紫外分光光度法测定芦荟软胶囊中总蒽醌的含量

王洪健，许银叶，罗小宝

总蒽醌为游离蒽醌、结合蒽醌、蒽酮、鞣质、糖等蒽醌类化合物的总称。常见的蒽醌类化合物母核上通常有酚羟基助色基团，绝大多数蒽醌化合物均为有色晶体，颜色深浅与取代的助色基团有关，助色基团越多，颜色越深。颜色呈现为黄、橙、棕红色和紫红色等。故以前的蒽醌类化合物绝大部分用于染料方面[1]。蒽醌类化合物是天然醌类化合物中数量最多也是最重要的一类化合物[2]，在自然界植物中分布很广[3]，主要分布于百合科的芦荟，豆科的决明子[4]、番泻叶，茜草科的茜草、鼠李，廖科的大黄、何首乌等[5]。此外，还存在于低等植物的代谢产物中。芦荟属多年生常绿肉质植物，含有丰富的蒽醌类化合物，如芦荟大黄素、芦荟大黄素苷，均为芦荟中主要活性成分，用途十分广泛。随着研究的深入，芦荟抗菌消炎、健胃、减肥等功效逐渐显现[6]，这与芦荟中含有的总蒽醌成分具有抗氧化、抗衰老、促进免疫调节等作用有关。但蒽醌类成分的摄入亦会引发如消化系统、泌尿系统、生殖系统、免疫系统、呼吸系统的损害等一系列不良反应[7-8]，这与总蒽醌的含量高低有关。市售的保健食品芦荟软胶囊深受消费者喜爱，总蒽醌则是芦荟软胶囊中的主要有效成分，其含量必须控制在安全食用范围内，才可保证芦荟软胶囊的食用安全性及质量，故对芦荟中总蒽醌含量的研究逐渐受到国内外学者的关注。本研究建立总蒽醌的含量测定方法，采用紫外分光光度法测定芦荟软胶囊中总蒽醌的含量，旨在通过测定芦荟软胶囊中总蒽醌的含量，反映其有效成分的含量，获得良好的分析结果。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 仪器与试药

1.1.1 仪器：TU-1810紫外可见分光光度计（北京普析）；ME55电子天平（梅特勒—托利多）。

1.1.2 试药：1,8-二羟基蒽醌标准品（中国药品生物制品检定所提供）；甲醇、过氧化氢（30%）、盐酸、醋酸镁试剂均为分析纯。

1.2 方法

1.2.1 标准溶液的配制：精密称取1,8-二羟基蒽醌标准品10.00mg，用醋酸镁—甲醇溶解定容至25mL，其中醋酸镁—甲醇溶液浓度为0.5g/100mL。

1.2.2 标准曲线的建立：最大吸收波长的确定：用紫外分光光度计在300～600nm下扫描，样品及标准品均在510nm处有最大吸收波长，故确定510nm为最大吸收波长，这与文献报道一致。

标准曲线的制备：用移液管吸取上述标准溶液，加入醋酸镁—甲醇溶液，稀释配制成浓度为20、40、80、100、150、200μg/mL的标液。以对应的醋酸镁—甲醇溶液为空白对照，分别测定510nm波长处的吸光度。以浓度为纵坐标，吸光度为横坐标，绘制标准曲线。

1.2.3 样品的处理：取样品1g，精密称定，置于150mL回流瓶中，加入50mL甲醇，90℃水浴回流1h，冷却至室温后转移到100mL容量瓶，并用甲醇定容到刻度。过滤弃去初滤液，取10mL滤液，加入到150mL回流瓶，水浴蒸干，加入20mL水溶解，加入3.0mL 30%过氧化氢，0.50mL盐酸/水（1:1），90℃水浴回流30min，冷却至室温，转移至125mL分液漏斗中，加入乙醚20mL提取2～3次，10mL水洗2次（弃水液），取醚层挥干，残渣加醋酸镁—甲醇液溶解定容到100mL。测定510nm波长处的吸光度。从标准曲线上读出样品溶液中总蒽醌的含量，计算，即得。

2 结 果

2.1 最佳检测波长的选择及标准曲线线性的绘制 紫外扫描结果显示，总蒽醌在510nm 处的吸收值最大，即510nm为总蒽醌的特征吸收峰值，确定检测波长为510nm。以总蒽醌浓度和吸光度绘制标准曲线。线性回归方程：y＝204.24x+0.1182，R2＝0.9995，提示总蒽醌浓度在20～200μg/mL范围内，总蒽醌的浓度与吸光度之间具有良好的线性关系。见图1。

图1 总蒽醌标准曲线Fig.1 Standard curve of Total Anthraquinone

2.2 稳定性试验 取样品1g，精密称定，按照样品的处理方法制备样品溶液。每隔30min精密吸取样品溶液3mL，测定其吸光度，共测定3h。结果显示，样品溶液显色后，在3h内稳定，其相对标准偏差RSD为0.37%，稳定性良好。

2.3 精密度试验 取样品1g，精密称定，按照样品的处理方法制备。精密吸取样品品溶液3mL，样品平行测定6次。其RSD为0.56%，提示该方法精密度良好。

2.4 重复性试验 取6份同批次样品1g，精密称定，按照样品的处理方法制备制备6份样品溶液。分别精密吸取6份供试品溶液3mL，依法测定。计算平均含量为37.85mg/100g，RSD为0.42%，提示该方法重复性较好。

2.5 回收率试验 称取已知含量样品1g，精密称定，进行3个水平的加标试验，每个水平做3次平行试验，按1.2.3中方法处理，分别测定其总蒽醌含量。结果显示，回收率为95.00%～102.50%，平均回收率为99.17%，RSD为2.27%。可满足分析研究的需要，对芦荟软胶囊中总蒽醌提取有很好的适用性。见表1。

表1 样品加样回收率结果Table 1 The results of sample recovery rate

2.6 样品测定 取6批芦荟软胶囊样品，分别进行测定其总蒽醌含量。结果显示，芦荟软胶囊中总蒽醌含量在0.34～0.41mg/g范围内，其RSD范围0.95%～2.03%，对芦荟软胶囊中总蒽醌测定有良好的适用性。见表2。

表2 样品中总蒽醌含量测定结果Table 2 The results of determination of total anthraquinone content in samples

3 讨 论

本研究采用紫外分光光度法测定芦荟软胶囊中总蒽醌的含量，总蒽醌在20～200μg/mL(R2=0.9995)范围内呈良好的线性关系，平均回收率为99.17%，RSD为2.27%。应用于检测实际样品，其RSD范围0.95%～2.03%，检测条件稳定，加标回收率高，变异系数较小，其精密度和重复性均较好，且样品前处理简单，便于操作，成本低廉，故此方法可用于检测芦荟软胶囊中总蒽醌的含量，为1种理想的含量测定方法，为芦荟软胶囊的生产提供可靠的实验数据和科学依据。同时利于加强芦荟软胶囊保健品的质量安全监督。值得推广应用。

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