绒毛染色体检测在稽留流产原因探讨中的应用

廖翠 唐晓惠

稽留流产属于妇产科常见病, 还可称之为死胎不下或者过期流产。通常胚胎死亡后依旧在宫腔内稽留, 孕产物常在出现症状后的30～60 d内排出, 但胚胎发育停止后60 d内依旧未自然排出即称之为稽留流产［1］。文献记载, 孕妇出现先兆流产症状或者未出现症状, 仍继续妊娠, 但子宫未长大,逐渐减少, 同时早孕反应消失, 患病原因与遗传因素有一定的关系［2］。为明确稽留流产与绒毛染色体之间的关系, 现就本院2016年1月～2017年12月收集的81例稽留流产患者绒毛组织实施绒毛细胞培养及检测的结果进行分析, 陈述如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2016年1月～2017年12月于本院妇科住院排胎的81例孕早期稽留流产患者作为研究对象, 年龄最小19岁, 最大42岁, 平均年龄(31.60±3.61)岁；孕周最短6周, 最长14周, 平均孕周(8.41±2.59)周；13例初次妊娠, 8例有自然流产史, 7例有稽留流产史；46例合并阴道出血, 出血时间最短1 d, 间断出血时间最长31 d, 平均出血时间(7.15±8.34)d, 35例无阴道出血。

1.2 纳入标准 ①患者存在停经史, 血尿人绒毛膜促性腺激素(HCG)显阳；②经B超检查提示宫腔内能见胚胎样组织或胚芽或空孕囊, 未见胎心；③保留患者知情权, 由其自愿签订同意书；④本研究得到医院伦理委员会批准。

1.3 方法 所选患者住院期间, 均在药流排胎后有菌条件下对其绒毛进行采集, 其后在无菌离心管50 ml中放置, 将适量的无菌生理盐水放入其中, 拧紧盖后密封, 送至实验室检验。本次需对采集到的绒毛组织进行短期培养法或直接法。①短期培养法：于倒置显微镜下对绒毛组织进行挑选, 一般为10～20 mg, 主要选取颜色透明, 乳白色或者白色绒毛, 将其漂洗之后剪碎, 放入离心管(10 ml)中, 每管均加入1 ml 1%胰酶以及8滴酶解液, 放置在37℃水浴5 min, 充分摇匀, 以2000转/min离心10 min, 将上清去除, 加入8 ml的培养液,待其吹打均匀, 再依次加到2个培养瓶(50 ml)中, 放置在CO2培养箱中进行为期1 d的培养, 于倒置显微镜下仔细观察,若能见克隆形则提示能换液, 可继续培养过液。将秋水仙素35 μl加入, 同样在37℃温度下水浴5 min, 去除上清 , 每一瓶中均可加入5 ml 1%枸橼酸钠低渗液, 放置在水浴箱(37℃)中40 min, 加入1 ml预固定液, 即 3∶1的冰醋酸∶甲醇, 在37℃下水浴2 min, 将培养瓶取出, 上清液去除, 每瓶中均加入固定液1.5 ml, 待细胞表面平铺后将上清液去除；每瓶均加入固定液4 ml, 于37℃下水浴20 min, 将上清液去除, 每瓶加入预冷固定液4 ml, 在37℃下水浴10 min；将上清液去除,每瓶加入固定液4 ml, 水浴(37℃)10 min, 去除上清液, 最后制片。②直接方式：首先, 选取10～15 mg的绒毛组织, 将预温比例为1∶1的8 ml氯化钠混合低渗液与0.4%柠檬酸钠加入, 在37℃下水浴25 min, 将固定液1 ml加入预固定, 将上清液去除, 加入5 ml固定液, 固定0.5 h后离心, 将固定液去除, 将上述操作重复2次。其次, 将1 ml 60%冰醋酸加入,时间为1 min, 再将3 ml甲醇加入, 使其混匀 , 将较大的绒毛枝去除, 再离心, 将上清液去除, 将新鲜配制的固定液加入,最后滴片。烤片75℃烤箱1 h, 实施G显带和吉姆萨染色。

2 结果

2.1 制片情况 81例标本中, 74例能用于核型分析, 染色体标本成功培养制片的几率为91.4%, 7例失败, 其中无细胞生长7例。

2.2 绒毛染色体异常核型 74例成功制片的绒毛标本中,出现52例(70.3%)染色体异常, 其中35例(47.3%)常染色体三体, 6例(8.1%)多倍体, 7例(9.5%)性染色体单体, 4例(5.4%)结构异常。绒毛染色体异常核型：数目异常分别为47,XN, +16有 7例 (13.5%)；47, XN, +22有 6例 (11.5%)；47,XN, +21有5例(9.6%)；47, XN, +15有4例(7.7%)；47, XN, +18有3例(5.8%), XN, +17有2例(3.8%)；47, XN, +2有2例(3.8%)；47, XX, +5、47, XY, +7、47, XX, +11、47, XY, +12、47, XX, +13、47, XY, +14各有1例(1.9%)；69, XXN有6例(11.5%)；45, X只有1条X染色体有7例(13.5%)。结构异常4例(7.7%), 分别为46, XY, 21q22.3×321号染色体部分三体；47, XY, +5, 7q36.3×35三体合并7号染色体部分三体；45,XY, -21 21单体；46, XY, 6p25-p23×3。

3 讨论

在临床诊断胚胎停止发育的诸多方法中, B超检查能够了解胚胎存活情况, 因此这种诊断方式对临床尽早发现胚胎停止发育极为有利, 能为治疗方案的制定提供可靠依据。另外, 孕妇进行血常规检查时, HCG指标亦能够对胚胎发育的情况进行评估［3］, 若血常规检查时显示与妊娠相关的激素不逐渐升高或降低等情况, 则提示可能出现胚胎停止发育, 特别是对于伴有阴道出血的患者, 需加强重视, 以便于早期确诊, 减少宫内稽留的时间［4-6］, 减少手术并发症。

资料显示, 绒毛染色体异常检验是否成功与检测手段［7-9］、样本采集有密切的关系, 另外, 与稽留时间也有重要关系, 在检测时, 不管是采取短期培养法或是直接法, 均是应用有生命力的细胞, 若用时过久, 造成组织细胞死亡或不新鲜, 会对检测的结果带来影响［10-12］。本研究81例稽留流产患者的绒毛样本中, 7例失败, 其中4例患者绒毛因稽留时间过长, 所采集的绒毛显示黄褐色, 无光泽且暗淡, 因而检测失败。81例中染色体异常52例, 其中其中35例(47.3%)常染色体三体, 6例(8.1%)多倍体, 7例(9.5%)性染色体单体,4例(5.4%)结构异常, 出现上述异常的原因主要为核内复制、双雄受精以及双雌受精等。

综上所述, 导致稽留流产的原因诸多, 绒毛染色体检测在稽留流产患者中的可行性高, 有助于积极指导患者再次妊娠。