药品微生物限度检查误差的影响因素及控制方法

2018-01-17张小莉

中国药业 2018年6期

张小莉

（陕西省咸阳市食品药品检验检测中心，陕西咸阳 712000）

药品质量评价标准除理化指标外，还有生物学指标。生物学检验包括少数制剂（如注射剂、植入剂及部分眼用制剂）的无菌检查和绝大部分非无菌药品的微生物限度检查。药品微生物限度检查法是指非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的检查方法，包括染菌量及控制菌的检查。1972年版《中国药典》开展了药品微生物限度检查[1]，但直到1995年版才正式收载此方法。药品微生物限度是对生产单位所用的药品原料、器具设备、工艺流程、生产环境和操作者的卫生状况进行卫生评价的综合依据[2]。药品一旦受到微生物污染，将造成药品变质，主成分分解而失效，也可能分解产生毒素，造成机体反应，引起疾病甚至威胁生命。本研究中从人、机、料、法、环5个途径查找药品受到微生物污染的可能途径，以寻找控制污染之法。

1 污染途径分析与控制

1.1 人员

供试液制备过程为主要影响因素，由于供试液制备由实验人员完成，因此，微生物实验的操作人员是主要影响因素[3－4]。实验者因实践经验、理论专业和文化水平的差异而对同一标准理解不同，操作和检验方法选择不同，可能因操作产生差异而造成最终结果错误。

人员素质：操作人员应有极高的职业素质，要有责任心，才能按要求[5]严格控制实验环境；还要有专业素质，即操作规范、熟练。人员操作过程保证真实的药品污染状态[6]，不杀死微生物，也不污染样品，避免因操作不当样品污染实验环境，且严格控制检验时间（不超过 1 h）。

无菌观念：微生物实验室不同于一般理化实验室，对环境控制很严格，工作人员必须有无菌观念。首先，进入实验室的器具应采用适当方法灭菌；其次，工作人员须身体健康，不能带某些传染病（如感冒）进入实验室，保证实验室不被污染；再次，人员装束符合微生物实验室要求（如不能佩戴饰物，要求穿洁净服）[7]；最后，完成实验及时清理实验垃圾，以免滋生微生物而污染环境。

相关规定：按 2015年版《中国药典（四部）》通则9203（《药品微生物实验室质量管理指导原则》(以下简称通则9203)和通则9205《药品洁净室微生物监测和控制指导原则》(以下简称通则9205）中要求执行，其中，通则9203规定了操作环境的标准，通则9205规定了控制环境频次的最低要求。

1.2 设备

仪器核检：包括所用设备检定[压力容器、天平、冰箱和培养箱用的温度监测仪、空气检测设备（如测定浮游菌、悬浮粒子）]或校准（烤箱、培养箱、加液枪、分液器或刻度吸管）。超净台或生物安全柜也要按规程检定。环境处理过程所用的高效过滤器、超净台或生物安全柜，检验过程的天平，培养过程的培养箱，一方面定期核查，保证运行正常，另一方面定期处理，保证不污染样品。

设备和耗材优化：选用适于本实验室且易于操作的设备，过去用刻度吸管采样，现在可用加液枪（加液枪换枪头比换刻度吸管方便）；配备匀浆仪和水域震荡仪加速样品的释放；涡旋震荡仪混匀样品。也可使用一次性耗材，提高工作效率，缩短实验时间，减少污染。

1.3 物料

检验对象：因样品污染的不均匀性，正确的抽样方法（抽样代表性、抽样环境）很重要[8]。

培养基：所用培养基须经过适用性检查。现在，一般实验室使用商品培养基，且按照药典或培养基使用说明要求进行配制和严格灭菌，既不破坏成分，又可保证灭菌彻底。培养基要求参见通则9203中对培养基的要求。注意高压后培养基的营养成分和pH[9]，以保证培养基的灵敏度。保存依赖于其质量、贮存条件和培养基种类。制备好的培养基一般可于2～8℃冰箱保存30～60 d[10－11]。

其他：检验用水的水质须符合实验要求；实验室所用消毒液定期更换，以免产生耐受菌株；实验所用器具及物品应清洗干净，不残留抑菌物质[12]；注意所用菌种生物特征是否典型。

1.4 方法

合理选择检验方法：《中国药典》从2005年版开始进行微生物方法学验证，以保证选用方法准确、可靠。一般参照企业提供有可靠、准确方法和明确结论的资料，但也有部分例外，如某企业产品菌落计数中产品资料需氧菌总数仅 10－1用薄膜过滤法，10－2，10－3未说明，如直接选用平皿法，可能出现假阴性，造成漏检。此时应先与企业沟通，无果时再选薄膜过滤法。又如食品标准中根据水来源不同分为生活饮用水、包装饮用水和饮用天然矿泉水，3种水微生物指标均不同，如果用错标准导致误判，将造成浪费或不合格产品流入市场，甚至造成严重后果。

菌落计数误差控制[13]及控制菌的培养时间：2015年版《中国药典》选用的培养基应用范围比以前更适合微生物生长，需氧菌总数选用胰酪大豆胨琼脂培养基，比以前的营养琼脂更适于微生物生长。统计霉菌和酵母菌总数时选择的沙氏葡萄糖琼脂培养基比玫瑰红钠琼脂培养基（选择性培养基）计数范围更广，而且规定生长细菌也计数。笔者做某一外用药物制剂方法适用性试验时发现，外用药金黄色葡萄球菌（30～35℃）预培养时间为18～24 h，按照规定培养24 h接种至琼脂平板，阳性对照生长18 h生长良好，但供试品阳性对照培养72 h未生长。预培养时间延长至36 h，供试品阳性对照在琼脂平板在72 h内生长良好。其原因是金黄色葡萄球菌敏感，容易被抑制，由于受到供试液的干扰，微生物受损，修复较慢，延长预培养时间很有必要。

灭菌方法：压力容器定期用生物指示剂进行灭菌验证；每次用化学指示卡进行灭菌验证，保证灭菌彻底。

判定标准掌控：2015年版《中国药典》通则1107《非无菌药品微生物限度标准》中有可接受范围[14]，但如不严控生产质量，就会造成微生物限度标准要求降低的错觉。作为生产企业的标准，有内控指标以保证贮存期药品合格，不能考虑可接受范围，否则进行检验结果偏差（OOS）调查[15]。

实验细节：一是注意对照试验，开展阴性对照试验，以便确定样品本身实际情况，避免环境或操作人员带入，阳性对照（控制菌）实验则可确认该方法是否适用于本实验室；二是实验前正确保存样品，以避免开检前污染，同时做好标记，以免混淆样品。

1.5 环境控制

样品检验环境：微生物实验室药品严于食品[16]，应符合实验室设计要求，即通则9203对环境的总要求，实验室参数[空气悬浮粒子、浮游菌、沉降菌、无菌手套和无菌服的表面微生物和物理参数（温度、相对湿度、换气次数、气流速度、压差）]均须满足实验要求。且应依据通则9205定期监测实验室的空气质量（悬浮粒子、浮游菌、沉降菌）[17]。

检验前药品储存环境：保持样品原有状态，做好标记，并保证药品不受污染和不过度灭菌。

供试品培养环境：保持培养箱和培养室洁净。