氧化苦参碱磷脂复合物对四氯化碳致小鼠慢性肾损伤的保护作用

穆庆迪 陈新梅 杜 月 岳志敏 徐溢明

(山东中医药大学药学院，山东 济南 250355；*山东大学临床医学院，山东 济南 250012)

氧化苦参碱(Oxymatrine，OM)是从豆科植物苦参、苦豆子中提取得到的一种生物碱。苦参作为药材使用始载于《神农本草经》，有清热燥湿，杀虫，利尿之功，现代医学表明其有抗炎、抗病毒、抗肝纤维化和免疫调节、抗癌、抗肿瘤、升高白细胞、抗心率失常等多种药理作用，且不良反应较少[1,2]。磷脂复合物 (Phytosome)是药物和磷脂分子通过电荷迁移作用而形成的较为稳定的化合物或络合物。中药活性成分与磷脂形成磷脂复合物后，可使药物亲脂性显著增强，作用时间延长，不良反应降低[3]。氧化苦参碱，制成磷脂复合物后会大大提高生物利用度，增强疗效。目前关于氧化苦参碱在治疗肾损伤方面的研究较少，但是已有研究发现氧化苦参碱在抑制肾纤维化方面可产生与苯那普利同等效果[4]，并且前期本课题组的研究同样发现氧化苦参碱对大鼠CCl4肾损伤具有一定的保护作用[5]，本实验将氧化苦参碱制成磷脂复合物，考察不同剂量的氧化苦参碱磷脂复合物对肾损伤的保护作用。

1 材 料

1.1 试剂与仪器

氧化苦参碱(陕西昂盛生物医药科技有限公司，批号: US150415)；四氯化碳(天津市富宇精细化工有限公司，批号20160411)；大豆磷脂(上海太伟药业有限公司，批号20150701)；橄榄油(上海嘉里食品工业有限公司，批号20150624)；氧化苦参碱磷脂复合物(本实验室自制)；JY1002 分析天平 ( 上海精密科学仪器有限公司)；B320A型医用低速离心机(安徽县白洋离心机场)；5821型AU5800全自动生化分析仪(BECKMAN COULTER) 。

1.2 动物

雄性昆明小鼠，体重18～22 g，由济南朋悦实验动物繁育有限公司提供(动物许可证号SCXK(鲁)2014-0007)。

2 方 法

2.1 动物分组

昆明小鼠72只，实验室适应性饲养5 d后随机分为6组：空白对照组、CCl4模型组、氧化苦参碱组(78 mg/kg)、氧化苦参碱磷脂复合物低剂量组(39 mg/kg)、氧化苦参碱磷脂复合物中剂量组(78 mg/kg)、氧化苦参碱磷脂复合物高剂量组(156 mg/kg)，每组12只。实验过程中每日给予普通饲料及正常饮水。

2.2 模型制备及给药

实验过程中，除空白对照组外，其余各组均灌0.5%CCl4橄榄油溶液10 mL/kg，每周两次，空白对照组给等量橄榄油。空白对照组和CCl4模型组给生理盐水，其余各组按照剂量给氧化苦参碱或磷脂复合物，给药量为0.1 mL/10 g，每日两次，连续8周。

2.3 体重和摄食量测定

实验期间，每天记录各组小鼠的摄食量，每周称量一次小鼠体重并记录。

2.4 血液中尿素氮和肌酐含量测定

末次给药后，小鼠禁食12 h，正常饮水。摘眼球取血，离心，3 000 r/min×10 min，吸取上层血清，采用全自动生化分析仪检测尿素氮(BUN)及肌酐(SCr)的含量。

2.5 数据处理

采用SPSS21.0统计软件进行统计分析，数据均采用(x±s)表示，两组间均数比较，采用t检验，以p<0.05为有统计学差异。

3 结 果

3.1 一般情况

实验过程中，空白组小鼠体态正常，皮毛光滑浓密，动作敏捷。模型组小鼠精神萎靡，行动缓慢，皮毛蓬松。其余各组小鼠精神、皮毛状况好于模型组。

3.2 体重与摄食量变化情况

饲养过程中，各组小鼠体重整体保持均匀增长趋势，空白组小鼠体重一直高于其他各组，并且与模型组之间存在显著性差异，其他各组体重差异不明显。实验初期，各组小鼠摄食量无显著差异；实验后期，低剂量组和高剂量组小鼠的摄食量明显高于其他组，空白组与OM组、中剂量组摄食量相近。根据实验记录，每次造模后的第二天，各组小鼠摄食量会有明显下降，CCl4造模会对小鼠摄食量产生影响。

3.3 血液中尿素氮(BUN)和肌酐(SCr)含量测定

结果如表1所示，与空白组相比，模型组的BUN和SCr水平显著升高，具有统计学差异(P<0.05)。氧化苦参碱组的BUN和SCr水平与CCl4模型组之间均存在显著性差异(P<0.01)，氧化苦参碱磷脂复合物低、中、高剂量组的BUN和SCr水平与CCl4模型组相比均下降且差异性显著。氧化苦参碱组与CCl4模型组间的水平差异不如中剂量组与模型组间显著，且两组间差异也有统计学意义(P<0.05)。

表1 血液中尿素氮(BUN)和肌酐(SCr)含量测定Table 1 Determination of urea nitrogen (BUN) and creatinine (SCr) in blood

注：与空白组相比，*表示P<0.05; 与模型组相比，#表示P<0.05,##表示P<0.01

4 讨 论

CCl4是一种典型的肝毒物质，有研究表明CCl4肾脏的损伤主要表现在肾组织蛋白质的氧化损伤[6]。前期本课题组研究发现连续8周灌胃CCl4可以引起大鼠肾损伤[5]。本实验研究发现，连续8周给予低浓度的CCl4可以导致小鼠血清中BUN及SCr含量明显上升，对小鼠肾脏造成一定程度损伤，表明CCl4制备小鼠肾损伤模型是成功的。氧化苦参碱各组与CCl4模型组相比，BUN和SCr水平均有明显降低，与前期本课题组的氧化苦参碱实验结果一致，均说明了氧化苦参碱对肾损伤的保护作用是确实显著的。

本实验将氧化苦参碱磷脂复合物的剂量细化，分为低、中、高三个剂量组。本次实验中，磷脂复合物低剂量组(39 mg/kg)已经达到与氧化苦参碱组(78 mg/kg)同等效果，并且低剂量的氧化苦参碱磷脂复合物在三个磷脂复合物组中降低作用最显著，初步推测低剂量的氧化苦参碱在制成磷脂复合物后可以达到与单纯中剂量氧化苦参碱相同的疗效。将氧化苦参碱制成磷脂复合物后，提高小鼠对氧化苦参碱的吸收，从而提高了对CCl4致慢性肾损伤肾脏的保护作用。磷脂复合物在药物制剂方面应用逐渐增多[7]，具有广阔的前景。

[1] 陈新梅，郭辉，刘彩云 等.氧化苦参碱研究概况[A];世界中医药学会联合会中医药抗病毒研究专业委员会论文集[C]；山东烟台，2015：157～159.

[2] 段章好，陈新梅. 抗乙肝病毒中药活性成分的研究进展[J].辽宁中医药大学学报，2016，18(11)：115～118.

[3] 陈晨，金玉.氧化苦参碱对阿奇霉素大鼠慢性肾纤维化组织中核因子-κB 表达的影响[J].南方医科大学学报，2007，27( 3)：345～348.

[4] 郑林，李毅，邓盛齐 等.磷脂复合物对中药制剂口服吸收的影响[J]，中国抗生素杂志，2015，40(6)：468～473.

[5] 崔英贤，陈新梅，郭辉 等.氧化苦参碱对四氯化致大鼠慢性肾损伤保护作用的初步研究[J].化工时刊，2016，30(3)：21～23.

[6] 黄庆红,罗明英,王歧本.藤茶总黄酮对四氯化碳所致大鼠肾损伤保护作用的初步研究[J].现代生物医学进展,2009,13( 9):2 454～2 455.

[7] 郭辉，陈新梅.中药活性成分磷脂复合物研究进展[J].辽宁中医药大学学报,2016,18(8):161～163.