体外受精胚胎细胞数量和碎片率对囊胚形成的影响

李娜+韦静

[摘要] 目的 探讨体外受精胚胎细胞数量和碎片比例对囊胚形成的影响。 方法 选择2016年1～10月柳州市工人医院妇产科200例患者在体外受精后3 d得到的胚胎。根据囊胚数将其分为2～3c组（2～3个细胞），4c组（4个细胞），5c组（5个细胞），6c组（6个细胞），7c组（7个细胞），8c组（8个细胞），9c组（9个细胞），10c组（10个细胞），11c组（11个细胞），12c组（12个细胞），≥13c组（≥13个细胞）。分析胚胎移植时细胞数及碎片等级（碎片等级为1级，碎片率≤5%；2级：碎片率>5%～20%；3级：碎片率>20%～30%；4级：碎片率>30%）对囊胚质量的影响。 结果 碎片等级1～2级的囊胚与3～4级的囊胚中，均为8 c组有效囊胚形成率与优质囊胚形成率最高（χ2=200.760、119.162、243.532、136.395，均P < 0.01）。 结论 在体外受精胚胎移植中，碎片等级1～2级与3～4级的均为8c组囊胚质量最好，此结果对于指导选取高质量胚胎具有参考价值。

[关键词] 体外受精；胚胎细胞数量；碎片比例；囊胚形成

[中图分类号] R711.6 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2017）12（c）-0093-05

[Abstract] Objective To investigate the effects of the number of in vitro fertilized embryos and the ratio of fragments on blastocyst formation. Methods From January to October 2016， 200 patients who underwent in vitro fertilization in Liuzhou Worker′s Hospital were given embryos 3 days after completion of fertilization， grouping of embryos according to the number of blastocysts， they were divided into 2-3c group （2-3 cells）， 4c group （4 cells）， 5c group （5 cells）， 6c group （6 cells）， 7c group （7 cells）， 8c group （8 cells）， 9c group （9 cells）， 10c group （10 cells）， 11c group （11 cells）， 12c group （12 cells）， more than 13c group （more than 13 cells）. Grading operations on fragments. The effect of cell number and fragmentation level （the fragmentation rate of grade 1 is less than 5%； the fragmentation rate of grade 2 is >5%-20%； the fragmentation rate of stage 3 is >20%-30%； and the fragmentation rate of grade 4 is higher than 30%.） on the quality of blastocysts during embryo transfer was analyzed. Results The effective blastocyst formation rate and the high quality blastocyst formation rate in 8c group were the highest， in the 1-2 grade fragment level of the blastula and the 3-4 fragment level of the blastula（χ2=200.760， 119.162， 243.532， 136.395， all P < 0.01）. Conclusion In in vitro fertilization embryo transfer， the level of grade 1-2 and grade 3-4 is all 8c group， and the quality of blastocyst is the best. This result has a reference value for guiding the selection of high-quality embryos.

[Key words] In vitro fertilization； Embryo cell number； Fragment ratio； Blastocyst formation

体外受精胚胎移植是精子与卵细胞在体外进行受精，受精卵体外培养一段时间，将早期的胚胎移植到女性子宫内继续成长发育，待胎儿发育成熟后正常分娩的辅助生殖技术[1-3]。临床上多采取多个早期胚胎移植，但是提高移植成功率的同时导致多胎儿概率增加[4-5]。随着生殖医学技术的发展，体外受精胚胎移植技术也获得了长足的进步，如何保证移植胚胎的正常发育，有效避免多胎的发生是目前研究的重点[6-8]。如何有效检测早期胚胎的质量以及提高移植的成功率，是体外受精胚胎移植技术的主要问题所在。近期的相关临床研究发现，囊胚技术的应用可以解决上述问题，但是由于囊胚技术体外培养时间较长，如何有效检测评估囊胚质量，是胚胎移植成功的主要影响因素[9]。柳州市工人医院（以下简称“我院”）妇产科通过测定胚胎的细胞数以及碎片数量对評估囊胚的发育潜能在临床应用中取得了较好临床效果，笔者对我院妇产科200例体外受精胚胎移植患者的临床资料进行分析，现报道如下：endprint

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2016年1～10月我院妇产科200例体外受精胚胎移植患者的临床资料为研究对象，年龄21～34岁，平均年龄（27.51±5.52）岁，全部患者均签订我院医学伦理委员会通过的科学实验对象知情同意书。纳入标准：患者年龄20～35岁，顺利完成体外受精过程、受精卵在前3 d内发育正常，观察到有效囊胚形成的患者胚胎。排除标准：通过卵胞浆内单精子显微注射技术（ICSI）进行受精的胚胎；补救ICSI周期性的胚胎；第5日处于桑葚状态即被移植或者冷冻的胚胎；受精成功胚胎未能良好发育的患者，移植胚胎超过卵裂期胚胎的患者；随访失败或中途退出的患者。

1.2 研究方法

患者在月经来潮的第2天在皮下注射激动剂达必佳（Ferring GmbH，批号：H20140123）0.1 mg/d，在注射后第3天根据患者的年龄、基础卵泡数量和基础促卵泡激素水平给予促性腺激素，然后根據卵泡大小和激素水平调整用药的剂量。患者利用阴道B超对卵泡发育情况进行监测，当有1～2个卵泡直径超过18 mm时，给患者肌肉注射绒毛膜促性腺激素（HCG，丽珠医药集团股份有限公司）10 000 U，在36 h之后经超声引导下行卵泡穿刺术，在直视显微镜下选取卵丘复合物，至于培养液中进行常规培养2～4 h后进行体外受精，获取受精卵后洗涤受精卵并至于G1培养液中，观察受精卵分裂以及早期胚胎的发育情况，待第3天时胚胎不做移植或冷冻，所有胚胎均用于囊胚培养。

1.3 观察指标

统计全部患者第3日胚胎移植时细胞数以及碎片数（碎片等级），对囊胚质量分析。囊胚质量标准参考文献[10]。根据第3日时胚胎细胞数对所培养的囊胚进行分组。胚胎细胞数2～3个细胞（2～3c组），4个细胞（4c组），5个细胞（5c组），6个细胞（6c组），7个细胞（7c组），8个细胞（8c组），9个细胞（9c组），10个细胞（10c组），11个细胞（11c组），12个细胞（12c组），≥13个细胞（≥13c组）。碎片等级[10]，1级：碎片率≤5%；2级：碎片率>5%～20%；3级：碎片率>20%～30%；4级：碎片率>30%。

1.4 质量控制

所有的胚胎评估均由3名有经验的胚胎工作者进行同时评估，如果3人的意见不能统一，则利用无记名投票，少数服从多数的方式决定。

1.5 统计学方法

采用SPSS 19.0统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验；计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 总体情况

在本次研究中共纳入了3709个培养3 d的受精卵，其中碎片等级1～2级的为1788个，碎片等级3～4级的为1921个。

2.2 碎片等级1～2级的囊胚形成情况比较

碎片等级1～2级的囊胚质量研究中，8c细胞组有效囊胚形成率（48.92%）、优质囊胚形成率较高（32.26%），其次分别为7c组、9c组早期胚胎，其囊胚质量仅次于8c组，也具有较好的有效囊胚形成率、优质囊胚形成率，各组之间的比较结果差异有高度统计学意义（χ2=200.760、119.162，均P < 0.01）。见表1～3。

2.3 碎片等级3～4级的囊胚形成情况

碎片等级3～4级的囊胚质量研究中，8c细胞组有效囊胚形成率（52.43%）、优质囊胚形成率较高（34.59%），其次分别为9c组、10c组早期胚胎，其囊胚质量仅次于8c组，也具有较好的有效囊胚形成率、优质囊胚形成率，各组之间的比较结果差异有高度统计学意义（χ2=243.532、136.395，均P < 0.01）。见表4～6。

3 讨论

辅助生殖技术的应用中，如何有效地保证胎儿的健康以及正常发育，是目前研究重点，移植胚胎的质量是保证辅助生殖成功的关键[11-13]。在大量的临床报道中可以发现，辅助生殖技术失败的受孕者，其主要原因是胚胎质量较差。临床上多采用检测早期胚胎的细胞数以及碎片比例来选取健康、成功率高的胚胎进行移植。

碎片是受精卵体外发育时的一种常见现象，可能是受精卵对外界环境刺激的毒性反应，细胞凋亡的数量越多，导致碎片生成的比例越高[14]。因此，根据碎片的多少进行分级，常用的为碎片比例四级分级，碎片比例高的胚胎活性低，植入后存活率低，而且导致的畸胎率也较高[15]。

在本次研究中笔者通过研究不同组别细胞数的早期胚胎囊胚发育情况后发现，在碎片等级为1～2级的胚胎中，8c细胞组的早期胚胎，其囊胚质量好，有效囊胚形成率、优质囊胚形成率均较高，植入后的发育成功率应该较高，其次在无8c数的胚胎时可以选取囊胚质量次级的7c组胚胎。在对碎片等级3～4级的囊胚质量研究中，本研究发现，8c细胞组的早期胚胎，仍然是有效囊胚形成率、优质囊胚形成率较高的早期胚胎，但是无8c组细胞时，其次选取组别为9c组早期胚胎，其囊胚质量仅次于8c组。

由于辅助生殖技术其技术含量较高，体外受精以及体外培养时间长、培养过程复杂，在实际应用中，各种因素均可能影响胚胎的发育以及囊胚的质量[15-16]。为提高受孕成功率以及保证胎儿的安全，必须早期对植入胚胎进行科学有效的评估。通过分析早期胚胎的细胞数以及胚胎碎片等级，作为常用的无创性胚胎质量评估手段，在其应用中可以对早期胚胎进行质量评估[17]。本研究选取的研究对象数量有限，而且研究的时间就截止到受精卵培养后的3 d，在受精卵置入子宫后，是否成功妊娠以及妊娠的结局并没有进行跟踪调查，所以本研究分析结果尚需要进一步的验证完善，但对比既往类似研究可以发现本研究结果具有一定的科学性，在临床中具有一定的参考意义。endprint

综上所述，在体外受精胚胎移植技术中，通过分析检测胚胎细胞数量以及碎片分级可以有效分析囊胚形成的质量，细胞数量与有效胚囊形成率，优质胚囊形成率之间的数据具有相关性，其中碎片等级1～2级的以8c组囊胚质量最好，其次为7c组，碎片等级3～4级的以8c组囊胚质量最好，其次为9细胞组。

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（收稿日期：2017-09-30 本文编辑：任 念）endprint