热应激初期肉兔血象指标及与耐热时间的相关性研究

李丛艳，李 娟，邝良德，梅秀丽，郭志强，雷 岷，谢晓红*

（1.四川省畜牧科学研究院，四川成都 610066；2.动物遗传育种四川省重点实验室，四川成都 610066；3.成都市农林科学院畜牧研究所，四川成都 611130）

热应激初期肉兔血象指标及与耐热时间的相关性研究

李丛艳1,2，李 娟3，邝良德1,2，梅秀丽1,2，郭志强1,2，雷 岷1,2，谢晓红1,2*

（1.四川省畜牧科学研究院，四川成都 610066；2.动物遗传育种四川省重点实验室，四川成都 610066；3.成都市农林科学院畜牧研究所，四川成都 611130）

试验旨在研究热应激初期肉兔血象指标与耐热时间的关系，为筛选肉兔耐热性候选评价指标提供参考。选取同期出生、体重相近的健康4月龄新西兰兔55只，随机分配在（21±1）℃适温和（38±1）℃高温环境中，记录每只兔的耐热时间，并在热应激起始（HS0）和8 h（HS8）时采集血液，测定血象指标及其变化（△HS）情况。结果表明：热应激极显著影响HS8的中性粒细胞百分比（NEUT%）、中性粒细胞/淋巴细胞（N/L）、淋巴细胞百分比（LYMPH%）（P<0.01），显著影响白细胞计数（WBC）、LYMPH%、N/L及平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）的△HS（P<0.05），极显著影响血小板（PLT）、NEUT%、淋巴细胞计数（LYMPH#）以及单核细胞计数（MONO#）的△HS（P<0.01）；HS0时的嗜酸性粒细胞百分比（EO%）、嗜酸性粒细胞计数（EO#）及单核细胞百分比（MONO%）的△HS与耐热时间呈极显著正相关（P<0.01），MONO#的△HS与耐热时间呈显著正相关（P<0.05）。推测EO%、EO#以及MONO#可能是重要的耐热性评价候选指标。

热应激；血象指标；耐热时间；肉兔

肉兔全身被毛且几乎没有功能性汗腺，当夏季环境温度较高时难以消除体内多余的热量，非常容易出现热应激，导致代谢功能紊乱，采食量下降，饲料利用率降低，生长速度和机体抵抗力下降，公、母兔繁殖性能降低等[1]，是炎热季节和地区肉兔生产的主要限制因素。前人研究表明，家兔对炎热的耐受力受遗传因素制约，可能是一个数量性状，使得通过培育耐热肉兔品系以提高兔自身耐热力、从根本上消除兔的热应激成为可能[2-3]。血液是机体运输营养物质和代谢产物的载体，是反映机体状况的重要指标。研究发现，血液红细胞钾、皮质酮、三碘甲状腺原氨酸、异嗜性粒细胞与淋巴细胞比值、T淋巴细胞亚群、球蛋白、碱性磷酸酶和超氧化物歧化酶等指标与牛[4]、羊[5-6]、鸡[7-10]、兔[11]等的耐热性有关。然而，尚未发现血象指标与畜禽耐热性关系的研究。本试验旨在研究热应激初期肉兔血象指标的变化及与耐热性的关系，为建立肉兔耐热性评价指标提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验设计 选择同期出生、体重为（2 313±273）g的健康4月龄新西兰兔55只，随机分配在2个人工温控室内，并采用智能温湿度记录仪（APRESYS，179-TH）测定实时温湿度。其中适温组（N=25，公兔11只，母兔14只）采用空调降温，人工加湿，环境温度为（21±1）℃；热应激组（N=30，公母各半）采用暖风加热，自动控温，人工加湿，环境温度为（38±1）℃。预试期5 d，所有兔只均处于适温环境中，试验一直持续到热应激组所有兔只死亡。试验于2015年7月在四川省畜牧科学研究院种兔场温控室内进行，兔自由饮水和采食，饲养管理条件一致（日粮主要营养水平为粗蛋白16.0%，粗纤维14.0%，消化能10.50 MJ/kg）。

1.2 测定指标和方法

1.2.1 血样收集与处理 在热应激起始（HS0）和热应激8 h（HS8）时所有兔只均采集全血2 mL/只，EDTA抗凝，-20℃保存待测。

1.2.2 血象指标测定 血液样品在成都中医药大学第三附属医院检验科使用SYSMEX（西森美康）XS-500i全自动血球分析仪及其配套试剂进行测定，测定的血象指标：白细胞计数（WBC）、红细胞计数（RBC）、血红蛋白浓度（HGB）、血小板计数（PLT）、红细胞压积（HCT）、中性粒细胞百分比（NEUT%）、淋巴细胞百分比（LYMPH%）、中性粒细胞/淋巴细胞（N/L）、单核细胞百分比（MONO%）、嗜酸性粒细胞百分比（EO%）、嗜碱性粒细胞百分比（BASO%）、平均红细胞体积（MCV）、平均红细胞血红蛋白含量（MCH）、平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）、红细胞体积分布宽度标准差（RDW-SD）、红细胞体积分布宽度变异系数（RDW-CV）、血小板压积（PCT）、血小板体积分布宽度（PDW）、平均血小板体积（MPV）、大血小板比率（P-LCR）、中性粒细胞计数（NEUT#）、淋巴细胞计数（LYMPH#）、单核细胞计数（MONO#）、嗜酸性粒细胞计数（EO#）、嗜碱性粒细胞计数（BASO#）等血象指标。

1.2.3 耐热时间测定 通过人工观察，准确记录热应激组中每只兔的死亡时间，以正式试验开始为起点计算出每只兔在高温环境下的存活时间，即兔的耐热时间。

1.3 统计分析 利用SPSS17.0软件中的一般线性模型（GLM）程序进行方差分析，模型中包括性别效应，结果用最小二乘均值±标准误表示。同时利用软件中简单相关分析模型（CORR）程序进行血象指标与耐热时间的相关性分析。

2 结 果

2.1 热应激初期肉兔血象指标的变化 由于HS8时热应激组已经有2只兔死亡，因此HS8时统计数据为28只。由表1可见，热应激8 h时大多数血象指标无显著变化（P<0.05）。与适温组相比，WBC、PLT、MCHC以 及 MONO#在 HS0和 HS8的组间差异均不显著，而其在热应激0～8 h的变化值（△HS）在组间的差异均达到显著（P<0.05）或极显著水平（P<0.01），表明热应激显著或极显著影响WBC、MCHC及MONO#的△HS；热应激组HS8的NEUT%及N/L极显著高于HS0时以及适温组在HS0和HS8时的值（P<0.01），其△HS的组间差异也达到显著（P<0.05）或极显著水平（P<0.01），表明热应激显著升高HS8的NEUT%及N/L；热应激组HS8时的LYMPH%及LYMPH#极显著低于HS0（P<0.01），且极显著低于HS0和HS8时适温组的值（P<0.01），其△HS的组间差异达到显著水平（P<0.05），表明热应激显著影响LYMPH%及LYMPH#。尽管RBC和RDW-CV的组间差异显著，但可以看出，HS0的热应激组和适温组间差异不显著（P>0.05），HS8时的热应激组和适温组间差异不显著（P>0.05），热应激组与适温组在HS0和HS8之间的差异均不显著（P>0.05），且其△HS无显著组间差异，表明热应激对RBC和RDW-CV无显著影响。

2.2 肉兔血象指标及其变化值与耐热时间的相关分析 由表2可知，HS0的EO%以及EO#与肉兔的耐热时间呈极显著正相关（P<0.01）；MONO%在热应激0～8 h的△HS与耐热时间呈极显著正相关（P<0.01）；MONO#在热应激0～8 h的△HS与耐热时间呈显著正相关（P<0.05）；其余血象指标与肉兔耐时间无显著相关（P>0.05）。

3 讨 论

血象是指血液的一般检验（以往称为血常规检查）的结果，是对外周血中血液细胞数量和质量的化验检查，是用以评判机体状态、诊断病情的常用辅助检查手段之一。

红细胞、血红蛋白是血液运送氧气的最主要的媒介。本研究中，外周血RBC、HGB、HCT、MCV、MCH、RDW-SD、RDW-CV在热应激前后均无显著变化，仅MCHC在0～8 h的△HS显著高于适温组，但总体呈下降趋势，这与Khalil等[12]发现热应激1 h对新西兰公兔及布拉迪红公兔的RBC、Hb、HCT均无显著影响的结果一致，这可能是由于炎热条件下，机体的代谢产热降低，导致需氧量降低引起，而需氧量的降低在维持体热平衡中具有重要作用。但由于测定时间较短，血象指标尚未出现显著变化。Seley于1960年发现热应激会降低促肾上腺皮质激素（ACTH）水平，进而降低RBC、Hb以及PCV。本研究结果与Okab等[13]发现的夏季热应激引起成年新西兰公兔RBC、Hb、HCT、MCHC显著或极显著降低的结论不一致，但总体趋势相同。此外，Ondruska等[14]研究发现，持续1个月、每天12 h的（36±3）℃的热应激处理条件下新西兰成年公母兔在热应激后RBC与HCT均显著降低，生长公、母兔RBC与HCT在热应激前后无显著变化，但仍有下降趋势，与本试验结果相同或趋势一致。进一步的相关分析表明，RBC、HGB、HCT、MCV、MCH、RDW-SD、RDW-CV与肉兔的耐热时间均无显著相关，表明它们与肉兔的耐热性关系不大，不适宜作为肉兔耐热性评价指标。

表1 热应激初期肉兔血象的变化

血小板是最小的血细胞，可以通过多种应激被激活从而发挥作用，MPV、PDW和P-LCR等参数可简单快捷地反映血小板的形态变化，显示其活化程度。本研究中热应激对PCT、PDW、MPV以及P-LCR均无显著影响，表明热应激不能显著激活血小板。热应激8 h的PLT与0 h以及适温组相比均无显著差异，但其0～8 h的△HS极显著低于适温组，这可能是由于热应激引起血小板凝集，从而降低外周血中血小板数量。Denise等[15]对人的研究结果表明，热应激（运动或被动加热引起）使得血小板数量上升，这一结果与本研究结果不同，可能是由于物种的差异引起。本试验中，相关分析表明PLT、PCT、PDW、MPV以及P-LCR与肉兔耐热时间均无显著相关，表明它们不能反映肉兔的耐热性能，不宜用作耐热性评价指标。

白细胞主要作用是吞噬细菌、防御疾病，一般以白细胞计数和白细胞分类计数表示。Redwine等[16]研究表明，应激或应激激素（儿茶酚胺类和糖皮质激素类）会引起血液中WBC以及相对含量的显著变化。本研究中发现，热应激极显著降低8h时的LYMPH%及LYMPH#，极显著升高8 h的NEUT%以及N/L，且热应激组WBC和LYMPH%以及LYMPH#和MONO#的△HS均显著或极显著低于适温组，而NEUT%以及N/L显著或极显著高于适温组。本研究结果与Dhabhar等[17]发现应激引起WBC降低，LYMPH%显著降低、NEUT%显著升高的结果一致，与Okab等[13]发现的新西兰公兔在夏季热应激季节的WBC值极显著高于春季的结果相反，而与Khalil等[12]及Ondruska等[13]的研究结果呈部分一致、部分相反的结论，推测这可能是由于家兔的品种、性别、年龄以及热应激方式（急性和慢性）的不同引起的。本试验中，进一步的相关分析表明，热应激0 h时的EO%（r=0.523）及EO#（r=0.521）与肉兔耐热时间呈极显著正相关，MONO%（r=0.482）及MONO#（r=0.441）在热应激0～8 h的△HS与肉兔耐热时间呈极显著或显著正相关。热应激期间机体维持体内生化指标的稳定是耐热的基础[18]。本研究的方差分析结果表明，热应激对EO%及EO#均无显著影响，说明EO%和EO#在热应激条件下较为稳定，可能是肉兔耐热性评价候选指标之一；热应激对MONO%及其△HS均无显著影响，其△HS与耐热时间的显著相关无实际意义，因此MONO%在热应激0～8 h的△HS不适宜作为耐热性候选指标；而热应激对MONO#在0～8 h的△HS有极显著影响，且其△HS与耐热时间呈显著相关，表明MONO#的△HS与耐热时间的相关意义较大，可以作为耐热性候选指标之一。

表2 肉兔血象指标与耐热时间的相关

4 结 论

通过对（38±1）℃条件下肉兔血象指标的变化分析结果表明，热应激极显著升高HS8时的NEUT%和N/L，极显著降低LYMPH%，显著或极显著影响 WBC、PLT、LYMPH%、LYMPH#、MONO#、NEUT%、N/L以及MCHC的△HS。相关分析结果发现，HS0的EO%、EO#以及MONO#的△HS与耐热时间的正相关具有实际意义，推测EO%、EO#以及MONO#可能是重要的耐热性评价候选指标。

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S829.1

A

10.19556/j.0258-7033.2017-12-111

2017-07-26；

2017-09-12

四川省公益性科研院所基本科研业务费项目(SASA 2017A02)；四川省“十三五”畜禽畜种攻关项目（2016NYZ00 46）；国家兔产业技术体系（CARS-43-D-3）；四川省财政运行专项（SASA2014CZYX005）

李丛艳（1983-），女，湖南邵阳人，硕士，助理研究员，主要从事家兔遗传育种研究，E-mail：licongyan0311@sina.com

*通讯作者：谢晓红(1964-)，女，研究员，主要从事家兔育种与饲养管理研究，E-mail：xiexiaohongl@sina.com