酶联免疫吸附试验在食品检测中的应用

2018-01-17邹振宇汪恩婷重庆市计量质量检测研究院

食品安全导刊 2018年36期

□ 邹振宇汪恩婷杨皓重庆市计量质量检测研究院

ELISA酶联免疫吸附试验的检测原理主要是通过酶的催化反应，以及抗原体在反应过程中的高度特异性，对食品进行安全检测，能够将抗体和抗原全部吸附到被检食品表面中，保证其免疫活性，进行准确分析。ELISA酶联免疫吸附技术从20世纪90年代开始应用推广。随着技术的成熟发展，其检测灵敏性也相继提升，从而在食品检测中广泛应用。

1 酶联免疫吸附试验在食品检测中的有效应用

1.1 农药残留检测

农药的使用会给食品成品、半成品或原材料留下少量农药降解物质、毒性代谢物以及农药原体等，上述物质都属于农药残留。在新时期食品问题中，农药残留问题占据较大比重，对于我国食品出口产生一定影响，为此检测食品农药残留拥有重要意义。从化学结构角度分析，农药属于小分子物质，不具备免疫性，是一种半抗原。检测农药残留时，应该率先掌握农药结构，并制订抗原合成方案，通过杂交瘤技术检测农药小分子。同时，应用ELISA能够有效检测有机氯、拟除虫菊酯和有机磷等类型的农药[1]。检测有机磷农药时可以选择合成不同种类的半抗原，通过免疫获取抗体，利用ELISA进行检测，最终检测出IC50的含量是2 5 ng/m L，最低含量为2 ng/mL，检测特异性较好，在有机磷农药中没有交叉反应出现。由此可见，ELISA在检测有机氯和拟除虫菊酯类的农药中优势较为突出。

1.2 违禁药物检测

检测食品过程中，可能会发现各种残留兽药，例如激素类药物、抗球虫类药物、磺胺类药物以及抗生素类药物等。利用ELISA技术进行检测较为灵敏、便捷，能够将痕量残留药物分析变成实验室中的常规分析技术，对几十种甚至上百种药物进行同时检测，是检测大量药品过程中频繁使用的技术手段。随着ELISA的不断发展，专用酶标仪与试剂盒种类逐渐增多，应用技术也愈发成熟。比如，瘦肉精是世界范围内被禁止应用的一种催化生长剂，本质上是针对肾上腺素受体的一种激动剂，其化学性质稳定，只有在加热到170 ℃的情况下，才会开始分解。因此，单纯依靠烹调加热的方法，无法有效分解瘦肉精，一旦被人们误食，会造成无法挽回的后果，可能出现心悸、头晕等症状。假如长时间食用，会在人体形成大量毒素积累，导致畸形、癌症等问题的发生，为此需要利用ELISA技术进行科学检测。通过ELISA法检测拥有快速、敏感、准确等优势。例如，乙烯雌酚是人工合成雌激素药物，拥有较强的副作用，会导致人体内出现肿瘤或基因突变等问题。相关研究者应用生物素与亲和素两者的稳定性和高度特性等原理，对双抗体夹心ELISA法进行研究，利用生物素标记抗体，最终检测范围是0.25～15.6 ng/mL，最低限制是0.125 g/mL。

1.3 生物毒素检测

生物毒素实质就是产生菌在一定的环境状态下衍生出来的代谢物，尽管食品加工过程中拥有加热和烹调等步骤，但却依然无法彻底打破毒素内部结构，严重影响食用者身体健康[2]。例如：黄曲霉毒素拥有较强致癌性和制毒性，我国针对其在食品中的含量进行了严格的管控。相关研究人员在利用ELISA分析法检测黄曲霉素时将酶标抗原和黄曲霉素B1抗体融合到一起，通过抗原产生的酶催化显色反应和免疫反应确定B1具体成分。该种检测方式准确性高、操作步骤简单、投入成本低，可以同时检测大量待测物质。食品安全检测中，过敏性物质残留的检测也十分重要，引起了社会的广泛关注。国外研究人员通常使用竞争性ELISA法来识别大豆肽，利用单克隆抗体进行测定时的范围是24～72 ng/mL，最低限度是8 ng/mL，重复性较好。

2 酶联免疫吸附试验的具体应用问题和解决措施

2.1 酶联免疫吸附检测的主要问题

ELISA检测的方法拥有较高的灵敏度，无需进行反复处理，此外还拥有检测成本低、操作便捷、特异性强等特点，因此广泛应用于食品安全检测当中。但是因为技术方面的限制，在检测过程中还存在一定问题，比如制备抗体困难，在选择试剂的过程中拥有较高的要求，不能对多种物质进行同时检测，对化学性质不稳以及低分子量物质进行分析时存在一定的困难，在对物质结构检测过程中容易出现交叉反应等。

2.2 解决对策

针对上述问题，可以从以下几个方面进行有效改善。首先是改变制备抗体的方法，结合待测物实际特性，合理利用各种学科知识，融合立体化学、计算机模拟和组合化学等方法，建立科学的评价模型，提高筛选工作的准确性和筛选效率。其次，提升克隆抗体亲和性，分析多种检测对象。在合成抗原时，可以通过控制条件，将所有合成抗原体共同针对同一种类型抗体，能够在一次实验中检验出多种物质，避免出现假阳性与交叉反应等问题。在实际检测中，为了避免发生假阳性等问题，可以将一些明胶类物质和牛血清蛋白添加到包被液当中，同时提前将吐温-20添加到洗涤液内，能够有效预防检测中因为非特异性吸附造成的不良影响，提升检测灵敏度。