Beclin1表达水平与乳腺癌临床分期相关性的研究

潘贇昊，顾岩，石阳，汪成*

（1. 上海市黄浦区中心医院乳腺外科，上海 200002；2. 上海交通大学医学院附属第九人民医院普外科，上海 200011；3. 上海市黄浦区中心医院肿瘤内科，上海 200002）

临床论著

Beclin1表达水平与乳腺癌临床分期相关性的研究

潘贇昊1，顾岩2，石阳3，汪成1*

（1. 上海市黄浦区中心医院乳腺外科，上海 200002；2. 上海交通大学医学院附属第九人民医院普外科，上海 200011；3. 上海市黄浦区中心医院肿瘤内科，上海 200002）

目的Beclin1是与自噬相关的重要基因，本研究旨在明确其表达水平与乳腺癌临床分期的相关性。方法随机抽取2003年-2012年在上海市黄浦区中心医院手术的200例乳腺癌，20例良性乳腺疾病，对220例石蜡标本重新取材，应用免疫组织化学染色法检测Beclin1的表达水平。结果Beclin1在乳腺癌原位癌组织中表达水平显著高于浸润性癌组织，乳腺癌细胞分化越差Beclin1表达水平越低。结论Beclin1检测在乳腺癌诊断、诊疗中具有重要价值，可能作为预测乳腺癌病理分期的候选分子标志物。

Beclin1；自噬；乳腺癌；病理分期

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，在女性恶性肿瘤发病率仅次于呼吸系统肿瘤及消化系统肿瘤[1]。我国乳腺癌的发病率正逐年上升，给我国女性健康及国民经济带来了严重的损害[2]。近年来，随着乳腺癌诊断及治疗手段的提高，患者远期生存率可达80%以上[3]。但仍有部分患者对先有检查手段不敏感，导致诊断及治疗的延误。因此，需要更多的分子生物学指标，来更精准判断乳腺癌的恶性程度、对不同治疗的反应以及远期预后。

须降解的细胞质、细胞器、蛋白质等成分，在亚细胞水平形成自噬溶酶体，进而自我吞噬以实现细胞代谢和更新的过程称为自噬。自噬对肿瘤具有双向调节作用：适度的自噬可促进细胞生存，而过度的自噬将诱导肿瘤细胞死亡[4-6]。Beclin1是第一个在哺乳动物中发现与自噬相关的抑癌基因，Beclin1在调节自噬活性、激活细胞程序性死亡过程中扮演着重要角色。有研究[7-9]表明Beclin1可以抑制肿瘤的发生、发展，但也有相反的报道称Beclin1可以促进肿瘤细胞的生存。目前国内外对该基因与乳腺癌相关临床以及病理学的研究非常匮乏，本研究通过分析Beclin1在乳腺癌组织中的表达与乳腺癌分期之间的关系，探讨了Beclin1在乳腺癌发生发展中的作用，为Beclin1检测在乳腺癌诊疗过程中的应用奠定了理论基础。

1 材料与方法

1.1 实验材料 随机抽取了2003年-2012年在上海市黄浦区中心医院手术的病例220例，其中乳腺癌200例，良性乳腺疾病20例。200例乳腺癌病例中，原位癌83例，浸润性癌117例。

1.2 免疫组化 应用免疫组织化学染色法检测Beclin1的表达，羊抗人Beclin1抗体（Abcam, ab107639），鼠抗人PR抗体（Abcam, ab107639），兔抗人ER抗体（Abcam, ab107639）。染色阳性位于细胞浆及细胞核内，为棕黄色颗粒，染色强度明显高于背景者为阳性。

1.3 统计学处理 采用SPSS 18.0统计软件进行统计分析处理。F检验计量样本的方差齐性，具有方差齐性的计量资料采用t检验，不具有方差齐性的计量资料采用z检验，构成比及率应用卡方检验、Fish确切几率法。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 患者基本资料 本研究所收集的乳腺癌病例患者一般情况详见表1，统计分析了乳腺癌常见与生活相关的危险因素。

表1 患者基本资料

2.2 Beclin1在正常乳腺组织及乳腺癌组织中的免疫组化结果 见图1。

2.3 Beclin1在T0-Tis、T1、T2和T3分期乳腺癌组织中阳性率的比较 T0-Tis 期与其它分期相比，Beclin1阳性率在原位癌组的阳性率显著高于浸润性癌组（P＜0.05），T1、T2、T3各组间Beclin1阳性率无显著差异（P＞0.05），Beclin1阳性率在非原位癌患者中与肿瘤体积大小无关。

2.4 Beclin1在不同级淋巴结转移乳腺癌组织中阳性率的比较 Beclin1阳性率在各组淋巴结转移乳腺癌患者组织标本中的表达阳性率无显著性差异（P＞0.05）。

研究结果显示，Beclin1表达水平在良恶性乳腺组织中有明显差异（P＜0.05），良性乳腺组织中的表达率为85%（n=17）；在乳腺癌中的表达率为33.5%（n=67），其中原位癌中的表达率为50.6%（n=42），浸润性癌中的表达率为21.37%（n=25），且浸润癌中的表达率明显低于原位癌，结果具有统计学意义。乳腺癌中Beclin1阳性率与组织学分级相关（P＜0.05），级别越高（分化越差），Beclin1阳性率越低。肿块大小、淋巴结转移、ER、PR、Ki67及CerbB-2的表达与Beclin1阳性率无关（P均＞0.05）。

图1 Beclin1免疫组化染色结果：A、B：正常乳腺组织Beclin1染色阳性及阴性结果；C、D：乳腺癌组织Beclin1染色阳性及阴性结果。

表2 Beclin1在T0-Tis、T1、T2和T3分期乳腺癌组织中阳性率的比较

表3 Beclin1在不同级淋巴结转移乳腺癌组织中阳性率的比较

3 讨论

自噬是细胞维持自身内环境稳定的重要手段，自噬功能异常可导致细胞异常增生，甚至出现癌变[10]。深入了解细胞自噬功能以及肿瘤细胞自噬功能正常与否，是判断肿瘤患者预后以及研制新型抗肿瘤药物的基础。Beclin1是第一个在哺乳动物中发现与自噬相关的抑癌基因，Beclin1在调节自噬活性、激活细胞程序性死亡过程中扮演着重要角色[11]。

本研究从临床病理学、肿瘤分期、分级等多方面，探讨了Beclin1基因及其产物在乳腺癌发生发展中的作用。研究结果显示Beclin1在乳腺癌患者中的表达水平明显下降，且乳腺癌细胞分化越差，Beclin1表达水平越低。据此推测，Beclin1在乳腺细胞发生病变开始，出现功能缺陷，可能是肿瘤细胞其他抑癌基因缺陷相互作用导致Beclin1表达异常，抑制了细胞的自噬功能，进而导致细胞恶性增殖；也可能是Beclin1表达异常导致抑癌基因功能缺陷，从而使得细胞内环境紊乱并出现恶性增殖。具体生物学通路机制，需要更多动物实验及细胞学实验加以佐证[12-15]。

由于标本量有限，本研究尚未明确排除年龄、肿瘤分期、分级以及肿块大小等相关变量后，Beclin1阴性能否成为乳腺癌患者预后不良的独立危险因素。为明确Beclin1表达水平减低与乳腺癌发生发展的因果关系，我们须进一步检测乳腺癌组织中Beclin1阴性的乳腺癌患者正常乳腺组织中Beclin1的表达水平，我们将在后续的研究中，着重探讨两者间的因果关系。为详细阐明Beclin1在乳腺癌发生发展中的作用，Beclin1表达水平与Ki-67不同表达区间、P53突变率、HER-2表达等之间的关系，以及Beclin1表达与否对乳腺癌患者预后的影响，我们将进一步收集我院乳腺癌标本，并注意收集乳腺癌患者正常乳腺组织标本，为后续研究奠定基础。

本研究发现Beclin1表达水平在良恶性乳腺组织中的差异，分析了乳腺癌中Beclin1阳性率与肿块大小、淋巴结转移之间的关系，为Beclin1检测在乳腺癌诊疗过程中的应用奠定了理论基础。研究结果提示，Beclin1检测在乳腺癌诊断、诊疗中具有重要价值，可能作为预测乳腺癌病理分期的候选分子标志物。

[1] 陈万青, 郑荣寿. 中国女性乳腺癌发病死亡和生存状况[J].中国肿瘤临床, 2015(13): 668-674.

[2] 郑莹, 吴春晓, 张敏璐, 等. 乳腺癌在中国的流行状况和疾病特征[J]. 中国癌症杂志, 2013(8): 561-569.

[3] 曾佳佳, 杨润祥, 刘蓉, 等. 乳腺癌的靶向治疗研究进展[J].中国生化药物杂志, 2016(1): 7-11.

[4] 焦庆丽, 吴爱国, 邵国利, 等. 乳腺癌组织Beclin1和EMT相关分子标志物表达及其临床意义探讨[J]. 中华肿瘤防治杂志,2015, 22(18): 1456-1460, 1465.

[5] 姚维深, 周国华, 张旭, 等. Bcl-2和Beclin1及PTEN在乳腺浸润性导管癌组织中的表达及相关性[J]. 广东医学, 2013,34(10): 1538-1540.

[6] 杜芸, 李迎娟, 吴家宁, 等. 自噬基因Beclin1在细针穿刺乳腺病变中的表达及其与Bcl-2和p53的相关性[J]. 肿瘤防治研究,2013, 40(5): 459-462.

[7] Miracco C, Cosci E, Oliveri G,et al. Protein and mRNA expression of autophagy gene Beclin1 in human brain tumours [J]. Int J Oncol, 2007, 30(2): 429-436.

[8] Daniel F, Legrand A, Pessayre D,et al. Beclin 1 mRNA strongly correlates with Bcl-XLmRNA expression in human hepatocellular carcinoma [J]. Cancer Invest, 2007,25(4): 226-231.

[9] Ahn CH, Jeong EG, Lee JW,et al. Expression of beclin-1,an autophagy-related protein, in gastric and colorectal cancers[J]. APMIS, 2007, 115(12): 1344-1349.

[10] 王日玮. 自噬基因Beclin1与乳腺癌的关系[J]. 中国普通外科杂志, 2012, 21(5): 591-596.

[11] 周国华, 姚维深, 张旭, 等. Beclin1和LC3在乳腺导管癌组织中的表达[J]. 海南医学, 2013, 24(5): 630-632.

[12] 陈波, 金锋, 姚凡, 等. 乳腺癌中Beclin 1基因下调机制的研究[J]. 中国微生态学杂志, 2009, 21(12): 1070-1072.

[13] Cao Y, Klionsky DJ. Physiological functions of Atg6/Beclin1: a unique autophagy-related protein [J]. Cell Res,2007, 17(10): 839-849.

[14] Furuya T, Kim M, Lipinski M,et al. Negative regulation of Vps34 by Cdk mediated phosphorylation [J]. Mol Cell,2010, 38(4): 500-511.

[15] Luo S, Rubinsztein DC. Apoptosis blocks Beclin1-dependent autophagosome synthesis:an effect rescued by Bcl-XL [J]. Cell Death Differ, 2010, 17(2): 268-277.

Correlation research between Beclin1 expression level and clinical stage of breast cancer

Yunhao PAN1, Yan GU2, Yang SHI3, Cheng WANG1*
1. Department of Breast Surgery, Huangpu District Central Hospital, Shanghai 200002, China;2. Department of General Surgery, Shanghai Ninth People’s Hospital, Shanghai Jiaotong University School of Medicine, Shanghai 200011, China; 3. Department of Oncology, Huangpu District Central Hospital, Shanghai 200002, China

ObjectiveBeclin1 is a gene associated with autophagy, the purpose of this research is to clarify the correlation between the expression level and clinical stage of breast cancer.MethodsTotal of 200 cases of breast cancer and 20 cases of benign breast diseases were randomly selected from Central Hospital of Shanghai Huangpu District during 2003-2012 years. 220 paraffin specimens were collected and restained to detect the expression of Beclin1 using immunohistochemical staining technique.ResultsThe expression level of Beclin1 in breast cancer Primary carcinoma tissue was significantly higher than that in invasive carcinoma tissues, and the lower the differentiation of breast cancer cells, the lower the expression level of Beclin1.ConclusionThe results suggest that Beclin1 detection has critical value in the diagnosis and treatment of breast cancer, and may be used as candidate molecular marker to predict the pathological stage of breast cancer.

Beclin1; Autophagy; Breast neoplasm; Pathological staging

基金：上海市黄浦区卫生系统优秀青年人才培养项目（No.(2013)HWR/Q-16）

汪成，E-mail：wangcheng1212@sina.cn