超高效液相色谱-串联质谱法测定黄豆中丙硫菌唑和甲氧咪草烟
2018-01-10陈倩娟
陈倩娟
（谱尼测试（天津）科技有限公司，天津 300000）
丙硫菌唑是一种新型三唑硫酮类杀菌剂，主要用于防治由子囊菌、担子菌以及半知菌引起的病害。近年来，丙硫菌唑在谷物、油菜籽和花生等农产品中广泛应用。随着丙硫菌唑的使用和推广，国际食品法典委员会（CAC）、美国、欧盟、日本均规定了其在粮谷等作物中的限量。2017年6月18日实施的GB 2763—2016《食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量》规定丙硫菌唑在大豆中最高残留限量为1 mg/kg。甲氧咪草烟属咪唑啉酮类高效除草剂，主要用于大豆田及花生田苗后除草，可有效除去大多数一年生禾本科杂草及阔叶杂草。GB 2763—2016规定甲氧咪草烟在大豆中最高残留限量为0.1 mg/kg。目前关于丙硫菌唑和甲氧咪草烟还没有统一的测定标准，本文建立了液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）同时检测黄豆中丙硫菌唑及甲氧咪草烟的方法。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂
超高效液相色谱-串联四级杆质谱联用仪（Waters TQD），配有电喷雾离子源；电子天平，感量0.1mg；均质器；高速离心机；水浴超声提取器；XW-80A涡旋器；TG18-WS台式离心机。
丙硫菌唑标准品(CAS：178928-70-6)；甲氧咪草烟标准品（CAS：178928-70-6）；乙腈、甲醇，均匀色谱纯；氯化钠、甲酸，均为优级纯；0.1%二甘醇（DEG）；水，符合GB/T6682规定的一级水。
1.2 样品处理
取20 g粉碎后的黄豆试样，按1:1比例加水，加入60 mL乙腈，9 500 r/min均质2 min，抽滤后将滤液转移至分液漏斗，分液漏斗内加入7 g氯化钠和10 mL 0.1 mol/L磷酸缓冲盐溶液，充分混合后放置10 min，将下层水放出。将盐析后的提取液加入0.1%DEG于40℃旋蒸浓缩至近干，用20%甲醇/丙酮定容至10 mL，用Envi-Carb/DSC-SAX柱净化，净化液加入1 mL 0.1%的DEG，40℃旋转蒸发，2 mL甲醇定容，LC-MS/MS测定。
1.3 色谱质谱条件
1.3.1 色谱条件
Waters BEH-C18柱（100 mm×2.1 mm×1.7 μm）；流动相：A液为乙腈，B液为0.1%甲酸溶液，梯度洗脱，洗脱程序见表1；柱温：40℃;进样量：10 μL，流速：0.2 mL/min。
表1 液相色谱梯度洗脱程序
1.3.2 质谱条件
ESI源；多反应监测；毛细管电压：3.5 kV；离子源温度：150℃；脱溶剂气及锥孔气：N2；脱溶剂气温度：400℃；脱溶剂气流量：800 L/h；锥孔气流量：150 L/h；碰撞气：高纯氩气；保留时间、监测离子对、锥孔电压及碰撞能量见表2。
表2 甲氧咪草烟和苯硫菌唑质谱采集参数
1.4 定性测定
试样中目标化合物色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间相比较，变化范围应在±2.5%之内。待测化合物的质谱定性离子必须出现，至少应包括1个母离子和2个子离子，且样品中目标化合物的2个子离子的相对丰度比应符合表3。
表3 定性时相对离子丰度的最大允许偏差
2 结果与分析
2.1 母离子和子离子的选择
采用针泵流动注射进样，离子源为电喷雾电离源（ESI源），在多反应监测模式（MRM）下对甲氧咪草烟及丙硫菌唑的质谱条件进行优化，锥孔电压及碰撞能量的优化结果见表2。甲氧咪草烟在进入一级质谱后，在正离子扫描模式下，产生稳定的［M]+分子离子峰，即质荷比（m/z）为 306.14，［M]+离子作为甲氧咪草烟的母离子产生有显著丰度的m/z为69.07及86.12碎片离子。丙硫菌唑在负离子扫描模式下，产生稳定的［M－H]-准分子离子峰，即m/z为342.04；丙硫菌唑在碎片离子扫描方式下，以［M－H]-负离子作为丙硫菌唑的母离子，产生m/z为99.91、125.034、264.2等碎片离子。甲氧咪草烟和丙硫菌唑多反应监测色谱图分别见图1、图2。
图1 甲氧咪草烟多反应监测（MRM）色谱图
图2 丙硫菌唑多反应监测（MRM）色谱图
图3 甲氧咪草烟和丙硫菌唑标准曲线
2.2 提取条件的选择
甲氧咪草烟和丙硫菌唑都易溶于乙腈、丙酮、乙酸乙酯等有机试剂，通过试验发现乙腈提取后峰形及回收率均较好，因此在提取过程中使用乙腈作为提取液，再采用氯化钠盐析除蛋白，用Envi-Carb/DSC-SAX柱净化，将流动相按不同比例在色谱柱上进行试验，最终确定采用梯度洗脱方式可有效分离待测物，洗脱程序见上页表1。在此条件下测得的待测物的峰形对称，基线平稳，并且分析时间较短。
2.3 分析方法的线性范围
将甲氧咪草烟和丙硫菌唑标准溶液在上述色谱操作条件下进行分析，进样液质量浓度分别为20 μg/L、50 μg/L、100 μg/L、200 μg/L、400 μg/L，分别以甲氧咪草烟和丙硫菌唑质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，分别得甲氧咪草烟的线性方程为y=1 129x-1 521，相关系数为0.999 9；丙硫菌唑的线性方程为y=3.09 9x-12.30，相关系数为0.999 8。甲氧咪草烟和丙硫菌唑标准曲线见图3，线性相关结果见表4。
表4 甲氧咪草烟和丙硫菌唑的线性相关结果
2.4 定量限
以空白样品基质稀释标准曲线上的最低浓度出峰时，取信噪比S/N=10和样品处理过程的稀释倍数计算得出定量限（LOQ）。称样量为20 g，最后定容体积为2 mL时所对应的定量限分别为0.1 mg/kg、1.0 mg/kg。
2.5 精密度和准确度试验
在阴性黄豆样品中添加2个浓度水平的甲氧咪草烟和丙硫菌唑标准液，按上述前处理方法进行处理，做回收试验，每个水平重复6次，精密度结果见第49页表5。甲氧咪草烟和丙硫菌唑在黄豆中添加回收率在77.3%～84.7%之间，相对标准偏差（RSD）均小于1.0%。
3 结论
本方法可对黄豆中甲氧咪草烟和丙硫菌唑残留量在定性测定的同时进行定量测定。试验结果表明，本方法前处理操作简便、精密度和准确度较高，分析时间短、线性关系良好，具有简便、快速、准确及分离效果好的优点。
表5 黄豆中甲氧咪草烟和丙硫菌唑残留量回收率和精密度试验结果
［1］白雪，周成合，米佳丽.三唑类化合物研究与应用［J］.化学研究与应用，2007，19（7）：721-729.
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