玫瑰花水煎剂对小鼠耐缺氧和抗疲劳的实验研究

刘华，何帅，黄芳俊，赵季军， 王明友，周芳名，买文丽

(1.川北医学院生理教研室；2.川北医学院机能中心；3.川北医学院2015级临床医学系；4.川北医学院2014级临床医学系，四川 南充 637000)

玫瑰花水煎剂对小鼠耐缺氧和抗疲劳的实验研究

刘华1,2，何帅3，黄芳俊3，赵季军3， 王明友3，周芳名4，买文丽1

(1.川北医学院生理教研室；2.川北医学院机能中心；3.川北医学院2015级临床医学系；4.川北医学院2014级临床医学系，四川 南充 637000)

目的观察不同浓度的玫瑰花水煎剂对小鼠耐缺氧和抗疲劳的影响。方法昆明小鼠共60只，随机分为空白对照组(蒸馏水)、玫瑰花水煎剂低剂量组(0.25 g/kg)、玫瑰花水煎剂高剂量组(0.50 g/kg)，灌胃给药28 d。检测各组小鼠常温常压耐缺氧时间、负重游泳时间、血中血红蛋白的含量和负重游泳后乳酸含量。结果与空白对照组相比，高、低剂量组常温常压耐缺氧时间延长，差异有统计学意义(P<0.05)；高、低剂量组小鼠负重游泳时间均延长，但低剂量组无显著性差异(P>0.05)，高剂量组有统计学意义(P<0.05)；高、低剂量组血红蛋白含量均增多，高剂量组差异有统计学意义(P<0.05)，低剂量组无显著性差异(P>0.05)；负重游泳后，高、低剂量组血乳酸含量均减少，高剂量组差异有统计学意义(P<0.05)，低剂量组无显著性差异(P>0.05)。结论玫瑰花水煎剂能明显提高小鼠耐缺氧和抗疲劳能力。

玫瑰花水煎剂；耐缺氧；抗疲劳

玫瑰花为蔷薇科蔷薇属多年生灌木植物玫瑰的花蕾，玫瑰花药用价值极高。历代本草均有玫瑰花在药用方面的记载,具有行气解郁、和血、止痛等功效，主治用于肝胃气痛、食少呕恶、月经不调、跌扑伤痛[1]。近年来研究证实玫瑰花具有清除自由基、抗氧化、抗肿瘤、抗病毒、扩张血管、解毒、利胆等作用[2-5]，可能与玫瑰花成分有关，玫瑰花富含黄酮和多酚类化合物、可溶性多糖和糖蛋白复合物[6]、氨基酸[7]以及多种微量元素[8]有关。但有文献报道[9-10]，玫瑰花中的多酚可提高小鼠机体运动耐力，延迟疲劳出现的时间，但是玫瑰花水煎液耐缺氧和抗疲劳的作用以及机制的研究较少，本课题通过观察玫瑰花水煎剂对小鼠常温常压耐缺氧时间、负重游泳时间、血中血红蛋白的含量和负重游泳后乳酸含量的影响，研究玫瑰花在人体抗疲劳和耐缺氧方面的药理价值，为其开发及利用提供可靠的实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物

昆明小鼠60只(健康级)，雄性，体重(20±2)g，鼠龄6周，购自川北医学院实验动物中心，合格证好：SOXK(川)2013-18，许可证号：SYXK(川)2013-076，饲养于通风清洁级动物房，标准鼠笼喂养，自由饮食，22～26 ℃，相对湿度50%～70%，通风良好。

1.2 药物与试剂

1.2.1 药物 玫瑰花，原产地新疆(湖南省博士康中医药股份有限公司提供)，净选玫瑰花，粉碎成粗粉，水煎提取，制成100%浓度(相当于1 mL含 l g 生药)的水煎液备用。

1.2.2 试剂 小鼠乳酸测定试剂盒(合肥莱尔科技有限公司,批号：201708)；小鼠血红蛋白测定试剂盒(合肥莱尔科技有限公司，批号：201708)；红细胞裂解液(上海桥星贸易有限公司, 批号：67057250)。

1.3 实验仪器

赛默飞Sorvall Legend micro 17微量离心机，产地德国；可控调温电炉；EMax Plus Microplate Reader酶标仪,Molecular Devices公司；游泳箱直径1.5 m×高0.5 m,成都泰盟科技有限公司。

1.4 实验方法

1.4.1 分组与给药 将60只小鼠随机分为正常对照组、低剂量组(0.25 g/kg)、高剂量组(0.50 g/kg)，每组20只。各剂量组连续灌胃28 d，每日1次。正常对照组给予等容积蒸馏水。

1.4.2 常温常压耐缺氧实验 末次给药30 min后，将3组小鼠每组10只，分别放入盛有5.0 g钠石灰、容量为500 mL的广口瓶内，加盖并瓶口用凡士林密封并记时， 观察并记录小鼠在瓶内的呼吸情况和死亡时间，死亡时间以胸廓起伏运动完全停止作为判断标准。

1.4.3 小鼠负重游泳实验 游泳箱加水至水深30 cm，水温保持在(25±1)℃。随机挑选每组10只小鼠，用质量为小鼠体重10%的铅皮固定于小鼠尾根部，放于水池内让其自由游泳，记录小鼠从游泳开始至下沉时间(将小鼠口鼻沉入水下6 s，不能浮出水面作为力竭指标)，作为其负重游泳时间。

1.4.4 小鼠血乳酸含量的测定 小鼠负重游泳3 min后，腹腔注射1%肝素(0.2 mL)，5 min 内摘眼球取抗凝血于500 μL于1 mL EP管内。置于离心机中以3 000 r/min的转速离心30 min，分离血浆和血细胞。按试剂盒说明书测定血浆中乳酸的含量。

1.4.5 小鼠血红蛋白含量的测定 往1.4.4中血细胞内加入8倍体积的红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解 2 min。然后将其置于离心机以3 000 r/min的转速离心5 min，取红色上清液。按试剂盒说明书测定血液中血红蛋白的含量。

1.5 统计学分析

2 结果

2.1 小鼠一般情况

实验喂养期间各组小鼠表现状况良好，未观察到任何异常，小鼠正常生长。

2.2 玫瑰花水煎剂对小鼠常温常压耐缺氧的影响

常温常压耐缺氧实验结果显示，高、低剂量组的耐缺氧时间均高于空白组，其差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 玫瑰花水煎剂对小鼠温常压耐耐缺氧的影响(n=10)

*P<0.05，与空白组比较。

2.3 玫瑰花水煎剂对小鼠抗疲劳的影响

由表2可以看出，与空白组对照，灌服玫瑰花水煎液的高、低剂量组负重游泳时间均高于空白组，其中高剂量组有统计学意义(P<0.05)，低剂量组无显著性差异(P>0.05)。血乳酸检测结果显示，高、低剂量组血中的乳酸含量均低于空白组，高剂量组有统计学意义(P<0.05)，低剂量组无显著性差异。

表2 玫瑰花水煎剂对小鼠抗疲劳指标的影响(n=10)

*P<0.05，与空白组比较。

2.4 玫瑰花水煎剂对小鼠血红蛋白含量的影响

血红蛋白检测结果显示，高、低剂量组血中的血红蛋白均高于空白组，高剂量组有统计学意义(P<0.05)，低剂量组无显著性差异(P>0.05)，见表3。

表3 玫瑰花水煎剂对小鼠血红蛋白含量的影响(n=10)

*P<0.05，与空白组比较。

3 讨论

疲劳是一种普遍的生理现象，主要包括精神疲劳和躯体疲劳两种。在我国因为过度疲劳致病甚至致死的病例数逐年增加，全球调查显示35%人群处于疲劳状态。在运动过程中，当生理过程不能继续维持在特定水平上或不能维持预订的运动强度时，既称之为运动性疲劳。运动耐力的提高是抗疲劳能力加强最直接的表现[11]，小鼠疲劳状况和运动耐力的常用实验方法为小鼠负重游泳实验。本研究以非耐力训练的小鼠为研究对象，实验结果表明，玫瑰花水煎剂高、低剂量组均不同程度地延长小鼠的负重游泳时间，高剂量组可以把负重游泳时间从(1 085±94)s提高(1 260±119)s，说明玫瑰花水煎剂可以提高小鼠的运动耐力，具有良好的抗疲劳作用。剧烈的运动将导致机体相对缺氧、糖酵解加快，进而产生大量的乳酸，乳酸过多导致机体内环境的破坏，诱发疲劳，因此，乳酸可作为反映机体的有氧代谢能力和疲劳程度的重要指标[12]。本研究显示玫瑰花水煎剂可以降低小鼠血液中的乳酸含量，从而减轻乳酸的堆积。我们推测，玫瑰花水煎剂可通过降低乳酸生成来降低肌肉中的氢离子浓度，恢复钙离子的生理活性，提升肌肉的收缩力量，对抗疲劳。

缺氧是一种紧张性刺激，可引起机体产生各种应激反应，最终导致对生命活动的重要器官心、脑的危害而死亡，因此对缺氧耐受的研究具有十分重要的意义。常用的模型是小鼠常压缺氧模型，实验显示，玫瑰花水煎液高、低剂量组在常压下的缺氧存活时间均延长，说明起有显著的抗常压缺氧的作用。并且还证实高、低剂量组血红蛋白的含量均增加，其中高剂量组有显著性提高。

血红蛋白的功能是增加血液中氧的携带量，可延长小鼠在常压缺氧条件下的存活时间。本实验结果显示，玫瑰花水煎液可提高高、低剂量组血红蛋白的含量，其中高剂量组有显著性提高，其机制与增加氧的供给,从而增强组织细胞的有氧氧化能力，使组织内三磷酸腺苷的浓度升高，减少糖酵解，降低血中乳酸含量有关[13]。同时，氧的供给增加还有助于加速乳酸的清除，也可以对抗疲劳。

因此本研究认为，玫瑰花水煎剂对通过延长小鼠负重游泳时间和常压耐受存活试剂，降低乳酸水平，具有耐缺氧和抗疲劳的作用，其作用机制有待于进一步探讨。

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Studyontheanoxia-resistantandanti-fatigueeffectofRosewaterdecoctiononmice

LIU Hua1,2,HE Shuai3,HUANG Fang-jun3,ZHAO Ji-jun3,WANG Ming-you3,ZHOU Fang-ming4，MAI Wen-li1

(1.PhysiologyDepartmentofNorthSichuanMedicalCollege;2.FunctionCenterofNorthSichuanMedicalCollege;3.DepartmentofClinicalMedicine,level2015,NorthSichuanMedicalCollege;4.DepartmentofClinicalMedicine,level2014,NorthSichuanMedicalCollege,Nanchong637000,Sichuan,China)

Objective：To investigate the anti-hypoxia and anti-fatigue effect of Rose water decoction in mice.Methods60 Kunming mices were randomly divided into high-dose group(0.50 g/kg ) ，low-dose group ((0.25 g/kg) and blank control group,and administered with drugs at certain doses by gastric perfusion for 28 d.The time of hypoxia tolerance and the time of weight-bearing swimming were measured in each group of mice.The content of hemoglobin in blood and the content of lactic acid after weight swimming were detected.ResultsCompared with the blank group,the high and low dose group had a significant difference in the prolonged hypoxia-resistance time in normal temperature(P<0.05).The weight-bearing swimming time of mice in high and low dose groups was prolonged,but there was no significant difference in the low dose group (P>0.05),and the high dose group had statistical significance (P<0.05).The hemoglobin content of high and low dose group was increased,the high dose group had significant difference (P<0.05),and the low dose group had no significant difference (P>0.05).The content of blood lactic acid decreased after weight-bearing swimming,and the change in high dose group was more than the low dose group.ConclusionThe decoction of rose water can remarkably improve the ability of anti-fatigue and anoxia-resistant in mice.

Rose water decoction；Anti-fatigue；Anoxia-resistant

10.3969/j.issn.1005-3697.2017.06.011

四川省教育厅项目(16ZB0238)；省级大创课题(201610634050)；川北医学院校级重点项目(CBY11-A-ZP17)

2017-06-30

刘华(1974-)，女，硕士，副教授。

买文丽，E-mail:4209991160@qq.com

时间： 2017-12-27 16∶44网络出版地址http://kns.cnki.net/kcms/detail/51.1254.R.20171227.1643.022.html

1005-3697(2017)06-0849-03

R932

A

(学术编辑：郑倩)