阿米卡星及枸橼酸钠干粉抗凝在假性血小板减少中的应用与价值探究

王励 黄瑞英

阿米卡星及枸橼酸钠干粉抗凝在假性血小板减少中的应用与价值探究

王励 黄瑞英

目的 分析假性血小板减少中阿米卡星及枸橼酸钠干粉抗凝的应用效果及临床价值。方法 采集5例假性血小板减少患者的枸橼酸钠抗凝血标本（2管，分别为水剂和干粉枸橼酸钠抗凝）、EDTA-K2抗凝血标本（2管，其中1管在采血前加入阿米卡星），使用全自动血细胞分析仪在5 min内、15 min、0.5 h、1.0 h、2.0 h、3.0 h进行血小板计数检测。结果 加入阿米卡星的EDTA-K2抗凝血标本中，有4例患者的血小板计数结果正常；1例加或未加阿米卡星的EDTA- K2抗凝血标本，时间延长，血小板计数逐渐升高，但仍旧存在凝集现象，未在正常范围值内；枸橼酸钠干粉抗凝的血标本，4例血小板计数结果正常。结论 EDTA-K2抗凝血加入阿米卡星能够解离血小板聚集，枸橼酸钠干粉抗凝血标本亦可作为处理EDTA依赖的假性血小板减少情况。

乙二胺四乙酸；阿米卡星；枸橼酸钠干粉；假性血小板减少

临床上，全自动血细胞分析仪的广泛使用，使血常规检查更加迅速和准确。抗凝剂乙二胺四乙酸盐（EDTA）是ICSH认定的适用于全自动血细胞分析仪检测的抗凝剂。实际使用过程中，容易引起EDTA依赖性假性血小板减少症[1]。假性血小板减少患者的血小板计数结果与实际值存在偏差，可导致误诊、误治现象发生。因此，寻求有效手段对假性血小板减少进行处理十分重要。众多学者在研究中发现，氨基糖苷类抗菌药物可以阻止、解离EDTA依赖性假性血小板减少症患者的血小板聚集现象。同时，使用枸橼酸钠（干粉）抗凝也适用该类患者血小板计数。本试验以我院2015年1月—2016年8月收治的假性血小板减少患者为对象，通过对加入阿米卡星的EDTA-K2抗凝血标本的研究，分析了阿米卡星解离血小板聚集的效果。通过实验，发现枸橼酸钠（干粉）可用于血小板计数方面，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2015年1月—2016年8月于我院就诊的5例假性血小板减少患者进行研究，血小板计数减少，血小板直方图异常，仪器提示有凝集，涂片镜检显示血小板大量聚集，纤维蛋白原、凝血酶原时间、部分凝血活酶时间均在参考范围内[2]，均无血小板减少的相关体征。男性2例，女性3例；年龄34～62岁。

1.2 仪器与试剂

Syemex XS-1000i全自动血液分析仪及配套试剂和质控品，质量控制在控。EDTA-K2抗凝真空采血管、109 mmol/L枸橼酸钠抗凝真空采血管，肝素真空采血管由江西长青医疗科技有限公司提供。瑞氏-吉姆萨染液，由珠海贝索生物技术有限公司提供。硫酸阿米卡星0.1 g/ml，由遂成药业股份有限公司提供。

1.3 方法

12.8 mg/管枸橼酸钠（干粉）抗凝管的制备：109 mmol/L枸橼酸钠抗凝（1 ∶ 4）真空采血管烘干。

分别采集1管12.8 mg/管枸橼酸钠（干粉）抗凝血标本500 μl，1管 109 mmol/L枸橼酸钠（1 ∶ 9）抗凝血标本和 2管EDTA-K2抗凝血标本各2 ml。在采血前，1管EDTA-K2抗凝血标本加入阿米卡星，血浓度为6.5 mg/ml；另1管EDTA-K2抗凝血标本未加入阿米卡星，采用XS-1000i全自动血液分析仪在5 min内、15 min、0.5 h、1.0 h、2.0 h、3.0 h进行血小板计数检测；加入阿米卡星的EDTA-K2抗凝血标本在5 min内、15 min、0.5 h、1.0 h、2.0 h、3.0 h采用XS-1000i全自动血液分析仪测定血小板计数；各管血涂片镜检。在5 min内、15 min、0.5 h、1.0 h、2.0 h、3.0 h，采用XS-1000i全自动血液分析仪对枸橼酸钠（水剂）抗凝血、枸橼酸钠（干粉）抗凝血进行血小板计数检测，血细胞涂片，染色处理，并在显微镜下观察。

1.4 判断标准

血涂片进行瑞氏-吉姆萨染色，利用显微镜进行观察，镜下见血小板聚集，或/和有血小板卫星现象表明为血小板凝集。根据《全国临床检验操作规程》[3]进行操作，以该结果作为本次研究的参考值。

2 结果

2.1 EDTA-K2抗凝血的血小板计数结果

采血后，加有阿米卡星的EDTA-K2抗凝管在不同时间段内，血小板计数结果为：编号为1～4的患者血小板计数正常；编号为5的患者血小板计数逐渐升高，但仍旧存在凝集现象，未在正常范围值内。未加入阿米卡星EDTA-K2抗凝管的血小板在各时间段内，血涂片镜检显示血小板聚集，编号为1、2、4的患者随时间延长，血小板计数逐渐减少。见表1、表2。

2.2 枸橼酸钠抗凝管的血小板计数结果

液体抗凝剂的抗凝剂与血液之比为1 ∶ 9，表3各血小板计数结果已乘以1.1进行换算。血涂片镜检均显示血小板凝集。枸橼酸钠（干粉）抗凝管在不同时间段内，血小板计数结果为：编号为1～4的患者血小板计数正常；编号为5的患者血小板计数逐渐减低，镜下存在凝集现象，未在正常范围值内。见表3、表4。

2.3 手工计数结果

经检测显示，编号为1的患者手工血小板计数为250×109/L，编号为2的患者手工血小板计数为229×109/L，编号为3的患者手工血小板计数为344×109/L，编号为4的患者手工血小板计数为217×109/L，编号为5的患者手工血小板计数为183×109/L。

2.4 血涂片分析

采血5分钟内，EDTA-K2抗凝管涂片染色镜检，编号为1～5的患者血涂片显示血小板聚集。编号为1、2和4的患者血小板聚集随时间的延长而减少。

EDTA-K2抗凝管加入阿米卡星后，编号为1～4血小板计数正常，血涂片显示正常；时间延长，编号为5的患者血小板聚集逐渐升高，血涂片显示血小板仍有凝集现象。

枸橼酸钠（水剂）抗凝管的血涂片显示有不同程度凝集，而且随时间延长，凝集有严重现象。

枸橼酸钠（干粉）抗凝管的血涂片显示，编号为1～4的患者血小板计数结果基本正常，血小板无聚集，编号为5的患者血小板计数结果逐渐降低，血涂片有凝集现象。

3 讨论

假性血小板减少的原因较多，主要与抽血不当、EDTA-K2依赖性、冷凝集、药物等因素密切相关，其中EDTA-K2依赖性十分常见。本实验室中假性血小板减少症的发生较为少见，与1969年国外学者第一次报道的结果相近，该报道指出[4]EDTA依赖性血小板减少症的发生率为0.07%～2.00%。随着血小板功能研究的深入，临床总结EDTA依赖性假性血小板减少症发生的因素主要如下：抗凝温度和抗凝时间，时间延长，血小板聚集明显，血小板计数减少。中药、抗生素、奥氮平等药物对EDTA依赖性假性血小板减少症有一定影响。部分疾病治疗后，血小板凝集现象也会消失，说明EDTA依赖性假性血小板减少症与患者所患疾病的严重程度及是否接受治疗有关。全自动血细胞分析仪的原理是依赖于细胞大小，血小板在体外发生聚集现象时，血细胞分析仪会将聚集的血小板误认为是红细胞或白细胞，因而对血小板计数结果产生影响，并出现漏诊或误诊情况。

EDTA-K2依赖性的发生机制比较复杂，有研究[5]认为与血小板表面存在隐匿性抗原有关，存在EDTA时，血小板形态会发生变化，使其表面的隐匿性抗原的构象改变，与自身抗体结合，可激活花生四烯酸、磷脂酶A、二磷酸腺苷等活性物质。活性物质会促使血小板纤维蛋白受体活化，导致纤维蛋白和血小板聚集。亦有学者指出[6]：EDTA 抗凝血使血小板膜表面抗原的抗体增加，造成抗原抗体反应发生；由EDTA修饰的血小板膜表面抗原与血小板表面带负电荷的磷脂抗体结合，即出现血小板凝集现象；血小板糖蛋白GPa与GPb有种单克隆抗体，与EDTA 抗凝剂相遇时会导致血小板出现凝集反应。临床研究及实践表明[7]，氨基糖苷类抗菌药物可以抑制、解离血小板聚集，避免假性血小板减少症的发生，而氨基糖苷类抗菌药物中，阿米卡星的解离能力最为有效，高浓度阿米卡星对多种抗凝剂依赖性血小板聚集有着较强的抑制和解离功效。

表1 EDTA-K2抗凝管加入阿米卡星后的血小板计数结果（×109/L）

表2 未加入阿米卡星EDTA-K2抗凝管的血小板计数结果（×109/L）

表3 枸橼酸钠（水剂）抗凝管的血小板计数结果（×109/L）

表4 枸橼酸钠（干粉）抗凝管的血小板计数结果（×109/L）

本次研究中，加入阿米卡星的EDTA-K2抗凝血标本中，有4例患者的血小板计数结果正常；1例加或未加阿米卡星的EDTA-K2抗凝血标本，时间延长，血小板计数逐渐升高，但仍旧存在凝集现象，未在正常范围值内；枸橼酸钠干粉抗凝的血标本，4例血小板计数结果正常。有研究报道提出[8]，使用枸橼酸钠（干粉）抗凝管抗凝浓度为12.8 mg/L，采血量在200～800 μl时，在一定程度上可以纠正EDTA-K2依赖性假性血小板减少症。枸橼酸钠（干粉）治疗有效而枸橼酸钠（水剂）治疗无效可能是干粉浓度较高，而血小板激活程度随着枸橼酸钠浓度升高而增加。

临床上，当血小板计数减少与临床不相符时，建议采取如下措施解决问题：血涂片显示血小板聚集时，在排除采血不当因素后，加入血浓度为6.5 mg/ml的阿米卡星进行检测，仔细观察血涂片变化状况，血小板聚集消失，对该结果进行上报；血小板仍有聚集，使用枸橼酸钠（干粉）抗凝管抽血，进行检测，同时涂片染色观察血小板分布，血小板计数结果会更加准确。此外，一部分标本在使用阿米卡星、枸橼酸钠后未能解决的，如本试验中，编号为5的患者，解决如下：可以让其在机旁采血，立即上机进行检测；含有EDTA-K2成分的全自动血液分析仪的配套稀释液，可用0.9%生理盐水代替配套的稀释液，按照一定比例稀释后，尽快上机操作；手工计数不能解决的，可对血涂片中的血小板数量进行估算，并在报告中注明。

总之，阿米卡星能够有效解离血小板聚集，在假性血小板减少中，阿米卡星的解离作用最佳，不仅可以减少重复抽血造成的成本浪费，还能进一步减少患者遭受的痛苦。使用枸橼酸钠（干粉）抗凝管也有一定效果，但血涂片显示血小板聚集时，需要重新进行抽血。因此，假性血小板减少中，两者的应用价值较高。

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Amikacin and Sodium Citrate Powder of Anticoagulant Tube in the Application of Pseudo Thrombocytopenia and Value

WANG Li HUANG Ruiying Clinical Laboratory Department, Guiping Hospital of Traditional Chinese Medicine, Guiping Guangxi 537200, China

Objective To analyze the application effect and clinical value of the anticoagulant of sodium amitacin and sodium citrate in pseudo thrombocytopenia. Methods 5 patients with pseudo thrombocytopenia and sodium citrate anticoagulant blood specimens were collected (2 tubes,water and dry sodium citrate anticoagulation, respectively), EDTA-K2anticoagulant blood specimens (2 tubes, before blood collection, one of which joined amikacin). The automatic blood cell analyzer was used in 5 min, 15 min, 0.5 h, 1 h, 2 h, 3 h to detect the platelet count. Results The platelet count was normal in 4 patients in the EDTA-K2anticoagulant specimens. 1 case of EDTA-K2anticoagulant specimens with or without amikacin, time extended and platelet count gradually increased, but there was still agglutination, which was not in normal range. Blood samples of sodium citrate dry powder, 4 cases of platelet count were normal.Conclusion EDTA - K2anticoagulant join amikacin solution from the platelet aggregation, sodium citrate powder as dealing with EDTA anticoagulant blood specimens can be rely on pseudo thrombocytopenia.

ethylenediamine tetraacetic acid; amikacin; sodium citrate powder; pseudo thrombocytopenia

R558

A

1674-9316（2017）27-0124-03

10.3969/j.issn.1674-9316.2017.27.067

广西省桂平市中医医院检验科，广西 桂平 537200