洋参虫草颗粒对小鼠免疫功能及学习记忆的影响

杨玉奇 罗维 聂晶 魏云 贺双艳 唐笑凤 李琴玲

（1湖南斯莱克景达实验动物有限公司 湖南 长沙 410125)

（2湖南医药工业研究所 湖南 长沙 410014）

洋参虫草颗粒处方由西洋参、虫草孢子体等组成。功能益气养阴，健脑益神，用于气阴不足或肾精亏虚所致的头晕耳鸣，困乏无力，记忆衰退，健忘失眠等，神经衰弱症见上述症候者。

1.实验材料

1.1 实验药物

洋参虫草颗粒，湖南康寿制药有限公司提供，批号：150201。古汉养生精口服液，批号：130306。紫光古汉集团衡阳中药有限公司产品。

1.2 实验动物

ICR小鼠，18～22g。110只。雌、雄各半。湖南斯莱克景达实验动物有限公司供应。动物生产许可证号：SCXK（湘）2013-0004。动物使用许可证号：SYXK（湘）2014-0012。

1.3 仪器与试剂

MA2014电子分析天平，上海舜宇恒平科学仪器有限公司。721型分分光度计，上海菁华科技仪器有限公司。DT-200小鼠跳台自动测试箱，成都泰盟科技有限公司。

2.实验方法

2.1 碳粒廓清实验

方法[1-3]，ICR小鼠，50只，雌、雄各半，体重18～22g，随机分成5组：空白对照组，洋参虫草颗粒低、中、高剂量组，古汉养生精组。分别给予下列药物：空白对照组（给予蒸馏水），洋参虫草颗粒低、中、高剂量组（1.95、3.90、7.80g 生药/kg），古汉养生精组（7.80ml/kg），均按20ml/kg灌胃给药，每天给药1 次，连续7 天。末次给药60min后，从小鼠尾静脉注射印度墨水0.1ml/10g。注射后1min、5min，眼眶采血20μl，溶于2.0ml 0.1% Na2CO3溶液中，于680mm处，测定吸收值（OD），以Na2CO3溶液作为空白对照。取血后，将小鼠处死，摘取胸腺、肝脏、脾脏，吸干脏器表面血污，称质量（mg）。计算胸腺指数，廓清指数K，校正廓清指数α。胸腺指数（mg/10g）=10×器官重量（mg）÷小鼠体重（g），K=(LogOD1－LogOD2)÷(t2-t1)，α=×体重÷(肝重 + 脾重)。

2.2 对东莨菪碱所致的小鼠学习记忆获得障碍影响

参考文献方法[1、2、6]，选ICR小鼠，60只，雌、雄各半，体重18～22g，随机分成6组：空白对照组，模型组，洋参虫草颗粒低、中、高剂量组，古汉养生精组。分别给予下列药物：空白对照组（给予蒸馏水），模型组（给予蒸馏水），洋参虫草颗粒低、中、高剂量组（1.95、3.90、7.80g 生药/kg），古汉养生精组（7.80ml/kg），均按20ml/kg 灌胃给药，每天给药1 次，连续7天。第6天给药60min后，将6格跳台仪的电压调至32V，将小鼠分批在放入DT-200小鼠跳台自动测试箱内进行训练，训练前10min，空白对照组腹腔注射生理盐水10ml/kg，其余各组腹腔注射东莨菪碱2mg/kg。训练时先适应环境3min，通电，小鼠受电击后跳上跳台，跳下时以小鼠双足同时接触跳台仪铜栅为触电，视为错误反应，训练5min。观察并记录小鼠学习中触电潜伏期及5min 内错误次数。给药第7天60min 后，将小鼠放在跳台上，记录小鼠错误潜伏期和5min 内错误反应次数，作为记忆指标。

2.3 数据处理方法

采用SPSS 17.0 软件进行数据统计，实验数据均以x-±SD表示，并进行单因素方差分析，P＜0.05 具有统计学意义，P＜0.01 具有高度统计学意义。

3、实验结果

3.1 洋参虫草颗粒对小鼠胸腺指数、碳廓清指数、校正廓清指数影响：与空白组比较，洋参虫草颗粒低、中、高剂量组和古汉养生精对照组胸腺指数、碳廓清指数、校正廓清指数均无明显差异（P＞0.05）。结果见表1。

表1 洋参虫草颗粒对胸腺指数（x-±SD，n=10）

表2 洋参虫草颗粒对廓清指数、校正廓清指数的影响（x-±SD，n=10）

3.2 对东莨菪碱所致小鼠学习记忆获得障碍影响

与空白组比较，模型组潜伏期显著缩短、错误次数显著性增多（P＜0.01）；与模型组比较，洋参虫草颗粒高剂量组潜伏期显著延长（P＜0.01），洋参虫草颗粒高剂量组错误次数明显减少（P＜0.05）。结果见表3。

表3 洋参虫草颗粒对东莨菪碱所致的小鼠学习记忆获得障碍的影响（x-±SD，n=10）

4.讨论

影响非特异性免疫功能的研究方法较多，免疫药理实验，常以药物对实验动物免疫器官重量的影响作为初步观察药物对免疫功能影响的指标，当机体的整体免疫功能增强时，其质量有所增加，脏器系数增加[1、4]。向小鼠血流中注射一定量的碳颗粒，迅速被单核吞噬细胞所清除，主要被定居在肝和脾脏的巨噬细胞所吞噬[1-2]。观察其血流中清除的速率，即可反映肝脏和脾脏中的巨噬细胞的吞噬功能[2]。本研究主要采用了免疫器官重量法和单核吞噬细胞功能测定法（小鼠碳廓清法）来探讨洋参虫草颗粒对小鼠免疫功能的影响。结果洋参虫草颗粒各剂量组对小鼠胸腺指数、碳廓清指数、校正廓清指数有增加趋势，提示具有增强免疫功能的作用。

学习和记忆是脑的重要功能之一，观察药物的益智作用时常需采用记忆障碍动物进行实验。本法即可观察药物对记忆过程的影响，也可观察对学习的影响，有较高的敏感性[3、6]，尤适合于初筛药物。另外跳台法在电击前经条件刺激，可同时观察被动和主动回避性反应。本研究采用在动物训练前10min腹腔注射东莨菪碱2mg/kg，造成记忆损伤模型，与模型组比较，洋参虫草颗粒高剂量组错误潜伏期显著延长，洋参虫草颗粒高剂量组错误次数明显减少，提示洋参虫草颗对东莨菪碱所致的小鼠学习记忆获得障碍具有改善作用。

【参考文献】

[1]李仪奎.中药药理研究方法学[M].上海科学技术出版社，2006年，256-257，721-723.

[2]张均田，杜冠华.现代药理研究方法学[M].中国协和医科大学出版社，2012.年，1326-1327，1773-1774.

[3]陈奇.中药药理研究方法学[M].人民卫生出版社，2006年，309-310.

[4]刘小敏，梁毅.加味愈白丸对小鼠免疫功能的影响[J].医药导报.2013；32（11）：1425-1427.

[5]孔祥廉，梅全喜，林慧，王云庭.蛇黄肝炎汤对小鼠碳粒廓清功能的影响[J].今日药学.2011；21（09）：559-571.

[6]皋聪，王传社，巫冠中等.苁蓉总苷对小鼠学习记忆障碍的影响[J].中药新药与临床药理，2005；16(3):162-164.