高效液相色谱法测定食品中的维生素B6的含量

2018-01-04李丹徐骏潘明杰

益寿宝典 2017年32期

李丹，徐骏，潘明杰

维生素B6是吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺的总称，属于水溶性维生素。维生素B6可促进原血红素及核酸的合成，用于预防各类神经、皮肤相关性疾病。因维生素B6需从食物中摄取，故食物中维生素B6的检测有着十分重要的意义。高效液相色谱法测定食品中的维生素B6的含量，具有分离效果好、分析速度快、灵敏度高、所用时间更短、重现性好且结果准确可靠等特点。该检测方法的灵敏度、精密度、准确度、回收率等技术参数均符合食品样品测试的要求。笔者汇总实验相关内容与数据，报道如下。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

1.1.1 实验试剂：吡哆醇（纯度99.9%，Dr.公司）、吡哆醛（纯度99.5%，INC公司）、吡多胺（纯度99.9%，Trc公司）；辛烷磺酸钠、甲醇为色谱纯；三乙胺、冰乙酸为优级纯。

1.1.2 实验仪器：液相色谱仪：岛津/日本，20AT，液相色谱仪—荧光检测器；电子分析天平：梅特勒—托利多/瑞士，BS224，感量0.1 mg。

1.1.3 试验用样品：某品牌较大婴幼儿乳粉。

1.2 溶液配制和样品前处理方法

1.2.1 色谱条件：色谱柱： Aglient–XDB C18，5μm ，4.6×250 mm；流动相：甲醇:缓冲盐溶液（准确称取辛烷磺酸钠2.00 g、三乙胺2.5 mL加超纯水溶解并定容至1000 mL，用冰乙酸调节pH至3.0±0.1）=20:80；流速：1.0 mL/min；检测波长：激发波长293 nm，发射波长395 nm；进样量：10μL。

1.2.2 标准溶液配制[1]：（1）吡哆醇储备液（1.0mg/mL）:准确称取10 mg吡哆醇标准品，用流动相溶解定容至10mL。（2）吡哆醛储备液（1.0mg/mL）:准确称取10 mg吡哆醛标准品，用流动相溶解定容至10mL。（3）吡哆胺储备液（1.0mg/mL）:准确称取10 mg吡哆胺标准品，用流动相溶解定容至10mL。（4）维生素B6中间液（10μg/mL）：分别吸取吡哆醇、吡哆醛、吡多胺的标准储备液各0.10mL，用流动相定容至10mL。（5）维生素B6工作液（10μg/mL）：分别吸取维生素B6中间液0.10mL、0.20mL、0.40mL、0.60mL、1.00mL，用流动相定容至10mL。该标准系列浓度分别为0.10μg/mL、0.20μg/mL、0.40μg/mL、0.60、1.00μg/mL。

1.2.3 样品处理[2]：（1）固体样品：称取混合均匀的固体试样约10g于100mL碘量瓶中，加入约30mL超纯水，混匀。（2）液体样品：称取混匀的液体样品10g于100mL碘量瓶中（注：含淀粉样品需加入0.5g淀粉酶，混匀后充入氮气，盖上瓶塞，置50℃培养箱内约30min）。

用0.1mol/L的盐酸或氢氧化钠溶液调节上述试样溶液的pH值至4.5±0.1，放入数控超声波清洗器中超声10min。然后将试样溶液转移至50mL比色管中，用流动相定容至50mL，静置10min，取上清液经0.45μm水系微孔过滤膜过滤至进样瓶中待测。