中速、变速和高速离心方法对制备洗涤红细胞质量的效果对比

黄艳华

(韶关市中心血站成分科，广东 韶关 512026)

中速、变速和高速离心方法对制备洗涤红细胞质量的效果对比

黄艳华

(韶关市中心血站成分科，广东 韶关 512026)

目的观察不同离心方法对制备洗涤红细胞质量的影响。方法选取经无偿献血收集的悬浮红细胞36袋(ALT>40 U·L-1)，随机分为中速、变速、高速3组，每组12袋。采用人工三联袋生理盐水洗涤法，分别以不同离心速度制备洗涤红细胞，制备完毕后检测其红细胞回收率、白细胞清除率、血浆蛋白清除率及血红蛋白含量、上清蛋白质含量和溶血率。结果3组洗涤红细胞的红细胞回收率、血浆蛋白清除率、上清蛋白质含量比较差异无统计学意义(均P>0.05)；中速组洗涤红细胞的白细胞清除率、血红蛋白含量及溶血率指标明显优于变速组与高速组(P<0.05)。结论在满足洗涤红细胞制备标准的情况下，采用中速离心方法制备的洗涤红细胞质量较高。

离心方法； 洗涤红细胞； 白细胞清除率； 效果对比

洗涤红细胞是指健康全血去除全部血浆与90%白细胞及血小板，是外科常用的成分输血制品，临床常用于自身免疫性疾病、高钾血症及对血浆蛋白过敏的患者[1]。近年来随着血液制备技术的不断提高，洗涤红细胞在临床上应用越来越广泛，受到了临床医生的高度认可。2001年版的洗涤红细胞制备国标[2]为红细胞回收率≥70%，白细胞清除率≥80%，血浆蛋白清除率≥98%；随着临床上对洗涤红细胞的要求越来越高，旧版的3种要求已不合时宜，2012年7月1日开始实施的新版《全血及成分血质量要求》[3]中对于洗涤红细胞制备的要求为血红蛋白含量≥36 g、上清蛋白质含量<1.0 g、溶血率<红细胞总量的0.8%和无菌生长。在制备过程中，离心速度为影响洗涤红细胞质量的关键因素，本研究对采用3种不同离心速度制备的洗涤红细胞进行检测分析，旨在为制定科学、有效的制备方法提供客观依据。

1 材料与方法

1.1 制备材料

韶关市中心血站2016年11月至2017年3月经无偿献血收集的外观正常、血袋无破损，2～6 ℃保存期在3～4 d 的悬浮红细胞36袋，均为2 U·袋-1，ALT>40 U·L-1；500 mL生理盐水和500 mL 生理盐水洗涤联袋(上海输血技术有限公司)。

1.2 制备设备

无菌接合机(型号：902880/compodak，厂家：德国费森尤斯公司)，SIGMA8K大容量低温机(河南兄弟仪器设备有限公司)，高效热合机(型号：SE330，厂家：Centron Technologies公司)，血细胞计数仪(日本Sysmex Kx-21)，迈瑞BS-420全自动生化分析仪(测定氰化高铁血红蛋白吸光度值)，752型可见分光光度计(上海光谱仪器有限公司)，血浆游离血红蛋白试剂盒(瑞尔达生物科技有限公司)，培养基(南京便诊生物科技有限公司)。

1.3 制备方法

将悬浮红细胞随机分为中速、变速和高速3组，每组12袋。将1袋500 mL生理盐水与悬浮红细胞使用无菌接管机分别与洗涤联袋接合，灌入150 mL生理盐水后混匀离心一次，分出上清液和白膜，挤出上层清液和白膜，重复上述操作进行第2、3次离心，最后加入生理盐水配成70%体积比的红细胞悬液，即为洗涤红细胞悬液。中速组第一次离心速度为3500 r·min-1，温度4 ℃，持续12 min；第2、3次离心时间为10 min。变速组第一次离心速度为3000 r·min-1，温度4 ℃，时间12 min；第2、3次离心速度为3800 r·min-1，温度4 ℃，时间10 min。高速组第一次离心速度为4000 r·min-1，温度4 ℃，持续10 min；第2、3次离心时间6 min。

1.4 检测指标

制备完毕后严格按照《血站技术操作规程(2015版)》(国家卫生计生委.国卫医发〔2015〕95号)采样并检测每袋悬混液白细胞总数、红细胞总数及血浆白蛋白含量，计算红细胞回收率、白细胞清除率、血浆蛋白清除率；采用血细胞计数仪检测血红蛋白含量、生化分析仪检测上层清蛋白质含量及溶血率。

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 3组洗涤红细胞红细胞回收率、白细胞清除率及血浆蛋白清除率比较

3组洗涤红细胞的红细胞回收率、血浆蛋白清除率比较差异无统计学意义(均P>0.05)，中速组洗涤红细胞的白细胞清除率明显高于变速组和高速组(P<0.05)，见表1。

组别n红细胞回收率白细胞清除率血浆蛋白清除率中速组1282．43±2．6692．46±1．6899．23±0．46变速组1281．79±2．5887．52±1．44∗98．75±0．39高速组1282．56±2．7987．39±1．57∗98．94±0．51

*P<0.05与中速组比较。

2.2 3组洗涤红细胞血红蛋白含量、上清蛋白含量及溶血率比较

3组洗涤红细胞的上清蛋白含量比较差异无统计学意义(P>0.05)，中速组血红蛋白含量及溶血率指标明显优于其他2组(P<0.05)，见表2。

组别n血红蛋白含量m/g上清蛋白含量m/g溶血率/%中速组1271．63±6．380．72±0．260．43±0．11变速组1261．51±3．94∗0．68±0．330．64±0．17∗高速组1262．49±4．35∗0．71±0．290．62±0．09∗

*P<0.05与中速组比较。

3 讨论

洗涤红细胞的质量要求从原来的针对红细胞回收率、白细胞及血浆蛋白清除率的要求转变为针对血液制品本身上来，2012版《全血及成分血质量要求》[3]的标准实用性更强，但同时也对制备过程提出了更加严格的要求。血站常用的洗涤红细胞方法为全自动机洗和手工洗，由于全自动机洗成本较高，目前尚未广泛应用[4]，本血站多采用手工洗的方式，离心速度在制备过程中对洗涤红细胞质量起着重要影响。本研究结果显示，中速组在白细胞清除率、血红蛋白含量及溶血率指标明显优于其他2组，证实了白细胞的清除效果与离心条件有关[5]。由于粒细胞与成熟度低的红细胞比重较为接近，中速离心条件下，粒细胞可以悬浮在白膜下易于分离。变速条件下，虽然第一次离心可以达到清除白细胞的效果，但由于第2、3次采用的是低速离心，以致白细胞不能够很好地悬浮在白膜下，而是置于红细胞上层液中，影响清除与红细胞的回收。高速离心方式虽然可以达到白细胞悬浮在白膜下，但由于离心速度过快，易导致白细胞呈片状黏附在血袋壁上，影响去除效果。也有报道[6]指出，离心2次红细胞回收率高于离心3次，但其白细胞清除率存在达标率低的缺点，所以，国内主流报道仍倾向于离心3次[7]。

综上所述，在满足洗涤红细胞质量标准的情况下，采用中速离心3次的制备方法获得的洗涤红细胞质量较优。

[1] 刘妹，邓小军，王丹.不同离心方法对制备洗涤红细胞质量的影响[J].临床输血与检验，2016，18(1)：56-58.

[2] 中华人民共和国卫生部.GB18469-2001全血及成分血质量要求[S].北京：中国标准出版社，2001.

[3] 中华人民共和国卫生部、中国国家标准化管理委员会.GB18469-2012全血及成分血质量要求[S].北京：中国标准出版社，2012.

[4] 徐亮.不同方法制备洗涤红细胞检测指标比较思路构建[J].中国民康医学，2016，28(12)：30-31,32.

[5] 纪云鹏，朱红芹，蔡莉.对洗涤红细胞质量控制项目删除白细胞清除率的探讨[J].中国输血杂志，2014，27(10)：1044-1045.

[6] 周俊，吴涛，姜瑞民，等.悬浮红细胞制备洗涤红细胞不同方式的比较分析[J].中国输血杂志，2013，26(9)：887-888.

[7] 庄运芳.红细胞保存液混悬洗涤红细胞的制备及质量控制[J].现代医院，2016，16(8)：1183-1185.

2017-05-09

R457

A

1009-8194(2017)09-0017-02

10.13764/j.cnki.lcsy.2017.09.008

(责任编辑：钟荣梅)