2015至2016年度丹东市流感病原学监测结果分析

李航，时慧，王建华，孙玉萍，刘奇男，崔成伟

（丹东市疾病预防控制中心，辽宁 丹东 118002）

2015至2016年度丹东市流感病原学监测结果分析

李航，时慧，王建华，孙玉萍，刘奇男，崔成伟

（丹东市疾病预防控制中心，辽宁 丹东 118002）

目的：分析2015年4月至2016年3月丹东市流感病毒流行情况，了解病毒毒株的型别，为科学预防和控制流感提供依据。方法：采集流感样病例（ILI）的咽拭子标本，采用实时荧光定量PCR方法检测病毒核酸。使用狗肾传代细胞株（Madin-Darby canine kidney，MDCK）进行病毒分离培养。结果：共采集流感样病例咽拭子1 438份，检测出流感病毒核酸阳性154份，检出率为10.71%，流感病毒核酸阳性数分别为乙型流感病毒Victoria系79份，甲型流感病毒H3N2亚型64份，乙型流感病毒Yamagata系8份，甲型流感病毒新甲型H1N1亚型3份。2016年1月至3月流感病毒核酸检测阳性率较高。对阳性标本进行病毒分离，分离到54株毒株，分离率为35.06%，其中乙型流感病毒Victoria系39株，甲型流感病毒H3N2亚型6株，乙型流感病毒Yamagata系7株，甲型流感病毒新甲型H1N1亚型2株。2015年6月、2016年3月流感病毒分离阳性率较高。不同性别、年龄ILI流感病毒检测阳性率差异无统计学意义。结论：2015至2016年度丹东市流感的流行呈季节性，易感人群应做好流感的预防措施。

流感；病毒；核酸；病原学

流行性感冒简称流感是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病，是目前尚未有效控制的世界性传染病，每年导致高达100万人死亡［1］。流感病毒分为甲型（A）、乙型（B）、丙型（C）3型，其中甲型流感引起4次世界大流行。流感是第一个实行全球监测的疾病［2］，流感监测是预防控制流感的关键措施之一，也是每年确定流感流行株、对疫情预警预测的基础［3］。流感潜伏期短，经呼吸道飞沫传播，传播迅速，抗原易变异，人群对变异株普遍易感，控制难度大［4］。通过流感病原学监测可以了解流感病毒优势株的变化，分析预测流感流行的趋势和特点，有效防控流感疫情。因此，本研究通过分析2015至2016年丹东市流感病原学监测结果，旨在为本地区流感的科学防控提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料 呼吸道病毒采样管为友康基业生物科技（北京）有限公司产品；病毒RNA提取试剂盒为上海之江生物科技有限公司产品；实时荧光定量PCR仪为美国Bio-rad公司产品（IQ5型），实时荧光定量PCR试剂为江苏硕世生物科技有限公司产品；细胞培养瓶为美国Thermo公司产品；DMEM、胎牛血清、PBS等组织细胞培养试剂均为美国Gibco公司产品。狗肾传代细胞株（Madin-Darby canine kidney，MDCK）由辽宁省疾病预防控制中心提供，抗A（H1N1）亚型血清、抗A（H3N2）亚型血清、抗B型Yamagata系（BY）病毒血清、抗B型Victoria系（BV）病毒血清由国家流感中心提供。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 参照2010年版《全国流感监测方案》，选择丹东市妇女儿童医院和东港市中心医院作为监测哨点医院。选择发病3 d内的流感样病例（influenza-like illness，ILI）（体温≥38 ℃，伴咳嗽或咽痛之一，而缺乏其他实验室确定诊断依据），由哨点医院值班医生采集其鼻咽拭子标本，标本在4℃条件下保存，48 h内送丹东市疾病预防控制中心流感网络实验室，不能在48 h内送到实验室的，置－70℃条件下保存，待检。

1.2.2 核酸提取 吸取200 μl咽拭子标本，利用上海之江全自动核酸提取仪（医疗器械备案凭证编号：沪浦械备20150058号；批号：P20160301）及其配套试剂提取病毒RNA，严格按照试剂盒说明书操作。

1.2.3 核酸检测 将提取好的病毒RNA严格按照江苏硕世生物科技有限公司甲/乙型流感病毒核酸测定试剂盒的说明配制反应体系，在美国Biorad公司IQ5型实时荧光定量PCR仪上进行甲/乙型流感病毒的核酸检测分型，阳性样品继续做分型检测。

1.2.4 病毒分离 将核酸检测阳性的标本接种到MDCK细胞，置于33℃5%的二氧化碳培养箱内培养。每日在倒置显微镜下观察细胞病变（CPE），当CPE达到75%～100%时收获，进行红细胞凝集试验（HA），对HA滴度≥8的标本进行红细胞凝集抑制实验（HI）。阴性样品继续盲传2代，看是否出现病变。

1.3 统计学方法 采用SPSS 19.0软件进行统计学分析，分类变量比较采用Fisher精确检验和χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 病毒核酸检测结果 2015年4月至2016年3月共检测ILI咽拭子标本1 438份，流感病毒核酸检测阳性数154份，检出率为10.71%。流感病毒核酸阳性数最高为乙型流感病毒Victoria系79份，其次为甲型流感病毒H3N2亚型64份，乙型流感病毒Yamagata系8份，甲型流感病毒新甲型H1N1亚型3份。不同月份ILI标本的检测结果见表1，2016年1月至3月流感病毒核酸检测阳性率较高，说明2016年1月至3月形成活动高峰，主要由乙型流感BV亚型、甲型H3N2亚型流感病毒引起。

表1 2015至2016年度丹东市流感病毒核酸检测阳性率及病毒型别分布

2.2 病毒分离结果 对154份流感病毒核酸检测阳性的咽拭子标本进行流感病毒分离培养，进行血凝试验，阳性毒株54株，分离率为35.06%。对54株毒株进行血凝抑制试验，具体分型为甲型流感病毒H3N2亚型6株，甲型流感病毒新甲型H1N1亚型2株，乙型流感病毒BV系39株，乙型流感病毒BY系7株。不同月份流感病例标本的分离培养结果见表2，2015年6月、2016年3月流感病毒分离阳性率较高，主要由乙型流感病毒引起。

表1 2015至2016年度丹东市流感病毒核酸检测阳性率及病毒型别分布

2.3 不同性别、年龄ILI标本的检测结果 1 438例进行流感病毒检测的ILI中，男性ILI标本检测阳性率与女性比较差异无统计学意义（P＞0.05）。不同年龄ILI标本检测阳性率比较差异无统计学意义（P＞0.05）。

表3 不同性别、年龄ILI标本的检测结果

3 讨论

根据流感的流行特征，我国北方地区通常将流感分为流行季（10月至次年3月）和非流行季（4月至当年9月）。我国东北地区属于典型的温带大陆性季风气候，其气候环境、遗传因素等具有明显的地域特征，以往监测显示，我国流感流行特征南北方差距较大［5-6］，北方地区以冬季高峰为主，而南方具有冬、夏两个高峰［7］。

流感病毒H基因和N基因的多变性可导致抗原突变的出现［8］，每隔几年，就会有一种逃避人类免疫的变异株出现，引起流感大流行［9］，通过对流感病毒的实验室检测，可以对流感的型别及亚型进行鉴定，能及时发现当地流感病毒的变异，为流感防控工作提供科学依据。

本文对2015年4月至2016年3月ILI的检测结果进行分析，在2016年1月至2016年3月的冬春季呈现高峰，与既往研究结果［10-12］一致。流感毒株绝大多数分离于2016年1月至2016年3月所采集的标本，这与辽宁省毒株分离在时间上基本一致，呈现出明显的季节性［13］，且不同性别、年龄LIL流感病毒检测阳性率差异无统计学意义。各级医疗卫生单位应意识到流感病毒传染性强、传播速度快、防控难度大，在流感高发季节，发现疫情要早报告、早隔离治疗、早报告处理，避免引起流感爆发。

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［3］黄维娟，董捷，舒跃龙.中国流感监测网络发展概况［J］.疾病监测，2008，23（8）：463，469.

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［8］张卓然.临床微生物学和微生物检验［M］.3版.北京：人民卫生出版社，2006：353.

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EtiologicalAnalysisofSurveillanceResultsofInfluenzafrom2015to2016inDandongCity

LI Hang，SHI Hui，WANG Jianhua，SUN Yuping，LIU Qinan，CUI Chengwei
（Center for Disease Control and Prevention of Dandong，Dandong 118002，China）

Objective：To investigate the prevalent strains and etiologic characteristics of influenza in Dandong from Apr 2015 to Mar 2016，and to provide a scientific basis for the prevention and control of influenza.Methods：Throat swabs of influenza-like illness（ILI） cases were collected.The nucleic acid of influenza viruses was detected by real-time PCR.Influenza viruses were isolated by Madin-Darby canine kidney（MDCK）cells.Results：A total of 1 438 specimens were collected，and 154 were positive for influenza viral RNA with the detection rate of 10.71%.The highest positive number of influenza virus nucleic acid was for 79 copies of Victoria type B influenza，followed by 64 copies of H3N2，8 copies of Yamagata type B influenza and 3 copies of H1N1.The higher detection rate of influenza virus nucleic acid happened in Jan 2016 to Mar 2016.And 54 influenza virus strains were isolated with the detection rate of 35.06%.Among which there were 39 strains of Victoria type B influenza，6 strains of H3N2，7 strains of Yamagata type B influenza and 2 strains of H1N1.The higher positive rate of isolation of influenza virus happened in Jun 2015 and Mar 2016.There was no significant difference in the detection rate of influenza virus between different age and different sex.Conclusion：Influenza in Dandong city from 2015 to 2016 is seasonal，and susceptible population should take preventive measures.

influenza； virus； nucleic acid； etiology

R511.7

A

1008-2344（2017）04-0342-03

10.16753/j.cnki.1008-2344.2017.04.014

2017-03-03

（文敏编辑）