孕马血清采集分离操作示范

尹聂生

（新疆生产建设兵团第二师二十一团畜牧中心841111）

孕马血清促性腺激素（PMSG）也叫马绒毛膜促性腺激素，是从怀孕早期的母马血清中提取出的一种促性腺激素。随着近年来不断深入分析高新生物技术，PMSG最开始在动物诱导发情、人畜生殖器官疾患与超数排卵治疗中广泛应用。目前在生物工程技术领域得到应用，如细胞培养、胚胎移植。因此，PMSG市场需求量越来越大，市场生产规模越发不能满足，原材料供应不足占据主导原因。本试验旨在研究孕马血清采集与分离的有效方法，为提取高效价、较高纯度的PMSG成品提供原材料。

1 孕马血清采集与分离工艺流程

1.1 工艺流程

检疫合格的马匹→受孕→确定受孕→试血（效价检测）→采血（采血针头、导引管、采血瓶、血清瓶等灭菌准备）→离心→分离、配制还输液（葡萄糖生理盐水还输液灭菌准备）→血清→加防腐剂、取样检测、无菌试验→入库→马匹休息→进入下次采血。

1.2 具体操作方法

1.2.1 孕马检查

在孕马妊娠40d时进行检查，高峰数值出现在60d时，随后维持到大约第120天开始降低。畜牧技术员需要对准母马妊娠天数进行了解，对马号及妊娠天数进行记录。

1.2.2 试血

采集摸排好妊娠马匹颈静脉血液进行检测。选择ELISA法对血清开展测定以及对效价进行确定，对合格马匹进行编号之后才可以采血。

1.2.3 采血

孕马保定之后对颈部皮肤利用75%酒精棉球檫拭与碘伏进行消毒，找准颈动脉血管，用采血针头插入，将胶管的一端与针头链接，另一端伸入离心瓶中，紧贴瓶壁。离心瓶按1OOOml血液加入20ml20%的枸橼酸钠的比例抗凝，并记下瓶号，瓶盖盖上后倾斜离心瓶大约45°之后进行缓慢摇转，保障注射液全面覆盖离心瓶的内壁；将靠近心端止血钳取出，经采血管流血液进入到离心瓶，接满血后盖上瓶盖；采血过程需要严格消毒，处理采血针头、还输瓶、离心瓶、胶管等器具，避免发生污染。还输瓶、离心瓶编号需要与采血马匹的编号要进行对应，将记录工作做好。

注意事项：（1） 依据1000ml血液融入20ml20%枸橼酸钠进行抗凝，实际上就是建设等渗环境，不会改变血液渗透压，也不会破坏红细胞导致发生溶血。（2）在38℃水浴箱内促使接血瓶中血液进行均匀受热，析出不稳定蛋白，促进离心、析出血清，血清采集之后外观呈现出透亮且黄色的现象。

1.2.4 离心

将接满血的离心瓶按先后顺序放置于38℃水浴箱中，间隔10min进行一次观察，0.5h之后间隔5min进行一次观察，直到开始析出血清时取出；自水浴箱中将离心瓶取出之后放置于离心机中，分离速度为每分钟4000转，进行25～30min的离心，此时黄色透亮的血清大量析出，将血清缓缓倒入加过防腐剂的存储器中迅速封装并置于-2～-8℃的冷库加以保存。

1.2.5 对采过血的马匹进行血球还输

将事先配置好的葡萄糖生理盐水与相对应马匹的血浆置于还输瓶内（配置的量为采血量），将胶管的一端与针头链接，另一端伸入离心瓶中，找准颈动脉血管，将针头刺入并举起还输瓶输完为止。

注意事项：对采集过血的马匹须立即做血球还输能降低损伤马匹血球细胞的程度，减少孕马死亡率，提升采血次数与采血量，提高马匹免疫力、马驹成活率。

1.2.6 采血后管理

马匹休息并加强饲养管理，准备下次采血。

2 采血孕马的管理技术要点

2.1 添加适当精料

采血前后对孕马的饲养管理既要保证孕马本身营养良好，又要兼顾胎儿生长发育、胎儿不流产、分娩顺利。孕马膘度在中上的进行采血，膘度较差的禁止采血。所以，此时对孕马除了加强放牧（农区要多给些优质青干草）以外，还要提供蛋白质含量较高的精料。通过试验研究，采血的孕马要从确定怀孕后就开始添加精料，添加量为2.5kg/d（添加的过多，收益不明显，浪费成本），精料种类为豆粕、玉米和全价料， 其比重为 3∶5∶8。

2.2 采血次数、间隔时间及采血量

通过试验表明，孕马从妊娠40～120d时采血最适。满膘的孕马采血次数可控制在10次，间隔8d采血一次，次采血量控制在5kg；中上膘度的孕马采血次数应控制在8次，间隔10d采血一次，次采血量为4.5kg。这样既可充分发挥和利用采血期间的孕马，使其产生的效益最大化，又可以保护孕马本身及其胎儿不受影响。

2.3 注射适量含铁制剂

为了使孕马在采血后能及时恢复自身血容量，最大限度的恢复自身体况及保护胎儿的生长发育，并不影响下次采血量，孕马除了发挥自身正常的造血功能外，还需人为注射适当的含铁制剂-右旋糖酐铁VB12注射液。孕马在每次采血后，根据孕马膘度情况按照每千克体重肌肉注射0.1～0.12ml右旋糖酐铁VB12注射液，膘度好可提高用量，反之亦然。切忌超量使用，否则产生不良反应带来不必要的损失。