蜂花粉中喹诺酮类药物残留的检测

□ 王 玮 重庆市涪陵食品药品检验所

1 蜂花粉的功效

蜂花粉中富含人体所需的氨基酸、维生素等多种营养物质，提高人体的免疫力，减缓疲劳。适量食用可以使皮肤红润有光泽，延缓衰老，同时还可以防治心脑血管疾病，调节肠胃功能，增强骨质，对于便秘也有良好的治疗作用。蜂花粉还具有较高的药用价值，是恢复肝功能的高级营养剂，也可以治疗慢性肝炎以及脂肪肝[1]。

2 喹诺酮类抗生素的危害

大量研究资料表明，喹诺酮类药物及其药物残留在对食用者产生致癌、致畸、致突变的潜在作用的，也会造成远期的毒性作用。喹诺酮类药物会对消化系统造成损害，临床症状为恶心，呕吐，腹部不适，腹痛和食欲不振。更严重的是，食品中的残留药物会使人体的致病菌产生耐药性，导致喹诺酮类药物的疗效降低甚至失效。喹诺酮类药物主要指恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、培氟沙星等。因此，人们必须十分重视动物性食品中喹诺酮类药物残留的问题。

3 蜂花粉的预处理方法

由于蜂花粉的基质较为复杂，蛋白质等营养物质的含量较高，为了保证检测过程的高效性和实验结果的准确性，有必要建立一种高效的前处理方法对蜂花粉样本进行处理。通过矩阵试验，2%高氯酸能更好地沉淀蛋白，消除杂质，宜作为蜂花粉中喹诺酮类药物的最佳提取试剂。

4 喹诺酮类药物检测方法

本文主要介绍一种喹诺酮类药物的检测方法，即高效液相色谱（HPLC）。

4.1 高效液相色谱法（HPLC）

液相层析法与气相层析理论相结合而得到的检测方法即为高效液相色谱法。是溶质的流动相和固定相，在高压条件下进行的，持续多次的交换过程。在交换过程中，由于两相之间存在诸如分配系数或分子大小等差异，产生排阻作用导致不同的溶质相互分离。这种检测方法对环境温度的要求较低，可在室温下进行，因此应用范围较广，同时具有很强的分离能力和较高的灵敏度。主要的检测器为电化学探测器或荧光检测器等。整体而言，高效液相色谱法具有较强的特异性和较高的精确度，灵敏度高且结果较为稳定，适合于作确证性试验。另外，基于喹诺酮类药物自身的性质，在高效液相色谱法中利用荧光法以及紫外可见分光光度法，可以有效降低实验样品中存在的蛋白质等干扰物质会对实验产生的影响。在该实验方法中，对样品施行预处理操作，有助于除去干扰。除此之外，利用高效液相色谱法还能够通过固液萃取的方法提取水中含有的抗生素[2]。

4.2 HPLC方法的精密度、准确度、灵敏度

4.2.1 精密度

高效液相色谱法的批内变异系数≤15%，批间变异系数≤20%。

4.2.2 精确度

高效液相色谱法在20 ～500μg/kg添加浓度的回收率为60%～100%。

4.2.3 灵敏度

实验结果表明，恩诺沙星、环丙沙星等喹诺酮类药物，在蜂花粉中的最大残留限量为100 μg/kg，检测限为 20 μg/kg。

5 检测实例

为了检测蜂花粉中残留的喹诺酮类药物，科学上做了许多实验，以下以恩诺沙星的检测实验为实例进行叙述。实验人员将恩诺沙星分别和两种性质不同的蛋白进行偶联，进而形成了恩诺沙星牛血清蛋白完全抗原和恩诺沙星抗原。以家兔为实验对象，用恩诺沙星牛血清蛋白使家兔产生免疫，制备有较高特异性的恩诺沙星血清，然后用恩诺沙星蛋白将抗原包住，构建恩诺沙星测定方案。基本原理是实验对象的抗体与酶标抗体相互竞争，从而与固相抗原结合。由实验结果可知，标本中抗体的数量越大，那么与固相抗原结合的酶标抗体数量越少，所以阳性反应的颜色比阴影反应的浅。也就是说标本中的牛血清和被过氧化物标记过的牛血清相互竞争，与数量有限的牛血清抗体结合，与此同时牛血清抗体又会和覆盖在微孔板条上的特定抗体结合。所以，通过洗涤除去没有结合的牛血清，加入酶底物以及生色剂等药品，与酶标记物融合使无色的发色剂转换成蓝色。

6 结论

现如今，尚没有明确国家标准或行业规定来规范蜂花粉中恩诺沙星、环丙沙星等喹诺酮类药物残留的检测标准，相关文献资料报道较少。现有的检测标准也只适用于饲料、蜂王浆、蜂蜜和动物性食品中喹诺酮类药物残留量的检查。因此，为了确保蜂花粉的安全性，有必要建立一种检测蜂花粉中恩诺沙星、环丙沙星等喹诺酮类药物残留的方法。