试析冬瓜子中胡芦巴碱的含量测定

官检发+陈应

[摘要] 目的 构建冬瓜子中C7H7NO2的含量测定方法。方法 研究对象购置于2017年5月。通过 Diamonsil C18柱（4.6×250 mm 5 μm）；柱温为25℃；流动相为CH3OH-H2O-0.05% Sodium Dodecyl Sulfonate （5∶15∶80）；流动相流速1 mL/min；检测波长265 nm；进样量10 μL。结果 Linear relation analysis：25.2～201.6 μL/mL，线性关系优异；Precision measurement：计算相对标准偏差为（1.15±0.12）%，即为设备精密度优异；stability test：相对标准偏差为（0.94±0.05）%，实验结果证实，对照品溶液在72 h中稳定性优异；Repeatability test：相对标准偏差为（1.68±0.11）%，即该方法的重复性优异。结论 文中的测定方法及结果为评价冬瓜子药材的质量奠定了良好的基础。

[关键词] 冬瓜子；胡芦巴碱；含量；测定

[中图分类号] R5 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2017）11（a）-0166-03

[Abstract] Objective To construct a measurement method of content of trigonelline in semen benincasae. Methods The research object was purchased on May 2017， Diamonsil C18 column （4.6×250 mm 5 μm）； column temperature： 25℃， mobile phase CH3OH-H2O-0.05% Sodium Dodecyl Sulfonate （5∶15∶80）； current velocity； 1 mL/min， test wave length： 265 nm， the sample size： 10 uL. Results Linear relation was excellent at 25.2～201.6 μL/mL， and the relative standard deviation （1.15±0.12）%， namely the excellent equipment precision， relative standard deviation（0.94±0.05）%， and the experimental results proved that the solution in the control group had an excellent stability and the relative standard deviation（1.68±0.11）%， and the repeatability of the method was excellent. Conclusion The measurement method and result in paper lay a good foundation for the evaluation of quality of medicinal materials of semen benincasae.

[Key words] Semen benincasae； Trigonelline； Content； Measurement

眾所周知，冬瓜子即为葫芦科植物Benincasa hispida干燥成熟种子，早在《神农本草经》中就有所记载，具有较长的药用历史[1]。冬瓜子具有清肺祛痰、排毒利湿的作用[2]。该文章研究对象购置于2017年5月。以试析冬瓜子中胡芦巴碱（C7H7NO2）的含量测定作为切入点，在此基础上予以深入的探究，相关内容如下所述。

1 实验材料

10批样品通过鉴定为葫芦科植物Benincasa的成熟种子；C7H7NO2参照品（批号110883-200502，含量测定用）。检测装置为Agilent 1200 高效液相色谱设备；常州市超声设备有限公司KQ -500DE型超声波清洗装置（40 Hz，500 W）；使用SartoriusBP211D型电子称。CH3OH为色谱纯，H2O为高纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法及结果

2.1 方法

色谱条件：Diamonsil C18柱（4.6×250 mm 5 μm）；柱温为25℃；流动相为CH3OH-H2O-0.05% Sodium Dodecyl Sulfonate （5∶15∶80）；流动相流速1 mL/min ；检测波长265 nm；进样量10 μL [3]。

对照品制备：通过天平称取C7H7NO2对照品，加CH3OH制成1 mL含 0.25 mg的溶液作为对照品溶液[4]。

供试品溶液制备：选4 g冬瓜子粗粉，放置在250 mL塞锥形瓶内，加C5H12 C6H14 C7H16 （60～90℃）60 mL，通过30 min的超声处理，在此基础上予以静置处理，弃去C5H12 C6H14 C7H16，等药渣完全干透，加入60 mLCH3OH，再通过60 min回流，放置一段时间等到完全冷却后称得重量，通过CH3OH填补损失的重量，最后予以摇匀及滤过处理。精密量取30 mL滤液，在此基础上进行浓缩处理，残渣通过CH3OH溶解，放置于1 mL量瓶内，加CH3OH至刻度，予以摇匀处理，用0.5 μm微孔滤膜进行滤过，作为供试品溶液[5]。

Linear relation analysis：分别吸取C7H7NO2对照品溶液1、2、4、6、8 mL，分别放到10 mL量瓶内，放置CH3OH稀释到刻度，予以摇匀处理，取上述对照品溶液各10 μL，注入液相色谱设备，根据以上色谱条件予以检验，记录峰值。endprint

2.2 结果

Linear relation analysis：以C7H7NO2的量为横轴（M），峰值即纵轴（A），在此基础上绘制指标曲线，A=1492 M+ 38.251（r=0.999 8），结果25.2～201.6 μg/mL线性关系优异。见图1。

Precision measurement：择取50 μg/mL的对照品溶液，反复予以6次进样，通过上述色谱条件予以检测，记录峰值，计算相对标准偏差为（1.15±0.12）%，即为设备精密度优异。

Stability test：选择同一C7H7NO2对照品溶液，通过上述色谱条件予以检测，在0、2、4、6、8、24、48、72 h予以检测，记录峰值，计算相对指标偏差。相对标准偏差为（0.94±0.05）%，实验结果证实，对照品溶液在72 h中稳定性优异。

Repeatability test：精密称取4 g同一批冬瓜子粗粉6份，根据上述方法制备样品溶液，各予以3次进样，通过上述色谱条件予以检测，在此基础上记录峰值，其相对标准偏差为（1.68±0.11）%，即此方法的重复性优异。

Recovery test：选择9份已知含量的同一批冬瓜子粗粉各2 g，予以称定，分别加入对照品溶液，根据上述方式制备供试品溶液。通过以上色谱条件予以检验，计算回收率，结果见表1。

Determination of sample：选择差异批次的冬瓜子药材粗粉，经精密称定，根据上述方法制备样品溶液，通过上述色谱条件予以检测，结果见表2。

3 讨论

张志学等构建了测定C7H7NO2的亲水相互作用色谱-超高效液相色谱联用分析法，质量浓度线性区间为0.12～100 μg/mL，定量限为0.12 μg/mL，有效峰面积为（4 066.83±1 244.41），生物碱的相对生物利用率超过112%。该模式具有便捷、精准、重复率优异的特性。设备联用分析法是把色谱设备作为质谱仪的进样介质，质谱设备作为色谱仪的检测装置，把色谱设备的高分辨性和质谱仪的高鉴别度进行有机的结合，将两种设备的优势整合在一起。现阶段，液相色谱串联质谱法已成为C7H7NO2定量分析中十分常见方式。

袁明华构建了电泳分析模式，对天然药葫芦巴内的3种组分C7H7NO2、以及 NA予以分离及检测。结果显示，毛细管电泳在工作电压为20 kW，电泳介质浓度10 mol/L、酸碱值为7.8的硼砂-KH2PO4体系，（C2H4O）nC14H22O年-100与N，N-DMF体积分数均为0.25%的条件下，可以在7 min内实现对3种有效成分的检测。C7H7NO2峰面积与质量饱和度线性关系优异，线性范围在3.0～200 μg/mL，检测限为0.7、1.0、0.2 μg/mL，峰面积与迁移时间的 RSD：C7H7NO2为3.2%与1.3%，槲皮素为4.8%与0.83%，柚皮素4.3%与1.2% 。

依附于《中国药典》[6]，C7H7NO2含量测定模式，发现C7H7NO2在已有色谱条件下供试品中分离性偏低，因此对流动相的比例予以调整，进而得到有效的色谱峰值，分离性优异的流动相，就是CH3OH-H2O-0.05% Sodium Dodecyl Sulfonate （5∶15∶80）[7]。

该次测定的10批样品，4批为单边，6批即双边。前者C7H7NO2的平均含量为0.004 875%，而后者胡芦巴碱的平均含量为0.005 483%。双边样品C7H7NO2平均含量要超过单边样品C7H7NO2含量。为冬瓜子内具有一定的油脂，而且C7H7NO2的理化性質无法溶于低极性溶剂，因此通过C5H12 C6H14 C7H16予以超声处理进而去除油脂[8]。对差异化的提取溶剂予以分析，发现CH3OH提取具有较高的有效性，分别对提取方式、提取时间以及CH3OH用量予以分析，最后明确CH3OH 60 mL，回流提取1 h。

C7H7NO2生物分布与来源相对广泛，且具有一定的药理作用，没有显著的不良反应，可有效治疗糖尿病、癌症及高脂血症，其开发前景十分广阔。差异化的基质对分析物产生的影响也各不相同，减少基质影响，增加分析精准度，即未来检测所亟待解决的一个问题。在实践环节，要依附于实际的检测需要，择取相适应的检测方式，对样品可以快速、精准的予以检测及分析。伴随分离技术、检测方式的多元化发展，C7H7NO2的检测模式在未将得到进一步的完善。

[参考文献]

[1] 刘衡，姚春芬，陈英，等.HPLC法测定不同种天南星中葫芦巴碱的含量[J].中国现代药物应用，2014，4（18）：177-178.

[2] 吴延丽，李微，林锋，等.大庆产胡芦巴种子中生物碱及总黄酮成分的研究[J].哈尔滨医科大学学报，2015，41（4）：385-387.

[3] 杨云，孙维英，弓建红，等.胡芦巴碱含量和盐胡芦巴炮制工艺的相关性研究[J].河南科学，2013，25（3）：398-400.

[4] 刘广学，尚明英，李辉，等.胡芦巴药材中胡芦巴碱的提取方法及其含量测定[J].中国药品标准，2015，6（4）：11-14.

[5] 郑祥菊.青海地区胡芦巴中胡芦巴碱含量分析[J].安徽农业科学，2014，36（21）：9328-9329.

[6] 赵怀清，曲燕，王学娅，等.不同产地胡芦巴种子中胡芦巴碱的含量测定[J].中国药学杂志，2012，37（8）：59-61.

[7] 单保恩，李俊新，张静，等.中药香加皮与其易混品体外抑瘤效果研究[J].癌变.畸变.突变，2015（5）：265-268.

[8] Shailajan S，Menon S，Singh A，et al.A validated RP-HPLC method forquantitation of trigonelline from herbal formulations containing Trigonellafoenum-graecum（L.）seeds[J].Pharm Methods，2016，2（3）：157-160.

（收稿日期：2017-08-02）endprint