测器峰型不规则的角度出发，了解到高效液相色谱仪在物质溶液检测时出现的不规则峰型主要有基线漂移、无峰、峰变宽、双峰和前沿峰等问题。而且不同奉行的诱发原因也存在很大的差异。这就应从各类检测器峰型不规则的原因制定针对性排除措施，控制外在因素对检测器峰型产生的影响。在排除检测器峰型不规则问题的同时，一以保证高效液相色谱仪在物质溶液综合检测中的作用效果得以彰显。

结语

综上所述，了解到高效液相色谱仪在我国各项研究工程中起到非常重要的作用。为此就应加强高效液相色谱仪研究力度，以保证物质监测工作人员对这一仪器设备有一个全面的掌握。对于高效液相色谱仪在运行过程中出现的故障来说，还应结合高效液相色谱仪运行模式和其他方面因素制定故障排除策略，确保高效液相色谱仪在各项研究工程中的作用效果有进一步提高。