瑶药四方钻的化学成分研究

韦 范，王 硕，周小雷，卞 理，龚小妹，欧春丽

(1.广西壮族自治区药用植物园，广西南宁 530023；2.广西药用资源保护与遗传改良重点实验室，广西南宁 530023；3.西南濒危药材资源开发国家工程实验室，广西南宁 530023)

四方钻是葡萄科白粉藤属植物戟叶白粉藤[(Cissushastata(Miq. ) Planch]的藤茎,别名四方藤、红四方藤、风藤、软筋藤，生于山谷林下，产于广西南宁、隆安、龙州、防城、博白、岑溪、贺州、金秀、等县市，分布于广东、台湾等省份。四方钻味涩，微苦，甘，性平，具有去癖生新、舒筋活络、筋络拘挛的功效，既可用于治疗腰肌劳损、风湿痹痛、内外伤出血、跌打损伤、疼痛、胃及十二指肠出血等症，又可用于产后保健药浴[1]。研究表明，四方钻中含有岩白菜素、11-O-没食子酰岩白菜素等成分[2]。为更全面挖掘四方钻的化学成分，笔者采用硅胶色谱法和聚酰胺色谱法分离纯化，并根据化合物理化性质和核磁共振结构数据进行化合物结构鉴定。

1 材料与方法

1.1仪器600兆核磁共振仪(美国VARIAN公司)；X-4数字显示微熔点测定仪(熔点未校正)； LC-MS(美国VARIAN公司)；ZF-I型三用紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂)；GF254硅胶板(青岛海洋化工分厂)；柱层层析硅胶(100～200、200～300目，青岛海洋化工厂)。

1.2材料与试剂四方钻药材购于广西金秀县，由广西壮族自治区药用植物园赵以民博士鉴定为葡萄科白粉藤属植物戟叶白粉藤[(Cissushastata(Miq.)Planch]的藤茎。药材样品存于广西药用植物园。色谱用试剂均为分析纯。

1.3方法四方钻药材50 kg粉碎，用8倍量80%乙醇超声提取1 h，提取3次，提取液回收，蒸至无醇味，得6.5 kg浸膏，以水混悬用乙酸乙酯萃取(乙酸乙酯∶水=1∶1)，萃取液蒸干得膏630 g。取394 g浸膏，甲醇溶解，与100～200目硅胶按1.00∶1.14的比例拌匀，挥干溶剂，以样品量与硅胶量(200～300目)1∶5比例用纯石油醚湿法装硅胶柱，干法上样。以石油醚∶乙酸乙酯(1∶0、9∶1、8∶1、6∶1、1∶1、0∶1)梯度洗脱，最后甲醇冲柱，每2 500 mL为一个流份，收集流份，根据薄层层析结果合并各流份，得P1-P6流份，将所得流份经反复硅胶、凝胶、小孔树脂等柱层析方法分离得到各单体化合物。P2回收溶剂后，在石油醚-乙酸乙酯(9∶1)洗脱部位有白色晶体析出，经氯仿甲醇溶解重结晶，硅胶柱色谱分离，Sephadex LH-20柱分离后依次得到白色片状结晶C和白色结晶B；P3经石油醚-乙酸乙酯(8∶1)洗脱部位经硅胶柱色谱分离(50 g)，反复经过Sephadex LH-20柱分离纯化得到白色粉末A；P5经石油醚-乙酸乙酯(1∶1)洗脱部位经硅胶柱色谱分离，氯仿-甲醇(8∶1、6∶1、4∶1)梯度洗脱，再反复经过Sephadex LH-20柱，以氯仿-甲醇(1∶1)为洗脱剂，纯化，得到白色结晶D和E；P6经回收溶剂后，纯乙酸乙酯部位有透明棱柱状晶体析出，记为F。经硅胶柱，氯仿-甲醇(5∶1、4∶1、3∶1)梯度洗脱，再反复经过Sephadex LH-20柱，以氯仿-甲醇(1∶1)为洗脱剂，纯化，又得另一白色粉末G和一白色晶体H。

2 结果与分析

2.1化合物A白色粉末(甲醇)，mp：283～285 ℃，易溶于吡啶，溶于甲醇、乙醇，略溶于丙酮，微溶于氯仿和乙醚，不溶于水和石油醚。ESI-MSm/z(%)：479[M+Na]+。1H-NMR(600 MHz，MeOD)δ(ppm)：5.51(1 H，m，H-12)、3.47(1 H，m，H-3)、2.66(1 H，br，d，J=11.3 Hz，H-18)。13C-NMR(C5D5N，150 MHz)δ(ppm)：37.7(C-1)、26.7(C-2)、76.7(C-3)、38.0(C-4)、54.4(C-5)、17.4(C-6)、32.2(C-7)、38.6(C-8)、46.6(C-9)、35.1(C-10)、22.3(C-11)、124.2(C-12)、137.8(C-13)、41.1(C-14)、27.3(C-15)、23.3(C-16)、46.6(C-17)、52.1(C-18)、38.1(C-19)、38.0(C-20)、29.7(C-21)、36.0(C-22)、27.4(C-23)、14.3(C-24)、15.2(C-25)、16.0(C-26)、22.5(C-27)、178.4(C-28)、16.1(C-29)、17.4(C-30)。基于以上这些质谱数据与参考文献[3]基本一致，因此确定该化合物为熊果酸。

2.2化合物B白色针状结晶(氯仿-甲醇)，不溶于水，易溶于氯仿、甲醇等有机溶剂。薄层色谱在不同的溶剂体系中展开，均显示为单点，mp：137～139 ℃。1H-NMR(CDCl3，600 MHz)δ(ppm)：0.61(3 H，s，H-18)、0.74(3 H，d，J=7.0 Hz，H-27)、0.76(3 H，d，J=6.8 Hz，H-26)、0.77(3 H，t，J=7.5 Hz，H-29)、0.85(3 H，d，J=6.5 Hz，H-21)、0.94(3H，s，H-19)、5.28(1 H，m，H-6)、3.45(3 H，m，H-3)。13C-NMR(CDCl3，150 MHz)δ(ppm)：36.2(C-1)、30.6(C-2)、70.8(C-3)、41.3(C-4)、139.7(C-5)、120.7(C-6)、30.9(C-7，8)、49.1(C-9)、35.1(C-10)、20.1(C-11)、38.8(C-12)、41.3(C-13)、55.8(C-14)、23.3(C-15)、27.2(C-16)、55.1(C-17)、11.0(C-18)、18.0(C-19)、35.5(C-20)、17.8(C-21)、32.9(C-22)、25.1(C-23)、44.8(C-24)、28.2(C-25)、18.4(C-26)、18.8(C-27)、22.1(C-28)、10.8(C-29)。以上数据与文献[4-5]中报道的基本一致，将该化合物与β-谷甾醇标准品多溶剂系统展开，Rf值与标准品一致，故鉴定该化合物为β-谷甾醇。

2.3化合物C无色片状晶体(氯仿)，mp：286～287 ℃，易溶于吡啶、氯仿，可溶于乙酸乙酯、石油醚，微溶于丙酮、甲醇。ESI-MSm/z(%)：425[M+H]+。1H-NMR(CDCl3，600 M Hz)δ(ppm)：0.66(3 H，S，H-18)、0.84(3 H，d，J=7.1 Hz，H-27)、0.86(3 H，d，J=5.3 Hz，H-26)、0.88(3 H，t，J=7.4 Hz，H-29)、0.98(3 H，d，J=6.4 Hz，H-21)、5.05(1 H，d，J=7.7 Hz，H-1’)、5.35(1 H，m，H-6)、4.56(1 H，m，H-3)。13C-NMR(CDCl3，150 MHz) δ(ppm)：38.3(C-1)、34.1(C-2)、217.5(C-3)、47.5(C-4)、55.7(C-5)、19.9(C-6)、36.6(C-7)、37.5(C-8)、48.7(C-9)、35.7(C-10)、17.4(C-11)、33.5(C-12)、38.8(C-13)、157.5(C-14)、117.2(C-15)、37.66(C-16)、37.72(C-17)、48.8(C-18)、40.6(C-19)、28.8(C-20)、35.0(C-21)、33.1(C-22)、26.1(C-23)、21.5(C-24)、14.5(C-25)、29.9(C-26)、25.6(C-27)、29.8(C-28)、33.5(C-29)、21.3(C-30)。以上质谱数据与文献[6-7]基本相符，因此鉴定化合物A为蒲公英赛酮。

2.4化合物D白色针状结晶(甲醇)。TLC用不同溶剂体系展开，均显示为单点。mp：238.0～239.5 ℃。ESI-MSm/z(%)：171[M+H]+。1H-NMR(MeOD，600 MHz)δ(ppm):7.04(2 H，s，H-2，6)。13C-NMR(MeOD，150 MHz)δ (ppm):121.9(C-1)、110.2(C-2，6)、146.3(C-3，5)、139.5(C-4)、170.4(-COOH)。以上数据与文献[8]基本一致，确定该化合物为没食子酸。

2.5化合物E白色针状结晶(甲醇)，难溶于水，易溶于氯仿、甲醇、乙醇、丙酮等有机溶剂。C14H12O3，mp:257～259 ℃。ESI-MSm/z(%)：227[M-H]-。1H-NMR(CD3OD，600 MHz)δ(ppm)：7.24(2 H，d，J=8.7 Hz，H- 2′，6′)、6.87(1 H，d，J =16 Hz，H-8)、6.71(1 H，d，J=16 Hz，H-7)、6.66(2 H，d，J =8.6 Hz，H-3′，5′)、6.35(2 H，d，J =2.2 Hz，H-2，6)、6.07(1 H，t，J=2.1 Hz ，H-4)。13C-NMR(CD3OD，150 MHz)δ(ppm)：141.5(C-1)、105.9(C-2，6)、159.8(C-3，5)、102.8(C-4)、130.6(C-1′)、128.9(C-2′，6′)、116.6(C-3′，5′)、158.5(C-4′)、129.5(C-7)、127.1(C-8)。以上数据与文献[9]基本一致，确定该化合物为白藜芦醇。

2.6化合物F无色棱柱状结晶(氯仿-甲醇)，在甲醇中溶解，在水或乙醇中微溶，mp:232～240 ℃。ESI-MSm/z(%)：328[M]+。1H-NMR(MeOD，600 MHz)δ(ppm)：7.05(1 H，S，H-7)、4.94(1 H，d，J=10.2 Hz，H-10b)、4.05(1 H，m，H-4a)、3.88(3 H，s，OCH3)、3.71(1 H，m，H-4)、3.61(1 H，m，H-2)、3.72(1 H，m，H-11)、3.45(1 H，m，H-3)。13C-NMR(MeOD，150 MHz)δ(ppm):82.7(C-2)、71.4(C-3)、75.4(C-4)、81.5(C-4a)、165.8(C-6)、119.4(C-6a)、111.0(C-7)、152.1(C-8)、141.9(C-9)、149.5(C-10)、117.0(C-10a)、73.7(C-10b)、62.4(C-11)、61.0(-OCH3)。以上数据与文献[10]基本一致，确定该化合物为岩白菜素。

2.7化合物G白色粉末(甲醇)，mp：286～287 ℃，溶于吡啶，微溶于丙酮和甲醇。ESI-MSm/z(%)：577[M+H]+。1H-NMR(CDCl3，600 MHz)δ(ppm)：0.66(3 H，s，H-18)、0.84(3H，d，J=7.1 Hz，H-27)、0.86(3 H，d，J=5.3 Hz，H-26)、0.88(3 H，t，J=7.4 Hz，H-29)、0.98(3 H，d，J=6.4 Hz，H-21)、5.05 (1 H，d，J=7.7 Hz，H-1’)、5.35(1 H，m，H-6)、4.56(1 H，m，H-3)。13C-NMR(CDCl3，150 MHz) δ(ppm)：36.1(C-1)、28.1(C-2)、77.1(C-3)、37.9(C-4)、139.5(C-5)、120.5(C-6)、30.8(C-7)、30.7(C-8)、48.9(C-9)、35.2(C-10)、19.9(C-11)、38.5(C-12)、41.0(C-13)、54.8(C-14)、23.1(C-15)、25.0(C-16)、55.4(C-17)、10.8(C-18)、18.6(C-19)、35.0(C-20)、17.6(C-21)、28.9(C-22)、32.8(C-23)、44.6(C-24)、25.0(C-25)、17.8(C-26)、18.0(C-27)、22.0(C-28)、10.6(C-29)、101.1(C-1’)、73.9(C-2’)、77.2(C-3’)、70.3(C-4’)、76.7(C-5)、61.4(C-6’)。以上数据与文献[11-12]报道的基本一致。经过与胡萝卜苷对照品共薄层显色，在3种溶剂系统下展开行为一致，混合后测定熔点不下降，故鉴定该化合物为胡萝卜苷。

2.8化合物H白色针状结晶(氯仿-甲醇)，mp：176～178 ℃。ESI-MSm/z(%)：480[M]+。1H-NMR(MeOD，600 MHz) δ(ppm)：7.11(2 H，s，H-2’，6’)、7.08(1 H，S，H-7)、5.03(1 H，d，J=10.2 Hz，H-10b)、4.80(2 H，m，H-11)、4.10(1 H，m，H-4a)、3.94(1 H，m，H-2)、3.89(3 H，s，OCH3)、3.84(1 H，m，H-4)、3.55(1 H，m，H-3)。13C-NMR(MeOD，150 MHz)δ(ppm)：81.3(C-2)、71.8(C-3)、75.4(C-4)、80.6(C-4a)、163.9(C-6)、119.4(C-6a)、111.2(C-7)、152.4(C-8)、142.3(C-9)、149.3(C-10)、117.0(C-10a)、74.4(C-10b)、64.6(C-11)、60.9(-OCH3)、119.8(C-1’)、110.2(C-2’,6’)、146.6(C-3’，5’)、140.1(C-4’)、168.2(-COOH)。以上数据与文献[13-14]基本一致，确定该化合物为11-O-没食子酰岩白菜素。

3 讨论与结论

瑶族医药是我国传统医药的重要组成部分，四方钻是瑶族常用草药。池翠云等[2]采用硅胶柱色谱、薄层色谱、重结晶等化学方法进行分离纯化，从四方藤中分离并鉴定到β-谷甾醇、岩白菜素、11-O-没食子酰岩白菜素、11-O-(4-hydroxy benzoyl) bergenin、没食子酸以及胡萝卜苷共6种化合物。该研究通过硅胶色谱、聚酰胺色谱分离纯化，不仅得到上述6种化合物，另外还得到1种新的化合物——熊果酸，这是首次在四方钻中报道该化合物。熊果酸是存在于天然植物中的一种三萜类化合物，很多研究表明，熊果酸及五环三萜同类物具有抗HIV、抗肿瘤、抗糖尿病、抗病毒、抗菌、增强免疫功能以及降血脂等生物学活性[15]。