ERCC1联合TYMS检测对晚期胃癌化疗的指导意义

陆丽娜 蒋国法 李岗秀 李胜安 陈慧 黄伟

ERCC1联合TYMS检测对晚期胃癌化疗的指导意义

陆丽娜 蒋国法 李岗秀 李胜安 陈慧 黄伟

目的 通过检测胃癌组织中切除修复交叉互补基因1（ERCC1）、胸苷酸合成酶基因（TYMS）mRNA的表达水平，分析其对化疗效果及预后的指导意义。方法 选取晚期胃癌患者60例，均给予氟尿嘧啶、亚叶酸钙联合奥沙利铂进行化疗。采用分支DNA-液相芯片技术定量检测胃癌组织ERCC1、TYMS mRNA表达水平，并将患者分为ERCC1和TYMS共同中低表达组、ERCC1中低表达及TYMS高表达组、ERCC1高表达及TYMS中低表达组。随访3年，观察并比较3组患者的化疗有效率及生存率。结果 3组患者化疗有效率分别为62.86%（22/35）、35.71%（5/14）、36.36%（4/11），差异无统计学意义（P＞0.05）；中位生存时间分别为20、10、10.5个月，1年生存率分别为65.71%、38.46%、40.00%，2年生存率分别为37.14%、0.00%、10.00%，3年生存率分别为14.29%、0.00%、0.00%，ERCC1和TYMS共同中低表达组患者1、2、3年生存率均高于另外两组（均P＜0.05）。结论 晚期胃癌患者应用氟尿嘧啶、亚叶酸钙、奥沙利铂联合化疗，ERCC1和TYMS共同中低表达的患者生存率优于仅其中1个基因高表达的患者，而化疗效果差异尚不明显。

胃癌 液相芯片技术化疗 ERCC1 TYMS

胃癌是最常见的消化道肿瘤之一，数据显示国人胃癌发病率为31.38/10万，病死率高达22.13/10万[1]。多数胃癌患者确诊时已是癌症晚期，无法行根治性手术，全身化疗成为其主要的治疗措施。然而，晚期胃癌化疗有效率低于50%，5年生存率低于7%，临床疗效十分有限[2]。如何预测化疗效果，减少无效化疗及不良反应的发生是临床关注的焦点。研究发现，胃癌化疗效果除与药物作用机制有关外，还与药敏相关基因有密切关系[3]。切除修复交叉互补基因1（excision repair cross complement 1，ERCC1）是核苷酸切除修复系统中的关键基因，是奥沙利铂敏感性的生物标志[4]，ERCC1低表达的胃癌患者对奥沙利铂化疗敏感[5-6]。胸苷酸合成酶基因（thymidylate synthase，TYMS）编码的胸苷酸合成酶是肿瘤生长的重要因子，与胃肠肿瘤均有密切关系[7]，TYMS高表达与患者对化疗的敏感性及预后均存在负相关[8]。基于此，本研究联合检测胃癌组织中ERCC1、TYMS mRNA的表达水平，分析其对化疗效果及预后的指导意义，以期为晚期胃癌个体化化疗提供参考，现报道如下。

1 对象和方法

1.1 对象 选取2013年1月至2014年3月本院消化内科收治的晚期胃癌患者60例，其中男34例，女26例；年龄40～75岁，中位年龄65岁。患者均经胃镜活检病理确诊为胃癌，肿瘤分期参照2010年美国肿瘤联合会（AJCC）胃癌TNM分期标准。纳入患者均无重要脏器功能损害，预计生存期≥6个月。本研究经医院医学伦理委员会批准，患者及家属知情同意并签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1化疗方案 患者均给予氟尿嘧啶、亚叶酸钙联合奥沙利铂进行化疗[13]。奥沙利铂（江苏恒瑞医药股份有限公司，国药准字：H20000337）130 mg/m2静脉滴注，第1天给药；氟尿嘧啶（上海旭东海普药业有限公司，国药准字：H31020593）750mg/m2静脉滴注，第 1～5天给药；亚叶酸钙（江苏恒瑞医药股份有限公司，国药准字：H20000584）200 mg/m2静脉滴注，第 1～5 天给药；3周为1个周期。每例患者至少完成2个周期。

1.2.2 检测胃癌组织ERCC1、TYMS mRNA表达水平采用分支DNA-液相芯片技术定量检测胃癌组织ERCC1、TYMS mRNA表达水平。具体方法：将患者病理活检组织样本置于匀浆缓冲液中混匀，对样本进行裂解处理，离心后吸取上清液。将配制的mRNA固定液加入杂交板，将上清液加入杂交板中后孵育，已便捕获样本mRNA。通过离心及真空抽滤装置清理杂交板中多余液体并洗涤。将标记探针工作液加入滤板并孵育，使mRNA信号放大，再次抽真空并洗涤后用Luminex200TM系统（美国Luminex公司）检测，得出每个样本的荧光值。将所得原始荧光值予以校正和均一化处理后得到netMFI值（以百分数表示），根据netMFI值将ERCC1、TYMS mRNA表达水平分为高、中、低3类，低表达指netMFI值＜25%，中表达指25%≤netMFI值≤75%，高表达指netMFI值＞75%。根据ERCC1、TYMS mRNA表达水平将患者分为3组，分别为ERCC1和TYMS共同中低表达组、ERCC1中低表达及TYMS高表达组、ERCC1高表达及TYMS中低表达组。

1.3 疗效评价 随访3年，观察并比较3组患者的化疗有效率及生存率。疗效评判标准：（1）完全缓解：所有靶病灶完全消失。（2）部分缓解：所有靶病灶长径总和减少≥30%。（3）疾病稳定：变化介于完全缓解和部分缓解之间。（4）疗效不佳或疾病进展：所有靶病灶长径总和增加≥20%，并且长径总和增加的绝对值≥5mm，或出现新的病灶。完全缓解及部分缓解视为有效，疾病稳定及疗效不佳或疾病进展视为未缓解。

1.4 统计学处理 应用SAS 9.3统计软件。计数资料以频数和构成比表示，组间比较采用χ2检验；采用Kaplan-Meier法估计生存率并绘制生存曲线，生存率的比较采用log-rank检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 患者胃癌组织ERCC1、TYMS mRNA表达情况 本组患者胃癌组织ERCC1 mRNA高、中、低表达分别为11例（18.33%）、27例（45.00%）、22例（36.67%）；TYMS mRNA高、中、低表达分别为14例（23.33%）、32例（53.33%）、14例（23.34%）。ERCC1和TYMS共同中低表达组患者35例（58.33%），ERCC1中低表达及TYMS高表达组14例（23.33%），ERCC1高表达及TYMS中低表达组11例（18.33%）。

2.2 3组患者化疗有效率比较 ERCC1和TYMS共同中低表达组化疗有效率为62.86%（22/35），ERCC1中低表达及TYMS高表达组化疗有效率为35.71%（5/14），ERCC1高表达及TYMS中低表达组化疗有效率为36.36%（4/11）。3组患者化疗有效率比较差异无统计学意义（P＞0.05）。

2.3 3组患者生存率比较 患者全部完成3年随访，无失访病例。3组患者生存曲线比较见图1。

图1 3组患者生存曲线比较

由图1可见，ERCC1和TYMS共同中低表达组、ERCC1中低表达及TYMS高表达组、ERCC1高表达及TYMS中低表达组患者的中位生存时间为20、10、10.5个月。该3组患者1年生存率分别为65.71%、38.46%、40.00%，2年生存率分别为 37.14%、0.00%、10.00%，3年生存率分别为 14.29%、0.00%、0.00%；ERCC1和TYMS共同中低表达组患者1、2、3年生存率均高于ERCC1中低表达及TYMS高表达组、ERCC1高表达及TYMS中低表达组（均P＜0.05），而ERCC1中低表达及TYMS高表达组、ERCC1高表达及TYMS中低表达组1、2、3年生存率比较均无统计学差异（均P＞0.05）。

3 讨论

晚期胃癌患者最基本的治疗方式为姑息性化疗，但目前仍尚无标准的化疗方案，二联化疗是常用的治疗方案。铂类化合物联合氟尿嘧啶类是目前最常用的一线化疗方案。近年来，联用蒽环类或多西紫杉醇组成的ECF、EOX、DCF方案进行的临床试验研究中，患者有少许生存获益[9]。然而，这些方案有可能会增加化疗毒副反应，所以通常推荐用于基础状态较好的患者。胃癌的病因复杂、异质性大、患者生存时间短、化疗有效率低，因此实现个体化化疗将有助于进一步提高化疗疗效，改善预后。

药物耐药是导致晚期胃癌化疗失败的主要原因，随着对肿瘤耐药机制研究的深入，越来越多的耐药基因受到关注。研究表明，ERCCl与奥沙利铂耐药相关[10]。TYMS是编码氟尿嘧啶重要靶酶-胸苷酸合成酶的基因，因此肿瘤细胞内TYMS表达水平影响氟尿嘧啶的敏感性[11]。本研究旨在通过联合检测晚期胃癌患者ERCC1、TYMS mRNA的表达水平，来探讨基因检测对制定个体化治疗方案的指导意义。

本研究患者均给予氟尿嘧啶、亚叶酸钙、奥沙利铂联合化疗。结果显示，ERCC1和TYMS共同中低表达组化疗有效率为62.86%，ERCC1中低表达及TYMS高表达组化疗有效率为35.71%，ERCC1高表达及TYMS中低表达组化疗有效率为36.36%。3组患者化疗有效率比较差异无统计学意义。ERCC1和TYMS共同中低表达组、ERCC1中低表达及TYMS高表达组、ERCC1高表达及TYMS中低表达组患者的中位生存时间为20、10、10.5个月。该3组患者1年生存率分别为65.71%、38.46%、40.00%，2年生存率分别为 37.14%、0.00%、10.00%，3年生存率分别为14.29%、0.00%、0.00%；ERCC1和TYMS共同中低表达组患者1、2、3年生存率均高于ERCC1中低表达及TYMS高表达组、ERCC1高表达及TYMS中低表达组，而ERCC1中低表达及TYMS高表达组、ERCC1高表达及TYMS中低表达组1、2、3年生存率比较均无统计学差异。本研究结果与骆玉霜等[12]的研究结果基本一致，但笔者认为可以扩大样本量做进一步观察。

本研究尚存在一些不足，首先样本量偏小；其次，尚有重要的肿瘤耐药相关基因未进行检测，如与铂类相关的BRCA1基因，与紫杉醇类药物相关的TUBB3和STMN1基因[13]，以及与赫赛汀相关的HER-2基因[14]等；另外，本研究主要集中在mRNA水平的基因表达方面，而对基因蛋白水平尚未涉及。未来将进一步对这些基因的结构、蛋白功能以及耐药相关机制等进行研究，联合其它靶基因检测，寻找更有效的个体化化疗方案。

综上所述，晚期胃癌患者应用氟尿嘧啶、亚叶酸钙、奥沙利铂联合化疗，ERCC1和TYMS共同中低表达的患者生存率优于仅其中1个基因高表达的患者，而化疗效果差异尚不明显。这提示临床或可根据多基因联合检测结果制定晚期胃癌患者个体化化疗方案，改善患者预后。

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Association of ERCC1 and TYMS expression with efficacy of adjuvant chemotherapy and prognosis in patients with advanced gastric cancer

LU Lina，JIANG Guofa，LI Gangxiu，et al.
Department of Gastroenterology,Jinhua Wenrong Hospital,Jinhua 321000,China

Objective To investigate the association of expression level of ERCC1 and TYMS mRNA with the efficacy of adjuvant chemotherapy and the prognosis in patients with advanced gastric cancer. Methods Sixty patients with advanced gastric cancer were treated with fluorouracil and leucovorin combined with oxaliplatin-based chemotherapy.The expressions of excision repair cross-complementation group 1(ERCC1)and thymidylate synthase(TYMS)genes in gastric cancer tissue were detected by branch DNA-liquid phase chip technique.According to the gene expression levels,the patients were grouped as moderate/low expression of both ERCC1 and TYMS (group 1),moderate/low expression of ERCC1 and high expression of TYMS(group 2),high expression of ERCC1 and moderate/low expression of TYMS(group 3).After three years of follow-up,the efficacy of chemotherapy and the survival of patients were observed and compared among 3 groups. Results The response rates to chemotherapy in group 1,group 2 and group 3 were 62.86%(22/35),35.71%(5/14)and 36.36%(4/11)(P＞0.05).The median survival time of 3 groups was 20,10 and 10.5 months,1-year survival rates were 65.71%,38.46%and 40.00%,2-year survival rates were 37.14%,0.00%and 10.00%,3-year survival rates were 14.29%,0.00%and 0.00%,respectively.Compared with other two groups,the 1-,2-and 3-year survival rates of patients with group 1 were significantly higher than those of other two groups(all P＜0.05). Conclusion Moderate or low expression of ERCC1 and TYMS is associated with higher survival rate in advanced gastric cancer patients with adjuvant chemotherapy,but not associated with the chemotherapy efficacy.

Gastric cancerLiquid chip technology Chemotherapy ERCC1 TYMS

10.12056/j.issn.1006-2785.2017.39.24.2017-2720

金华市科学技术研究计划项目（2013-3-020）

321000 金华文荣医院消化内科

黄伟，E-mail：jhdene65@126.com

2017-11-09）

李媚）