蒙药阿那日-4散对实验性胃溃疡大鼠血清超氧化歧化酶活力及一氧化氮、丙二醛含量的影响△

2018-01-09王玉山

中国民族医药杂志 2017年8期

敖奇王玉山美青

(1.内蒙古国际蒙医医院，内蒙古呼和浩特 010020； 2.内蒙古医科大学2014届硕士研究生，内蒙古呼和浩特 010020； 3.内蒙古医科大学2012届硕士研究生，内蒙古呼和浩特 010020)

敖奇1王玉山2美青3

目的：观察蒙药阿那日-4散对实验性胃溃疡大鼠血清超氧化歧化酶活力及一氧化氮、丙二醛含量的影响，探讨其治疗胃溃疡的可能作用和机制。方法利用10%醋酸制备实验性胃溃疡大鼠模型，予蒙药阿那日-4散及枸橼酸铋钾治疗15d后观察胃黏膜大体标本，计算溃疡面积，测量血清超氧化歧化酶活力及一氧化氮、丙二醛含量。结果胃黏膜大体标本观察发现，治疗组和对照组均溃疡愈合良好；与模型组相比，高剂量的蒙药阿那日-4散可明显促进溃疡愈合，减少溃疡面积(P<0.01)，提高血清超氧化歧化酶活力(P<0.05)，降低血清一氧化氮和丙二醛含量(P<0.01)。结论蒙药阿那日-4散对大鼠实验性溃疡具有良好的治疗作用，其治疗作用和机制可能与清除氧自由基，提高血清超氧化歧化酶活力，降血清一氧化氮，丙二醛含量有关。

蒙药阿那日-4散；胃溃疡；超氧化歧化酶；一氧化氮；丙二醛

蒙药阿那日-4散是收载于《内蒙古药材标准》和《中国医学百科全书(蒙医学)》，是由石榴、肉桂皮、白豆蔻、荜茇4味药组成，蒙药阿那日-4散为基础的复方有阿那日-5、通拉嘎-5、阿那日-8等。在蒙医治疗胃溃疡、慢性胃炎等基础方和经验方，临床上有确切疗效。氧自由基是导致胃黏膜损伤的重要致病因子，超氧化歧化酶(Superoxide Dismutase，SOD)，一氧化氮(Nitric Oxide,No )和丙二醛(Maleic Dialdyde，MDA)是反应体内氧自由基代谢的重要指标。

本研究通过观察蒙药阿那日-4散不同剂量对实验性胃溃疡大鼠血清SOD活力及NO、MDA含量的影响，探讨其治疗胃溃疡的可能作用和机制，为进一步蒙药开发和临床应用提供实验依据。

1 材料与仪器

1.1 动物：健wistar大鼠48只，雌雄各半，体重180 ～ 240g，是由内蒙古医科大学动物实验中心提供。

1.2 药物制备：蒙药阿那日-4散由内蒙古国际蒙医医院(国家蒙药制剂中心)提供。上述药物按一定比例461mg/Kg、327mg/Kg、245mg/Kg成为高、中、低3个剂量，高压灭菌后放入4℃冰箱保存备用。枸橼酸铋钾颗粒按17mg/Kg浓度配枸橼酸铋钾混悬液，4℃冰箱保存备用。

1.3 试剂：枸橼酸铋钾，用时加蒸馏水配制成混悬液；超氧化歧化酶(SOD) 检测试剂盒；一氧化氮(NO)；检测试剂盒及丙二醛(MDA)检测试剂盒，均由南京建成生物工程研究提供，严格按照说明书操作；以及戊巴比妥钠、醋酸、碘酒、究竟等。

2 方法

2.1 分组：将48只大鼠随机分为空白组、模型组、对照组，蒙药阿那日-4散高、中、低剂量组，每组8只。空白组自由饮食进水，15d后处死取材；除空白组外，其余各组大鼠均于适应性饲养3d后行造模术，模型组于术后第4d处死取材；各治疗组均于术后低4d开始灌胃，连续灌胃15d；15d后各治疗组一起处死取材。

2.2 动物模型制作与给药：参照陈奇的文献方法。空白组8只除外，其余40只大鼠均用文献方法。注射0.05ml醋酸建立消化性溃疡大鼠模型。造模前大鼠禁食不禁水24h，1%戊巴比妥钠3ml/Kg(30mg/Kg)腹腔注射麻醉，约10min后，大鼠麻醉，将其仰卧固定于手术台上，剪掉腹壁毛，用碘酒、酒精常规消毒。剑突下腹部正中切口2 ～ 3cm，用弯止血钳在右侧肝脏下方将十二指肠轻轻勾出，然后将胃部轻轻拉出腹外，在胃的腹侧面，胃体部与幽门交界处，将微量注射器平刺入浆膜下0.4 ～ 0.5mm，注入10%醋酸0.05ml，形成丘疹。将胃轻轻送回，缝合腹壁基层，然后缝合皮肤。用碘酒酒精消毒，外涂大棉胶。麻醉大鼠在均在2 ～ 3h内逐渐苏醒，造模周期为3d，常规饲养。从手术次日起，治疗组按分别灌胃阿那日-4散混悬液6ml/Kg，阳性对照组灌胃枸橼酸铋钾17mg/kg，2次/d，对照组给予等容量的生理盐水，连续治疗15d。

2.3 标本采集与测定

2.3.1 标本采集：大鼠连续灌胃给药15d，于末次给药后禁食24h，自由饮水，第16d将大鼠颈椎脱臼处死，迅速打开腹腔，腹主动脉取血约5ml，3000r/min离心10min，分离血浆，-20℃冰箱保存备用。

2.3.2 血清SOD活力及NO、MDA含量检测：各项检测指标均严格按试剂盒说明进行，UV-2000型紫外可见分光光度计比色。血清中，SOD活力及NO、MDA含量分别黄嘌呤氧化酶法、硝酸还原酶法和硫代巴比妥酸法测定。

2.3.3 胃黏膜大体标本观察及溃疡面积测定：处死大鼠取血结束后，开腹，结扎幽门和贲门，取胃浸于0.01ml/ml甲醛溶液中，固定10分钟。沿胃大弯切开，将胃外翻，倒掉内容物，再用乳头吸管轻轻洗掉食物残渣，于手术弯盘中展平，放大镜下肉眼观察。用溃疡的最长径和最短径的均值表示溃疡指数，进行统计处理，计算溃疡愈合百分率，评定药物对溃疡愈合的促进作用。

2.4 实验统计方法：本实验所有数据均用均属±标准差()表示，并使用SPSS10.0软件仓促进行统计学分析，组间差异比较采用两样均数比较的t检验，P<0.05为差异显著性。

3 结果

3.1 胃黏膜大体标本观察：空白组：胃黏膜光整完好、呈淡红色、无充血、水肿，溃疡及瘢痕组织增生等异常变化。模型组：胃窦区浆膜表面充血水肿和肝脏和周围组织有少许粘连，胃窦黏膜可见一个或多个溃疡点，溃疡中心被黄白色脓性分泌物覆盖。枸橼酸铋钾组：浆膜面少许粘连，胃窦区黏膜表面粗糙，周围偶见充血糜烂点。蒙药阿那日-4散高剂量组愈合较佳，胃黏膜仅见小范围瘢痕增生，胃窦区粘膜表面粗糙。蒙药阿那日-4散中剂量和低剂量组：浆膜面少量充血，胃窦区黏膜可见不规则溃疡点或瘢痕组织增生。

3.2 溃疡面积比较：与模型组相比，枸橼酸铋钾组和蒙药阿那日-4散高、中、低剂量大鼠溃疡面积显著缩小(P<0.01)，结果见表1。

表1 各组大鼠溃疡面积比较

与模型组比较*P<0.05

3.3 血清SOD活力比较：模型组大鼠血清SOD活力明显低于空白组(P<0.05)，与模型组相比，蒙药阿那日-4散中剂量组大鼠血清SOD活力明显升高(P<0.05)，与对照组相比，蒙药阿那日-4散中剂量大鼠血清SOD活力明显升高(P<0.05)，结果见表2。

3.4 血清NO含量比较：与模型组相比，蒙药阿那日-4散各剂量组大鼠血清NO含量明显降低(P<0.01)；与枸橼酸铋钾组相比，蒙药阿那日-4散高、中、低剂量组大鼠血清NO含量明显降低(P<0.01)，结果见表2。

3.5 血清MDA含量比较：与模型组相比，蒙药阿那日-4散各剂量大鼠血清MDA含量明显降低(P<0.01)；结果见表2。

表2 各组大鼠血清SOD活力及NO、MDA含量比较

与模型组比较*P<0.05 **P<0.01，与枸橼酸铋钾比较P<0.05

4 讨论

胃溃疡是消化系统常见病，多发病，属于蒙医学“胃宝日病”的范畴，是因“宝日”热邪滞留于胃，蕴积不消而产生的胃复合性慢性病[1]。胃溃疡中脾胃虚寒者居多，治疗则以温中助阳，祛腐生肌促进溃疡修复的药物。西医学认为胃溃疡的发病机制是由于多种原因导致攻击性因子增强和(或)黏膜防御功能减弱所致。

近年研究结果表明，由于胃肠特殊的生理学特点，很容易产生大量的氧自由基，当氧自由基大量产生，超过机体清除能力时，就会溢出细胞外，对周围组织造成损害，导致胃溃疡的发生。

蒙药阿那日-4散有石榴、肉桂皮、白豆蔻、荜茇4味药组成，研究发现[2]，许多蒙药都有抗氧作用，其抗氧化活性成分主要有：黄酮类化合物、酚类化合物、皂苷类、多糖类等。方中石榴可调理胃火，祛巴达干寒症、消食、开胃、止泻，其主要成分单宁(鞣质)能明显抑制大鼠幽门结扎型胃溃疡的形成[3]，单宁具有提高SOD活力、抑制MDA剂NO含量的升高作用[4]。

肉桂皮功能具有祛寒赫依、调理胃火、止泻、敛脓。对肉桂皮的现代药学表明，肉桂提取物具有良好抗氧化作用，清除自由基的能力[5]。肉桂提取物对应激性溃疡、幽门结扎溃疡等溃疡模型均有明显的或较强的抗溃疡作用[6]。白豆蔻有祛胃寒、抗赫依、调胃火、消食、开胃、止吐。白豆蔻提取物具改善胃肠蠕动和胃溃疡[7]。荜茇有调理胃火、祛巴达干赫依、调节体素、止痛。荜茇主要成分胡椒碱除了抗心律失常、抗心肌缺血、抗缺氧、抑菌、抗溃疡作用外，消除DPPH自由基[8]。

本实验采用醋酸性溃疡，只要把醋酸准确注射于胃黏膜下，溃疡发生率100%，与人的慢性胃溃疡极相似，此种法造模成率高，重复性好，溃疡深浅可控，自愈时间长达60d左右。是一种规范且较常用的造模方法[9]。

本实验结果显示，蒙药阿那日-4散高中低剂量组和枸橼酸铋钾组与模型组相比较，均具有显著的统计学意义(P<0.01)，说明蒙药阿那日-4散和枸橼酸铋钾对胃溃疡的愈合均有明显的促进作用。

SOD是存在于生物内机制和防御自由基损伤的主要酶类之一。其功能是催化氧自由基的歧化反应，即将超氧阴离子自由基歧化为过氧化氢和氧气，消除超氧阴离子自由基的作用，从而消减过量的超氧阴离子对人体的损伤作用。NO在正常情况下，NO的正常分泌可以调节胃肠黏膜血流量，维持黏膜完整性和防御功能，而NO异常大量合成时与HP的感染有相关性。MDA是长链脂肪酸发生氧化作用后的终末产物，可作为氧化作用后的标志，它的含量变化可间接反映组织受自由基损伤的成程度。

本实验发现，蒙药阿那日-4散中剂量组大鼠血清SOD活动明显高于模型组(P<0.05)，可见中剂量的蒙药阿那日-4散可明显提高实验性胃溃疡大鼠血清中SOD 的活力、减少脂质过氧化反应、保护胃黏膜、促进溃疡愈合。蒙药阿那日-4散高、中、低剂量组大鼠血清NO 含量显著低于模型组(P<0.01)。蒙药阿那日-4散高剂量组大鼠血清NO含量显著低于枸橼酸铋钾组(P<0.01)。说明蒙药阿那日-4散减少NO生成，减轻NO对胃黏膜损伤；减少黏膜攻击和增强胃黏膜保护。蒙药阿那日-4散高、中、低剂量组大鼠血清MDA含量显著低于模型组(P<0.01)，说明蒙药阿那日-4 散能清楚实验性胃溃疡大鼠体内氧自由基的含量，抑制脂质过氧化反应，降低体内MDA含量，保护组织免受氧自由基损伤。

本实验通过大体标本，溃疡面积、血清SOD活力及NO、MDA含量进一步研究对比发现，蒙药阿那日-4散对大鼠实验性胃溃疡具有良好的治疗作用，推测其治疗机制可能与清除体内氧自由基含量，提高血清SOD活力，降低NO，MDA含量有关，NO异常大量合成时，可以加重细胞毒性作用，促进溃疡的发生，并提高NO 的异常合成与幽门螺旋杆菌的感染有相关性[11]。它给研究消化性溃疡的防治以诸多启迪。

[1]麻春杰，包·纳日斯，敖其尔.消化性溃疡的蒙医药研究概况[J].中国民族医药杂志，2007(9)：61

[2]先宏，吴可，孙存普.中药抗氧化活性的主要成分及其自由基清除作用[J].国外医学，中医中药分册，2003.25(3)：150

[3]李定格，张增敏.石榴皮水浸剂对大鼠胃酸分泌物和实验性胃溃疡作用的研究[J].中药药理与临床2003.19(6)：23-25

[4]马俊红，李圣爱.一氧化氮与胃溃疡[J].生理科学进展，1998.29(3)：260-262

[5]王欢，王秀兰，吴龙堂.蒙药阿那日-4散研究进展[J].中国中医学信息杂志，2009 ，16：86-87

[6]李荣，路冠茹，姜子涛.肉桂精油抗氧化性能及消除自由基能力的研究[J].食石科技，2010，35(2)：166-171

[7]张小超，陈鹏，何波，等.八位肉桂胶囊抗消化性溃疡作用实验研究[J].中成药，2013，35(10)：2259-2262

[8]王秀兰，崔平，等.白豆蔻的传统应用，化学成分及药理作用的研究概况[J].中国蒙医药，2014，12:50-54

[9]钟运声，李熙灿，谢学明，等.荜拨消除DPPH自由基能力的研究[J].辽宁中医药大学学报，2007 . 9(1)：144-145

[10]陈奇.中药药理研究方法学[M].第二版.人民卫生出版社，2006.

[11]林洁，王清丽.一氧化氮在消化性溃疡中的研究进展[J].华中医学杂志，2002(6)：324-326

△内蒙古自然基金项目2013MS1146